临床检验概论

第一章概论1.血液生理概要2.血液标本的采集、送检、保存与处理3.血液标本的抗凝4.血涂片的制备5.血细胞常用的染色方法第一节血液生理概要§血液的组成§血液主要理化性质§血液功能血液的组成血浆=血清+凝血因子血液理化性质血量：占体重6%-8%，小儿成人，男性女性，女性妊娠期间可增加23%-25%(血浆增加量大于红细胞增加量)。颜色：红色（血红蛋白），动脉鲜红色（HbO2高），静脉暗红色（Hbred高），脂血乳白色，严重贫血患者颜色变浅。CO或氰化物中毒血液樱红色。悬浮稳定性：红细胞表面唾液酸根带负电荷，形成Zeta电位使红细胞相互排斥。粘滞性：主要取决于红细胞比容和血浆粘度，粘度受血浆中纤维蛋白原、球蛋白等大分子影响，其浓度越高，粘度越高。凝固性：数分钟内自行凝固。比密和渗透浓度pH7.35-7.45考点2血液的功能§运输功能运送氧气、营养（葡萄糖、氨基酸、矿物质）、代谢产物（CO、尿素）§协调功能激素、酶§维护机体内环境稳定水电解质平衡、酸碱平衡、体温稳定§防御功能白细胞、抗体、补体、细胞因子、血小板、凝血因子第二节血液标本采集一、血液标本种类：全血=血细胞+血浆，用于：临床血液学分析血浆=全血-血细胞，用于：临床生化凝血因子测定血清=血自然凝固后析出的液体用于：临床生化临床免疫学分析二、采血方法静脉采血法F:\临检视屏\静脉采血1.flv动脉采血法皮肤采血法采血方法（一）静脉采血法1、适用：适用于绝大多数临床检验2、部位：体表的浅静脉均可肘部静脉——最常用手背静脉内踝静脉股静脉颈外静脉静脉采血部位3、器材：①注射器：不同型号（5~10ml）②容器：硅化处理玻璃试管塑料试管③压脉带④消毒碘酒棉球4、优点：可满足绝大部分检验需要5、注意：①注射器和容器必须干燥②抽血不宜过快，以免产生气泡或溶血③要拔掉针头再徐徐注入容器④若遇病人晕厥时勿惊慌，可采取：平卧休息嗅芳香氨酊指按“人中”“合谷”等穴位措施（二）皮肤采血法（毛细血管采血法）1、适用：需血微量的检查2、部位：手指耳垂指足跟WHO推荐：左手无名指指端内侧3、器材：①采血针：一次性采血针②75%酒精棉球和消毒干棉球③微量吸管(20微升)4、优缺点：优点：方便，快捷末梢循环受多种因素影响(血液末梢循环、温度、采血情况、局部感染)标本混有组织液采血量受限疼痛明显缺点5、注意：1.穿刺部位消毒酒精干后方可穿刺2.烧伤病人应选择皮肤完整处采血3.拭去第一滴血液4.血流不畅时，自采血部位远端向指尖稍加压力，切勿用力挤压皮肤，防止组织液混入5.一人一针（三）动脉采血法1、适用：用于血气分析2、部位：股动脉等3、器材：专用采血器4、注意：采血后立即封闭针头，避免与空气接触，及时送检，最好在30分钟内检测（四）真空采血法（负压采血法）1、适用：适用绝大多数临床检验尤其适宜于病房和野外流动采血2、部位：全身浅静脉①真空采血装置套筒式头皮静脉式②真空采血管：③压脉带④消毒碘酒棉球3、器材真空采血装置套筒式头皮静脉式真空采血管4、优点：①封闭：减少医务人员感染减少容器间转移减少交叉污染保护环境②减少溶血③保证标本质量【方法学评价】皮肤采血法＜开放式静脉采血法＜真空采血法【质量控制】要注意影响标本质量的因素(qualitycontrol)1.患者饮食、运动和精神状态（结果假性偏高）2.勿挤压皮肤3压脉带使用时间应少于1分钟(浓缩、瘀滞、缺氧)4.避免溶血（AST、K+）5.一侧手臂静脉输液时应从对侧手臂取血6.二侧手臂同时进行静脉输液，应选择输液穿刺点的远心端取血5、血标本处理：尽快检验、生物安全唯一标识、接收拒收合适的条件保存（一般置于4℃，1个月（-20℃），3个月以上（-70℃），标本存放需加塞，防止水分挥发）6、实验结果分析：影响因素结合临床及时与临床沟通巩固血浆与血清区别？严重贫血从血外观怎样辨认？静脉采血最常用采血部位？末梢采血最常用采血部位？皮肤采血法缺点？末梢采血时为什么切勿用力挤压？静脉采血时为什么避免溶血？静脉采血时为什么不能在输液端采血?思考？为什么末梢采血推荐左手无名指指尖内侧？松驰的琴弦，永远奏不出时代的强音。谢谢大家第三节抗凝剂选择常用的抗凝剂有EDTA草酸盐肝素枸橼酸盐抗凝——用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，阻止血液凝固。抗凝剂——能够阻止血液凝固的物质。1）抗凝原理：与血中钙离子结合成螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。1、乙二胺四乙酸盐（EDTA-Na2,EDTA-K2）2）应用：①适用：多项血液学检查，尤其是血小板计数特别适用于全血细胞分析血细胞比容测定②不适用：凝血象检查和血小板功能检查因为：EDTA影响血小板聚集2、草酸盐1）抗凝原理：溶解后解离的草酸根与血中钙离子结合成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血作用。2）应用：溶解度好、价廉①适用：一般血液学检查②不适用：凝血象检查因为：▲对凝血V因子保护差▲形成的草酸盐沉淀影响自动凝血仪3、肝素1）抗凝原理：抗凝机制复杂①与ＡT-Ⅲ结合抑制凝血活酶的形成②抑制血小板聚集与释放反应③灭活丝氨酸蛋白酶,抑制凝血酶形成2）应用：①适用：适用于绝大多数检查（不影响细胞体积,不易溶血）尤其是细胞培养和红细胞渗透脆性实验②不适用：不适合血液学一般检查因为：▲易引起白细胞聚集▲血涂片罗氏染色有蓝色背景4、枸橼酸盐1）抗凝原理：与钙离子结合成螯合物，从而阻止血液凝固。2）应用：①适用：血沉测定（1:4）凝血功能测定（1:9）输血保养液①含有K+、Na+的抗凝剂不能用于测定K+、Na+的标本；②EDTA、氟化物、草酸盐等不能用于测定Ca2+的标本，因为Ca2+可与它们形成不溶性物质。5、使用抗凝剂应注意：严格掌握抗凝剂与血液的比例血液和抗凝剂的比例过高或过低都会影响标本的质量。血液比例过高时(采血过量)，由于抗凝剂相对不足。血浆中出现微凝血块的可能性增加，阻塞检验仪器，影响检验指标血液比例过低(采血不足)，抗凝剂相对过剩对许多检验指标会造成严重影响第四节血液涂片制备和细胞染色•一、血液涂片制备•F:\临检视屏\末梢采血、血涂片制备.flv•二、血液细胞染色•F:\临检视屏\血涂片染色.flv一、血液涂片制备•厚薄要适宜，•头体尾要明显，•细胞分布要均匀，•血膜边缘要整齐，•并留有一定的空隙。引起血涂片分布不均的主要原因：•推片边缘不整齐，•用力不均匀，•载片不清洁。染料碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，与细胞内酸性成分结合，染成蓝色。主要用于细胞核染色。如美蓝/亚甲蓝、天青酸性染料：为阴离子染料，能释放质子，与细胞内碱性成分结合，染成红色。主要用于细胞质染色。如伊红二、血液细胞染色(一)瑞氏染色法(Wright'sstain)1．瑞氏染料（复合染料）酸性染料伊红(E-)碱性染料亚甲蓝(M+，又名美蓝)美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)瑞士染液放置越久，染色效果越好。原因：越多亚甲蓝转化为天青B.甲醇的作用：①溶解美蓝和伊红，解离为M+和E-；②脱水作用，固定细胞形态，增强染色效果。(一)瑞氏染色法2．染色原理是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，①物理的吸附作用，②化学的亲和作用，嗜酸性颗粒——碱性——与酸性染料——粉红色；细胞核蛋白——酸性——与碱性染料——紫蓝色或蓝色；中性颗粒——等电状态——与伊红和美蓝——染淡紫红色。瑞士染色原理pI蛋白质pH+伊红(E-)pH-亚甲蓝(M+)3pH值的影响:细胞各种成分均属蛋白质（两性电解质）最适pH（6.4-6.8）3pH值的影响:•染色所用玻片必须清洁，无酸碱污染。•配制瑞氏染液必须用优质甲醇，•稀释染液必须用缓冲液，•冲洗用水应近中性。•新鲜配制的染料偏碱，须在室温贮存一定时间，贮存时间愈久，染色效果愈好。原因：越多亚甲蓝转化为天青B.•DeamGilliland等采用吸光度比值作为瑞氏染液的质量规格。(二)吉姆萨染色法•吉姆萨染液由天青、伊红组成。•对细胞核和寄生虫(如疟原虫等)着色较好•胞质和中性颗粒则染色较差。复合染色法[质量控制]1．血涂片制备•血膜由厚到薄逐渐过度；•血膜的体尾交界部位，红细胞分布均匀，既不重叠又互相紧靠相连。2．血液细胞染色巩固针对血细胞比容高、血粘度高/贫血患者应该怎样制备血涂片？瑞士染液中甲醇的作用？瑞士染液pH范围？血涂片染色后最佳观察位置是？种子牢记着雨滴献身的叮嘱，增强了冒尖的勇气