临床检验基础

第一章血液样本采集和血涂片制备1、常用真空管颜色添加剂用途红色无化学、血清学、血库紫色EDTA全血细胞计数淡蓝色枸橼酸钠凝血检查绿色肝素钠、锂、化学灰色氟化钠葡萄糖、糖耐量黄色多聚茴香脑磺酸钠血培养金黄色分离胶/凝块激活剂化学淡绿色分离胶/肝素锂化学黑色枸橼酸钠血沉橘红色促凝剂快速生化实验2、抗凝剂EDTA：不适于凝血检查、血小板检查草酸盐：改变血液PH，干扰血浆钾、钠、氯和某些酶的活性双草酸盐：适用于HCT、CBC、Het计数等检查，不适于血小板计数、白细胞分类计数肝素:有加强抗凝血酶（AT）灭活丝氨酸蛋白酶的形成，并阻止血小板聚集等作用是红细胞脆性试验的理想抗凝剂，不适于血细胞计数（CBC）、红3、细胞形态学检查嗜酸性物质为碱性蛋白（Hb、嗜酸性颗粒）与伊红被染成粉红色嗜碱性物质为酸性蛋白（细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性颗粒）与亚甲蓝结合染成紫蓝色或蓝色嗜中性物质中性颗粒呈等点状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染淡紫红色PH（6.4-6.8）对染色的影响偏酸：红细胞和嗜酸性颗粒偏红，细胞核淡蓝色或不染色偏碱：所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸性颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性颗粒偏粗，呈紫黑色4.细胞染色方法学评价瑞氏染液：对于细胞质成分、中性颗粒染色效果好吉姆萨染液：对细胞核、寄生虫着色好结构清晰瑞氏染夜的质量控制新配制的染料偏碱，须室温或37度保存一段时间，待亚甲蓝逐渐变为天青B，贮存时间越久，染色越好，贮存过程，必须加塞，防甲醇挥发（加甘油）和氧化成甲酸。甲醇必须为AR级，丙酮含量过多，会使染色偏酸，白的细胞着色不良。第二章红细胞检查1、血红蛋白每克血红蛋白可携带1.34ml氧，成人约含600g血红蛋白，可携带约800ml氧血红蛋白的合成调节激素:促红细胞生成素（EPO）、雄激素2、红细胞内异常结构异常结构来源常见疾病嗜碱性点彩红重金属损伤细胞膜，嗜碱性物质凝集或变性铅中毒，其他各类贫血见到点彩红细胞表明骨髓造血旺盛或紊乱豪乔氏小体暗紫红色圆形小体，为核碎裂、溶解后的残余部分脾切除、无脾症、脾萎缩、脾功能低下、红白血病、某些贫血（巨幼贫）卡波环紫红色细线圈状结构，呈环形、8字形，为核膜残余物、白血病、巨幼贫、增生性贫血、铅中毒、脾切除纺锤体残余物、脂蛋白变性物寄生虫红细胞质内可见疟原虫、微丝蚴、杜利什曼原虫3、Hb结构及各阶段的生成Fe2+99%还原Hb携氧铁1个亚铁血红素Fe3+1%高铁Hb原卟啉Hb2α链（141个氨基酸）：α、ζ、θ链珠蛋白2β链（146个氨基酸）：β、δ、γ、ε链各阶段血红蛋白种类和比例妊娠期：5W:HbGowerⅠ(ζ2ε2)6W:HbGowerⅠ(ζ2ε2)HbGowerⅡ(α2ε2)HbPortland(ζ2γ2)HbF(α2γ2)8W:HbA(α2β2)出生：3M:HbA(α2β2)95%、HbF1%、HbA22-3%衰老红细胞被分解为：铁、珠蛋白、胆红素4、红细胞计数：计算公式：红细胞/L＝N×25/5×10×106×200＝N×1010＝N/100×1012红细胞稀释液：Hayem液NaCl(调节渗透压)、Na2SO4(提高比密防止细胞粘连)、HgCl2（防腐）5、Hb测定（ICSH参考方法：氰化高铁血红蛋白测定法）HiCN（540nm吸收峰）法除SHb外的各种Hb，氧合Hb或其他衍生物均可被高铁氰化钾氧化。干扰因素白细胞过高或球蛋白异常SDS法：538nm吸收峰6、红细胞形态的改变形态改变改变部位常见疾病球形细胞膜球形红细胞增多症、自免溶贫、小儿椭圆形细胞膜缺铁性贫血、骨髓纤维化、巨幼贫、镰贫、正常人（1-15%）靶形Hb珠蛋白生成障碍性贫血、HbC病、阻塞性黄疸、脾切除口型细胞膜口型RBC增多、酒精中毒、某些溶血性贫血、肝病和正常人镰形Hb镰贫、镰状细胞特性样本棘红细胞膜β-脂蛋白缺乏、脾切除、酒精中毒性肝炎、尿毒症缗钱状血浆纤维蛋白、球蛋白增高有核红溶贫、血液病或骨髓转移瘤、慢性骨髓增生性疾病、脾切除裂红细胞DIC、巨幼贫、重型珠蛋白生成障碍、严重烧伤、正常人新月形溶血性贫血泪滴形Hein小体贫血、骨髓纤维化、正常人形态不整某些感染、严重贫血、巨幼贫7、HCT测定（WHO参考方法：微量法）8、红细胞平均指数红细胞平均体积：MCV＝HCT/RBC(fl)当红细胞凝集、严重高血糖症可使MCV假性增高红细胞平均血红蛋白含量：MCH＝Hb/RBC高脂血症、白细胞增多症可使MCH假性增高红细胞平均血红蛋白浓度：MCHC＝Hb/HCT贫血形态学类型MCVMCHMCHC病因举例正常细胞贫血80-10027-340.32-0.36急性失血、溶血、造血功能低下、白血病小细胞低色素性贫血＜80＜26＜0.32缺铁性贫血、慢性失血、珠蛋白生成障碍性贫血单纯小细胞性贫血＜80＜260.32-0.36感染、中毒、慢性炎症、尿毒症大细胞性贫血＞100＞340.32-0.36VB12、叶酸缺乏9、红细胞体积分布宽度（RDW）贫血形态学分类MCV减少正常增高RDW正常轻型珠蛋白生成障碍性贫血慢性贫血慢性贫血、遗传性球星红细胞贫血（RDW也可增高）、某些重型血红蛋白病（如AS）再障、骨髓异常增生综合征增高缺铁性贫血、HbH病、β-珠蛋白生成障碍性贫血（非轻型）、重型血红蛋白病（AC)、某些慢性贫血、G6PD缺乏症、红细胞碎片铁缺乏早期、镰状红细胞贫血、HbS、C病VB12或叶酸缺乏贫血、免疫性溶血性贫血、冷凝集素、酗酒作为缺铁性贫血筛选诊断和疗效观察的指标：RDW增大对IDA的诊断灵敏度达95%以上，特异性不强，可作为IDA的筛选诊断指标。当铁剂治疗有效时，RDW开始增大，随后逐渐降至正常鉴别缺铁性贫血和β-珠蛋白生成障碍性贫血：RDW增大对IDA的诊断灵敏度达95%以上，特异性不强，可作为IDA的筛选诊断指标。当铁剂治疗有效时，RDW开始增大，随后逐渐降至正常。β-珠蛋白生成障碍性贫血没有上述表现。10、网织红细胞计数（ICSH推荐Miller窥盘法、WHO推荐新亚甲蓝染色）Miller窥盘法：网织红细胞百分率＝大方格内网织红细胞数/小方格内的红细胞数×9×100%网织红细胞计数仪法：将Ret分为强荧光强度Ret（HFR）、中荧光强度Ret（MFR）、弱荧光强度Ret（LFR）网织红细胞成熟指数：RMI＝（MFR+HFR）/LFR×100临床意义：外周血网织红细胞中Ⅲ型（破网型）占20-30%，Ⅳ型（斑点型）70-80%，若骨髓增生明显，可出现Ⅰ型（丝球形）和Ⅱ型（网型）增多：溶血性贫血、放疗化疗后、红系无效造血减少：AA、溶血性贫血再障危象，典型再障诊断标准之一Ret计数常低于0.005，绝对值低于15×109/L观察贫血疗效：IDA、巨幼贫、患者治疗前Ret仅轻度增高（也可正常或减低），给予铁剂或VB12、叶酸治疗后，用药3-5天后，Ret开始上升，7-10天达高峰，2周左右，Ret下降，表明治疗有效11、点彩红细胞计数（残存的嗜碱性RNA）临床意义：增高：中毒、各类贫血、巨幼贫、恶性贫血、恶性肿瘤、表示造血旺盛12、红细胞沉降率（ESRICSH推荐方法魏氏法）质量控制血浆蛋白比例：血沉减慢：小分子蛋白如清蛋白、卵磷脂血沉加快：大分子蛋白质如急性反应蛋白（CRP、FIB、触珠蛋白、铜蓝蛋白α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶）、免疫球蛋白、巨球蛋白、胆固醇、甘油三酯红细胞数量和形状：红细胞数量：血沉加快：数量少；血沉减慢；数量多，但数量太少，则影响红细胞缗钱状形成，导致血沉减慢红细胞直径：直径越大血沉越快，如靶形红细胞；但球形红细胞、镰形红细胞不易临床意义：血沉增快：生理性：女性高于男性。老年人增快病理性：各种炎症、组织损伤及坏死、恶性肿瘤、高球蛋白血症、贫血、高胆固醇血症血沉减慢：真性或相对性红细胞增多症、DIC消耗性低凝血期、继发性纤溶期、肝病、肿瘤、其他严重疾病因未产生急性反应蛋白等使血沉减慢第三章白细胞检查一、白细胞计数：WBC/L＝N/4×10×20×106＝N/20×1091、有核红细胞影响的矫正公式校正后的白细胞数/L＝校正前白细胞数×100/100+Y（Y为白细胞分类计数时，100个白细胞中有核红细胞数量）2、质量控制：常规考核标准（RCS）＝四大格WBC最大值-最小值/四大格WBC平均值×100%WBC总数(109/L)RCS(%)≤4＜30%4.1-14.9＜20%≥15＜15%二、白细胞分类计数(参考方法：显微镜分类法)1、细胞分布不均：尾部：中性粒细胞多、淋巴少，单核沿涂片长轴均匀分布尾部和边缘：大细胞和幼稚细胞头部和体部：淋巴、嗜碱2、白细胞总数与分类白细胞数的关系WBC总数(109/L)应分类WBC数（个）＜450-1004-1010010-2020020-30300＞30400三、核左移：早幼粒至杆状细胞＞5%核右移：5叶核以上超过3%常伴有细胞总数减低核左移再生性轻度WBC总数和N百分比均增高，仅杆状核增多（＞5%），轻度感染，机体抵抗力较强中度WBC总数和N百分比均增高,杆状核＞10%，有少数晚幼粒，严重感染重度WBC总数和N百分比均明显增高，杆状核＞25%，并出现幼稚的粒细胞退行性WBC总数不增高，甚至减低，见于再障、粒细胞减少症、严重感染（伤寒、败血症）核右移常伴WBC总数减低，为造血物质缺乏、DNA减低、造血功能减退所致。见于营养性巨幼贫、恶性贫血、应用抗代谢药物、炎症恢复期。四、嗜酸性粒细胞计数计算公式：嗜酸性粒细胞/L＝N/10×10×20×106＝N/50×109五、异常WBC形态毒性变大小不均、空泡、Dohle体退行性变、巨多分叶巨幼贫、抗代谢药物治疗后棒状小（Auer）急性白血病，尤其是M3型可见数条-数十条，M5可见一条，ALL不见Pelger-Huet常染色体显性遗传性异常，可继发于严重感染、白血病、MDS、肿瘤转移、某些药物治疗后Chediak-HigashiChediak-Higashi畸形，为常染色体隐性遗传Alder-Reilly脂肪软骨营养不良、遗传性多糖代谢障碍、为常染色体隐性遗传May-Hegglin常染色体显性遗传浆细胞外周血出现浆细胞，见于传染性单核细胞增多症、流行性出血热、弓形体病、梅毒、结核病浆细胞异常形态：Mott细胞（见于反应性浆细胞增多症、疟疾、黑热病、多发性骨髓瘤）、火焰浆细胞(见于IgA型骨髓瘤)、Russell小体（见于多发性骨髓瘤、伤寒、疟疾、黑热病）第四章血液分析仪及临床应用一、光散射法血液分析仪检测原理1、POX活性：E＞N＞M2、多角度偏振光散射（MAPSS）法：0o：前角光散射（1o-3o），可测细胞大小10o：狭角光散射（7o-11o），可测定细胞内部结构90o：垂直光散射（70o-110o），可测定细胞分叶情况-90o：消偏振光散射（70o-110o），可将嗜酸性粒细胞和其他细胞区分出来二、光散射法红细胞检测原理低角度（2o-3o）光散射能测量单个红细胞体积高角度（5o-15o）光散射测量单个红细胞血红蛋白浓度三、光散射法血小板检测原理高角度（5o-15o）光散射能测量细胞折射指数（RI）低角度（2o-3o）光散射能测量细胞大小。四、细胞直方图1、白细胞直方图：正常WBC直方图，在35-450fl范围内将WBC分为3群白细胞直方图变化的部分原因白细胞正方图变化主要原因淋巴细胞峰左侧异常有核红细胞、血小板聚集、巨大血小板、未溶解红细胞、疟原虫、冷凝集蛋白、脂类颗粒、异型淋巴细胞淋巴细胞峰右移，与单个核细胞峰左侧相连并抬高All、Cll、异型淋巴细胞单个核细胞峰抬高增宽原始或幼稚细胞、嗜酸性粒细胞增多、嗜碱性粒细胞增多、单核细胞增多单个核细胞峰与中性粒细胞峰之间异常未成熟的中性粒细胞、异常细胞亚群、嗜酸性粒细胞增多中性粒细胞峰右移、抬高、增宽中性粒细胞绝对值增多直方图多区出现异常以上多种原因引起2、血细胞分析仪红细胞直方图的临床应用＜＞↑↓≤≥×－＋ⅠⅡⅢⅣⅤⅥαβδεγζθ