仪器分析实验作业

1实验4混合苯系物分析实验（气相色谱法）一、实验目的1.通过本实验了解气相色谱仪的基本结构及操作方法；2.掌握用保留时间定性，归一化法定量测定法；3.加深对理论塔板数、理论塔板高度及分离度等概念的理解及计算方法。二、实验原理苯、甲苯、乙苯的混合物都是苯系物，这三种物质都带有苯环结构，它们的沸点分别是80.10、110.63、136.19℃，用一般的方法较难分离及测定，用气相色谱法分析既快速又准确。混合苯系物在一定的色谱条件下被分离后，进入氢火焰(或热导)检测器，得到每一组分的色谱峰，用标样对照，根据保留时间进行定性。把所有出峰组分的含量之和按100%计的定量方法称为归一化法。使用归一化法定量，要求试样中的各个组分均流出，且在检测器上有信号响应。样品中各组分的百分含量可用峰面积归一化法进行计算。%100332211fAfAfAfAwiii式中wi表示i组分的质量分数，Ai表示i的组分的峰面积。fi为i组分的相对校正因子。归一法的特点是定量结果与进样量无关，不受操作条件影响；要求全出峰，某些不需要定量的组分也必须测出其峰面积及fi′值，计算较麻烦；不需要标准样；测量低含量尤其是微量杂质时，误差较大。三、仪器与试剂气相色谱仪（带FID检测器）；色谱工作站；微量进样器（1uL）；色谱柱：不锈钢柱，内径2mm，长1.5m，内装3%OV-101/ChromosorbWAWDMCS80目~100目；氮气钢瓶，空气压缩机，氢气发生器；试剂：苯、甲苯、乙苯和正已烷（均为分析纯）四、实验条件1、固定相：不锈钢填充柱，内径2mm，长0.5m，内装3%OV-101/ChromosorbWAWDMCS80目~100目2、温度：进样口温度150℃；柱温50℃左右；检测器温度150℃3、气体流量：载气为氮气30mL/min，空气300mL/min，氢气30mL/min4、检测器：FID，灵敏度（根据仪器调整到最佳）5、进样量：0.2uL左右五、实验步骤21、标样配制：取一个称量瓶在天平上准确称重，分别滴入苯、甲苯、乙苯和环已烷各0.5克左右，每加一种试剂后准确称重，记下各组分的重量，算出百分含量。2、进标样开启色谱仪，按实验条件设置色谱参数，待基线平稳后，用标样把1uL微量进样器洗3-5次，然后往色谱仪内注射0.2uL标样，采集色谱数据。3、进待测样用待测样把1uL微量进样器洗3-5次，然后往色谱仪内注射0.2uL标样。采集色谱数据。4、结果计算（1）对比苯、甲苯、乙苯和正已烷标样和混合物的保留时间，在图谱上标出各峰的名称；（2）以苯为内标，计算苯、甲苯、乙苯的相对较正因子；计算苯、甲苯、乙苯各自的理论塔板数；（3）计算待测样中苯、甲苯、乙苯的百分含量；（4）计算苯和甲苯、甲苯和乙苯的分离度。六、注意事项1.吸取标样和样品溶液的微量注射器必须专用。不得将针芯拉出，否则会造成损坏。2.进样速度尽量快，以防色谱峰展宽。3.进样的同时按下数据采集键，以保证计时准确。七、思考题1.气相色谱仪的基本设备包括哪几部分?（用线路连接方框图表示，并注明实际所用仪器的型号）。2.同样的实验条件下，同一色谱柱对不同化合物的理论塔板数是否相同？3.气相色谱定量分析中的归一化法有什么特点？在应用上要注意些什么问题？实验5高效液相色谱法测定甲硝唑片的含量一、实验目的1.学习高效液相色谱仪的操作。2.掌握高效液相色法测定甲硝唑片含量的基本原理和操作方法。二、实验原理甲硝唑(Metronidazole)为合成咪唑类抗阿米巴病及滴虫病药，口服吸收迅速而完全，生物利用度80％以上。体内代谢主要与葡萄糖醛酸结合，少量发生侧链氧化，代谢物与原型药物(约20％)自尿中排出，亦可通过其它体液排出体外。甲硝唑在乙醇中略溶，在水或氯仿中微溶，在乙醚中极微溶解。3采用高效液相色谱法测定甲硝唑片的含量。根据含量与峰面积成正比的关系，绘制标准曲线，测定未知的甲硝唑含量。甲硝唑为抗阿米巴病及滴虫药,用于各种阿米巴病及滴虫病,也可用于厌氧菌感染,并作为抗厌氧菌的首选药而广泛应用于临床。1978年世界卫生组织将本品定为抗厌氧菌感染的基本药物。我国1985年版药典收载甲硝唑为抗原虫和抗厌氧菌药物。甲硝唑的化学名称为2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇，分子式C6H9N3O3，结构式为（如右图）：甲硝唑片一般规格为0.2g，为白色或类白色片。三、仪器和试剂1.岛津LC-10A高效液相色谱仪(包括SPD-10A紫外检测器,CR-7A数据处理器)2.甲硝唑对照品3.甲硝唑片样品:河南华鑫制药厂四、实验步骤1.对照品溶液的制备精确称取甲硝唑对照品约12mg置25mL容量瓶中,用适量流动相溶解后稀释至刻度,摇匀,即得。2.色谱条件流动相:水-甲醇(80:20)，流速1.0mL/min,检测波长254nm,进样量20μL,理论板数9629。3.样品溶液的制备取样品10片,研细,精确称取适量(约相当于甲硝唑500mg)置50mL量瓶中,用适量甲醇溶解后,用流动相定容,静置30min。精密量取5mL上清液置100mL量瓶中,用流动相定容,混匀,过滤。4.标准曲线的绘制精确称取甲硝唑对照品适量（约12mg）置25mL容量瓶中,用适量甲醇溶解后,用流动相定容,稀释使成每1mL含对照品480、240、120、60、30μg溶液系列,按上述色谱条件操作,以甲硝唑浓度(C,mg/L)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标,绘制标准曲线，得回归方程。5.精密度精密吸取甲硝唑对照品溶液20μL注入色谱仪,重复测定5次,测定其RSD值。6.样品测定用上述3中配制好的样品进行测定，并记录保留时间；同时另以中国药典法进行测定比较。五、数据及处理1.计算系列甲硝唑对照品和待测甲硝唑的峰面积(3次平均值)。2.以对照品的峰面积对相应浓度作标准曲线。3.从标准曲线上求得甲硝唑片中甲硝唑的含量。序号标样浓度μg·mL-1保留时间tR（min）色谱峰面积A色谱峰高度H1302603120424054806待测甲硝唑六、问题讨论1.用标准曲线法定量的优缺点是什么？2.若标准曲线用甲硝唑含量对峰高作图，能给出准确结果吗？与本实验的标准曲线相比何者4优越？为什么？