免疫分型在单株丙球蛋白血症中的应用评估

免疫分型在单株丙球蛋白血症中的应用评估（上海交通大学医学院附属新华医院检验科，上海200092）目的对定量检测血清中的免疫球蛋白和免疫分型在单株丙球蛋白血症中的应用价值进行相应的探究和讨论。方法对研究对象即118例患有血清单株丙球蛋白血症的病者进行血清轻链定量检测和对免疫球蛋白的定量检测以及免疫固定电泳测试。结果在118位患者中有56位免疫球蛋白定量阴性和免疫分型阳性的患者，其中轻链λ型、轻链κ型和未分泌型所占的病例比率为4：2：1；另外还有62位免疫球蛋白定量和免疫分型均为阳性的患者。结论对患者进行的三项实验室测验，这些方法都是有利于诊断血清单株丙球蛋白血症的，并且这些鉴别检测技术手段的应用价值都是很显著的。下文中的三项特定的实验室检测是在方法中提出的那几种。关键字：单株丙球蛋白血症；免疫球蛋白定量；免疫分型；免疫固定电泳目录引言----------------------------------------------------------------------------------------------------11.材料和方法-----------------------------------------------------------------------------------------11.1一般材料-------------------------------------------------------------------------------------11.2仪器与试剂-----------------------------------------------------------------------------------11.3实验方法-------------------------------------------------------------------------------------11.3.1样本采集------------------------------------------------------------------------------11.3.2样本的制备和保存-----------------------------------------------------------------11.3.3血清蛋白区带电泳----------------------------------------------------------------11.3.4免疫球蛋白定量-------------------------------------------------------------------21.3.5免疫固定电泳----------------------------------------------------------------------21.3.6统计学处理-------------------------------------------------------------------------22.结果---------------------------------------------------------------------------------------22.1血清蛋白电泳结果----------------------------------------------------------------22.2血清免疫球蛋白及轻链定量检测-------------------------------------------------------22.3免疫固定电泳结果------------------------------------------------------------------------22.4进一步IgD分型---------------------------------------------------------------------------32.5比较三种方法的检出率--------------------------------------------------------------------32.656例免疫分型阳性、免疫球蛋白定量阴性患者在良、恶性单株丙球蛋白血症及MM不同病期中的分布格局-------------------------------------------------------------------42.6.1免疫分型阳性、免疫球蛋白定量阴性患者在单株丙球蛋白血症中的分布格局--------------------------------------------------------------------------------------------42.6.2免疫分型阳性、免疫球蛋白定量阴性患者在MM不同病期中的分布格局-----------------------------------------------------------------------------------------------43.讨论-------------------------------------------------------------------------------53.1血清蛋白电泳-----------------------------------------------------------------------------53.2三种方法比较检出率--------------------------------------------------------------------53.3免疫球蛋白定量与免疫固定电泳-------------------------------------------------------53.4免疫固定电泳在IgD分型中的应用-----------------------------------------------------64.结论-----------------------------------------------------------------------------6参考文献----------------------------------------------------------------7致谢-------------------------------------------------------------------9第1页共9页引言而血清单株丙球蛋白血症并不是正常的免疫球蛋白，将这种异常的血液增殖性质的免疫疾病留作为特殊病例来观察。在一些情况下，比如巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤还有多发性骨髓瘤等疾病中，可以发现有M蛋白的存在。而对于恶性血液增殖性质的疾病多发性骨髓瘤，良性的丙球蛋白血症是该病的前期表现症状，之后脱离调节控制机制再逐渐演变恶化[]1。之所以在临床上会出现漏诊和误诊的情况，也是由于多种脏器被瘤细胞侵袭，而造成患者的表现症状不够鲜明和明显[2]。并且从发病率的角度来看，多发性骨髓瘤病其实并不罕见。现今，由于检测技术的不断完善和提高，国家人口也愈来愈趋于老龄，而导致骨髓瘤的发病率也随之增加[3]。然后对全部患者进行三项特定的测验，也可以综合诊断鉴别单株丙球蛋白血症，这是有一定应用价值意义的。下面讲述的是实验所需的材料以及所应用到的方法。1.材料与方法1.1一般资料在新华医院里选取研究对象118例免疫分型为阳性的患者，并且其中有56位免疫球蛋白定量阴性和免疫分型阳性的患者，其中轻链λ型、轻链κ型和未分泌型所占的病例比率为4：2：1；免疫球蛋白定量和免疫分型均为阳性的患者有62例，选取一定男女比例（15:12）的多发性骨髓瘤的患者。另外，再选取一定男女比例（19：7）的良性血液单株丙球蛋白血症的患者。另外还有一名暂时未被明确诊断为是单株丙球蛋白血症的男性患者。还有两位54岁的系统性红斑狼疮的女性患者，当然，以上的实验对象患者是均已经排除了感染性疾病、自身免疫性疾病和中枢性神经系统疾病等疾病而确诊了的[4]。这些即可保证实验的精确谨慎性，排除杂因的影响。轻链λ型、轻链κ型和未分泌型三种不同的免疫类型构成了所有的多发性骨髓瘤的27个病例，统计它们三型所占的病例数，分别为4例、2例和1例。而IgG型：IgA型：IgM型：IgD型（病患例数）=11：3：3：3。对多发性骨髓瘤的患者按照统一标准来进行病情的分期，稳定期：进展期：缓解期病患所占的比例为7:6:14[5]。1.2仪器与试剂毛细血管电泳仪（还有它相应的试纸盒）、特定的蛋白仪（德）以及电泳分析系统（德）。1.3实验方法1.3.1对血样本进行无菌的采集采用无菌操作抽取4ml的静脉外周血，往非抗凝管中放入2作为血清分离的使用。1.3.2对血液进行制备和保存对2的静脉血进行离心处理，离心速度设定为3000r/min，五分钟之后将其保存至冰箱待测。1.3.3血清蛋白区带电测验：利用特定的自动化电泳仪分离、染色脱色还有干燥患者的血清样本。第2页共9页1.3.4免疫球蛋白定量测定：通过德国特定的蛋白仪来对患者免疫球蛋白的浓度进行一个免疫散射比浊法的测定。1.3.5免疫固定电泳测验：稀释标本，对血清蛋白进行分离操作。再加相应的25µl抗血清于各泳道，经过试剂固定、孵育之后再吸去抗血清作烘干处理。10min之后，进行洗涤、结晶紫染色、脱色、烘干一系列的流程操作，扫描，还可以对免疫分型为κ/λ可能的患者标本进行IgD分型。1.3.6统计学的处理比较分析免疫球蛋白定量阴性和免疫分型阳性的患者在不同病期下所分布的格局，应用特定的统计软件，而不同的三种疾病分别确定是多发性骨髓瘤和良恶性的单株丙球蛋白血症疾病。2.结果2.1血清蛋白的电泳显示的结果在118例免疫分型为阳性的患者中，有115例患者的血清内可以发现有M蛋白的存在。电泳的结果显示，γ球蛋白区有81例M蛋白，β球蛋白区有28例，在两区之间还有1例，淡染M区带有5例。2.2血清轻链还有免疫球蛋白的定量检测在所有的免疫分型为阳性的研究对象患者里，免疫球蛋白定量阴性和免疫分型阳性的患者有56例，其中的轻链型里的IgG、IgM等免疫球蛋白的含量一般不会增高；另外的62例免疫球蛋白定量和免疫分型都为阳性的患者，他们其中含量有所增高的有IgG、IgA、IgM等。2.3免疫固定电泳的结果可以参考表1和图1得出的结果是，IgG型在118例的患者标本里所占的比例（52.5%）是最大的，第二位的是占20.3%的IgA型，IgM型占16.1%。另外其中不同免疫分型的轻链型：双克隆型：IgD型：未分泌型=6:4：3:1。表1患者的血清免疫分型的显示结果免疫分型例数（%）κ型λ型IgG61（51.7%）3130IgA24（20.3%）915IgM19（16.1%）118IgD3（2.5%）03IgE0（0%）00轻链型6（5.1%）24双克隆型4（3.4%）22未分泌型1（0.85%）00合计118(100%)第3页共9页IgGIgAIgMIgD轻链型双克隆型图1患者的免疫分型所占的比例图示2.4IgD分型鉴定采用IgD分型鉴定进一步检测118例单株丙球蛋白血症患者中κ或者λ可能的样本，结果显示游离λ轻链型：游离κ轻链型：IgDλ伴λ型所占的比例为4:1:1。如下图2、3所示。图2图3图2所示1、4.均为游离的λ轻链型图3所示1.IgDλ伴λ2.游离λ轻链型3.游离λ轻链型4.游离κ轻链型2.5通过对患者进行三项实验室测验来对血清单株丙球蛋白血症的检出率进行一个相对应的比较和分析。（见下表2）表2三种实验检测方法对应着的疾病(单株丙球蛋白血症)检出率组别例数SPEIFIgSPE+IgIgG型6110010054