克林霉素磷酸酯注射液HPLC分析方法确认方案

######有限公司文件编号VP—03--39第1页共20页克林霉素磷酸酯注射HPLC分析方法确认报告######制药有限公司######有限公司文件编号VP—03--39第2页共20页确认方案审批表确认方案名称:克林霉素磷酸酯注射液HPLC分析方法确认方案确认方案编号：审批程序部门签名日期起草检验室审核QC主任质量保证部批准人质量负责人######有限公司文件编号VP—03--39第3页共20页目录1概述2确认目的3确认范围4确认小组成员与职责5确认方案的审核与批准6进度计划7确认内容8变更与偏差9确认结果与评价报告######有限公司文件编号VP—03--39第4页共20页1概述克林霉素磷酸酯注射液收载于国家药品标准，含量及有关物质的检验均使用高效液相色谱仪进行检验，两个项目检验参数等条件完全相同，且我公司未对《中国药典》2010年版二部中的方法进行过任何改变，因此按照2010新版GMP要求，需要进行分析方法确认。本确认方案使用LC600—梯度型高效液相色谱仪对克林霉素磷酸酯注射液采用《中国药典》2010年版二部“含量”、“有关物质”的检验方法进行确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。含量、有关物质需确认项目如下：确认项目准确度精密度专属性定量限含量有关物质“是”代表该项内容需确认，“否”代表该项内容不需要确认2确认目的通过对克林霉素磷酸酯注射液含量及有关物质的检验方法的确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。3确认范围本确认方案适用于克林霉素磷酸酯注射液含量、有关物质的检验方法进行确认。4确认小组成员与职责部门及职务确认工作中职责检验员确认执行人：负责起草确认方案，执行确认方案，负责验证过程中相关的检验操作，收集整理数据，起草确认报告。质量保证部负责确认方案及确认报告的审核；审核确认过程中发生偏差的解决方案，以及采取纠正措施。QC主任确认组长：负责确认方案的审核并组织实施，审核确认报告。质量负责人确认总负责人：负责确认方案、报告的批准######有限公司文件编号VP—03--39第5页共20页5确认方案的起草与审批5.1确认方案的起草与审批：确认方案由检验室起草，确认小组会审，质量负责人批准实施。5.2确认方案的培训：确认方案经批准后及实施前，由QC主任对本次确认方案实施的检验人员和相关人员进行培训。5.3确认方案的修改：确认方案如需修改，由质量负责人批准实施，在确认报告中体现。6进度计划整个确认活动实施时间：确认时间：从_____年___月__日至_____年__月__日；7确认内容7.1确认前仪器及材料检查7.1.1确认前，对下列试验用仪器和材料进行检查7.1.1.1LC600—梯度高效液相色谱仪7.1.1.2.BS21S型分析天平7.1.1.3色谱柱：7.1.1.4对照品和试剂7.1.1.5其他一些辅助的玻璃仪器（如容量瓶、移液管等）7.1.2可接受标准：仪器和用具经校验且在效期内；对照品、试液、试剂与试药符合验证要求且在效期内；色谱柱、色谱仪使用状态正常。7.1.3结果记录：将结果记录在附件1《确认前仪器及材料检查表》中。7.2确认及文件检查7.2.1确认前，对与此次确认相关的文件进行检查7.2.1.1克林霉素磷酸酯注射液检验操作规程（QC-SOP-04-002）7.2.1.2LC600—梯度型高效液相色谱系统标准操作及维护保养规（QC-SOP-A-12）7.2.1.3LC600—梯度型高效液相色谱系统维护保养及清洁操作规（QC-SOP-A-12）7.2.1.BS21S型分析天平标准操作规程（QC-SOP-A-02）######有限公司文件编号VP—03--39第6页共20页7.2.1.BS21S型分析天平维护保养及清洁标准操作规程（QC-SOP-A-02）7.2.1.6高效液相色谱法标准操作规程（）7.2.1.7克林霉素磷酸酯注射液HPLC分析方法的验证方案（）7.2.1.9检验方法验证（确认）管理规程（QM--QC-027）7.2.2可接受标准：所有文件都应为现行版本，且经过批准。7.2.3结果记录：将结果记录在附件2《确认前文件检查表》中。7.3人员培训确认7.3.1检查并确认所有参与执行确认的人员是否已得到培训，并在培训记录上签字。7.3.2可接受标准：验证小组成员均已经过培训，并在培训记录上签字。7.3.3确认结果：将确认结果填入附件3《人员培训、参与情况确认记录》中。7.4确认项目7.4.1“含量”项确认7.4.1.1重复性/准确度7.4.1.1.1空白的制备：以磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾10.54g，加水溶解稀释成775ml，用80%磷酸调节pH值2.5）-乙腈（775：:225）流动相作为空白液。7.4.1.1.2对照液制备：取克林霉素磷酸酯对照品约4.8mg，精密称定，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照液；对照液平行制备2份，标识为S-1、S-2。7.4.1.1.3样品制备：取克林霉素磷酸酯约4.8mg，精密称定，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为样品液。同方法：平行制备浓度梯度为标示量80%、100%、120%的样品各3份，标识为A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9。7.4.1.1.4方法描述：色谱条件与系统适用性试验：用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾10.54g,加水775ml使溶解,用85%磷酸溶液调节pH值至2.5)—乙腈(775:225)为流动相;检测波长为210nm。理论塔板数按克林霉素磷酸酯峰计算，应不低于1500。克林霉素磷酸酯与相邻峰的分离度应符合规定。测定法：精密量取本品1.0ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取2.0ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液，取10μl注入液######有限公司文件编号VP—03--39第7页共20页相色谱仪，记录色谱图；取克林霉素磷酸酯对照品约120mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。同法测定，按外标法计算。7.4.1.1.5测定：1）取S-1精密量取10μl，注入液相色谱仪记录色谱图，该溶液连续进样2针。2）取S-2精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，该溶液连续进样2针。3）分别精密量取A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9溶液各10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。4）计算S-1和S-2的F值，相对标准偏差应≤2.0%，按外标法以峰面积计算。计算A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9溶液的含量。结果计算含量（cx）=CR×Ax/ARcx--------为供试品的浓度；CR---------为对照品的浓度；Ax--------为供试品的峰面积；AR---------为对照品的峰面积。7.4.1.1.6可接受标准：A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9，各浓度样品含量的RSD%值应≤2.0%。7.4.1.1.7确认记录和数据确认数据和结果记录于附件4《含量精密度/准确度确认数据和结果》中。7.4.1.2专属性7.4.1.2.1测试方法：7.4.1.2.1.1取空白液进样1针，记录色谱图。7.4.1.2.1.2精密量取本品1.0ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取2.0ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液，取10μl注入液相色谱仪，进样1针，记录色谱图，获得主成分主峰的保留时间。7.4.1.2.1.3取克林霉素磷酸酯对照品约120mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取20μl，注入液相色谱仪，进样1针，记录色谱图，获得主成分主峰的保留时间。7.4.1.2.1.4可接受标准：溶剂空白相应的峰对样品测定有无明显的干扰；供试品图谱中主成分主峰保留时间与对照品图谱中主成分主峰保留时间一致。######有限公司文件编号VP—03--39第8页共20页7.4.1.2.1.5确认记录和数据确认数据和结果记录于附件5《专属性确认数据和结果》中。7.4.2“有关物质”项确认7.4.2.1专属性7.4.2.1.1精密量取本品2.0ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，制成每1ml中含3mg的溶液，作为供试品溶液。7.4.2.1.2对照溶液；精密量取上述供试品溶液1.0ml，置100ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成每1ml中含0.03mg的溶液，作为对照溶液。7.4.2.1.3照含量测定相下的方法试验，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为记录仪满量程的10%～25%，再取供试品溶液和对照溶液各10ul注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍，7.4.2.1.4可接受标准：供试品溶液如显杂质峰，与对照溶液主峰面积比较，单杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的4.0倍（4.0%）；各杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰面积的6.0倍（6.0%）。忽略不计小于对照溶液主峰面积10.0%的色谱峰。7.4.2.1.5确认记录和数据确认数据和结果记录于附件5《专属性确认数据和结果》中。7.4.2.2精密度7.4.2.2.1测试程序7.4.2.2.1.1取克林霉素磷酸酯约120mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液D-2。7.4.2.2.1.2精密量取本品1.0ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，制成每1ml中含0.48mg的溶液，同法配制6份平行样品作为供试品溶液分别为B-1、B-2、B-3、B-4、B-5、B-6。7.4.2.2.1.3D-1进样2针，D-2进样2针，然后B-1、B-2、B-3、B-4、B-5、B-6分别进1针，记录色谱图。7.4.2.2.1.4各相邻峰之间的分离度应≥1.57.4.2.2.1.5以外标法计算B-1、B-2、B-3、B-4、B-5、B-6溶液含量。计算：######有限公司文件编号VP—03--39第9页共20页7.4.2.2.1.2可接受标准：6个样品B-1、B-2、B-3、B-4、B-5、B-6溶液主峰的面积。RSD%值应≤2.0%。7.4.2.2.1.3确认记录和数据确认数据和结果记录于附件6《有关物质及精密度确认数据和结果》中。7.4.2.3定量限7.4.2.3.1在上述色谱条件下取克林霉素磷酸酯对照品约120mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成每1ml中含0.03mg的溶液，作为对照溶液。再逐步稀释置适当的浓度，进样，直至当待测组分的信噪比约为10倍时（即主成分主峰高为噪音峰高约10倍时），对应的浓度为该组分的最小定量浓度(Cm2)，重复进样3次，记录色谱图。7.4.2.3.2计算公式式中：hi：测试溶液中主成分的峰高；hb：基线噪声的峰高；h0：空白溶液的色谱图中基线的峰高。7.4.2.3.3可接受标准：上述杂质的定量限应小于产品中各类杂质限度标准的10%。7.4.2.3.4确认记录和数据确认数据和结果记录于附件7《定量限确认数据和结果》中。8变更与偏差若确认方案需要变更，须按方案制定时的审批程序进行批准；若系统发生重大变更，应重新制定确认方案。确认过程中应严格按照本确认方案执行，出现个别项目不符合标准结果时，应按######有限公司文件编号VP—03--39第10页共20页偏差管理规程进行处理，有异常事项未解决时，不得进行下一步的工作。所有偏差、异常情况处理过程均应记录备案，并登记到附件8中。9确认的结果与评价报告由质量保证部和检验室主任对分析方法确认的结果进行审核，检查所有测试项目已经完成；变更和偏差都已经得到解决和批准；每个项目均应符合它们的确认可接受标准；确认记录完整。由检验室填写确认报告，由确认组长在报告中签署评审结论，提交确认总负责人进行批准。附