二氢杨梅素对糖尿病小鼠降糖作用研究_逯凤肖

中药药理与临床2016;32(3)45andimmunolocationinpriondiseases．BiochemSocTrans，2002;30(4)∶387～3917FuH，SubramanianＲＲ，MastersSC．14-3-3proteins:structure，func-tionandregulation．AnnuＲevPharmacolToxicol，2000;40∶617～6478KleppeＲ，ToskaK，HaavikJ．Interactionofphosphorylatedtyrosinehydroxylasewith14-3-3proteins:evidenceforaphosphoserine40-dependentassociation．JNeur-ochem，2001;77(4)∶1097～11079OuyangLF，WangZL，DaiJG，etal．Determinationoftotalginsenosidesinginsengextractsusingchargedaerosoldetectionwithpost-columncompen-sationofthegradient．ChinJNatMed，2014;12(11)∶857～86810ZhouDH，ZhaoFＲ，NisbetAJ，etal．ComparativeproteomicanalysisofdifferentToxoplasmagondiigenotypesbytwo-dimensionalfluorescencedifferencegelelectrophoresiscombinedwithmassspectrometry．Electrophore-sis，2014;35(4)∶533～54511LeungSM，PittsＲL．AnovelapproachusingMALDI-TOF/TOFmassspectrometryandprestructuredsamplesupports(AnchorChipTechnology)forproteomicprofilingandproteinidentification．MethodsMolBiol，2008;441∶57～7012MachtM，AspergerA，DeiningerSO．Comparisonoflaser-induceddis-sociationandhigh-energycollision-induceddissociationusingmatrix-assistedlaserdesorption/ionizationtandemtime-offlight(MALDI-TOF/TOF)forpeptideandproteinidentification．ＲapidCommunMassSpectrom，2004;18(18)∶2093～210513CooperB．theproblemwithpeptidepresumptionandlowMascotsco-ring．JProteomeＲes，2011;10(3)∶1432～143514BroschM，YuL，HubbardT，etal．Accurateandsensitivepeptidei-dentificationwithMascotPercolator．JProteomeＲes，2009;8(6)∶3176～318115MatsudaLA，LolaitSJ，BrownsteinMJ，etal．Structureofacannabi-noidreceptorandafunctionalexpressionoftheclonedcDNA．Nature，1990;346∶561～56416石楸鸣．人参皂苷的药理作用研究进展．中国药房，2010;31∶2967～296817李芳，马风杰，丁绪平．人参总皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经血管单元的保护作用．潍坊医学院学报，2014;36(1)∶76～7918赖利平，潘伟男，邓水秀．14-3-3蛋白家族新机制和新功能研究．亚太传统医药，2014;10(2)∶58～5919潘伟男，陈临溪．14-3-3蛋白．中华医药研究杂志，2006;6(10)∶1103～110620伍家发，吴乔．14-3-3蛋白家族的调控机制和生物学功能．中国细胞生物学学报，2005;27∶101～10421万曦娣，王枫，黄欧平．14-3-3ζ蛋白在人类疾病中的研究．南昌大学学报(医学版)，2013;53(4)∶92～9522郑欣，胡波，高顺祥，等．生物膜干涉法研究STX与适配体间的相互作用．中国生化药物杂志，2014;9(34)∶17～1923王静，张雅雅，刘涛，等．姜黄素对Hsp90的结合及抑制作用．现代肿瘤医学，2015;23(1)∶32～35ＲesearchofginsengtotalsaponinspulldowntheproteinsinbrainChenFeiyan，OuyangLiufeng，JiangYucui，GuLing，ChenCuihua，XuYan，ZhaoYunan＊＊(ＲesearchCenterofBasicMedicalCollege，NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210023)Objective:Topredictthetargetsofginsengtotalsaponininbrain．Methods:Inthisstudy，Weadoptdirectaffinitypulldownthepro-teinsinbrainwhichmayinteractwithginsengsaponins．Then，theunknownproteinswereidentifiedusingtheMALDI-TOF/TOFaftertheSDS-PAGEgelelectrophoresisseparation．Andthedirectaffinitychromatographyusingginsengtotalsaponinsasligandswasadoptedtodis-covertheproteintargetsofginsengsaponininbrain，ontheotherhandtoexplorewhetherthedirectaffinitychromatographyisfeasibleforthefindingofsmallmoleculartargets．UsingtheBLItechnique，theaffinitybetween14-3-3proteinandginsenosideswasdeterminedtofurtherconfirmwhether14-3-3proteinhasthedirectinteractionwithginsenosides，andwhatkindofginsengsaponinindividualhasthestrongestaf-finitywith14-3-3protein．Ｒesults:ItshowedthatfivepredictproteinswereacquiredbySDS-PAGEandmassspectrometry．Ｒespectively:the14-3-3protein，actin，creatinekinaseB，ATPsynthetaseandunknownprotein．Kineticsanalysisshowedthattheaffinity(KD)betweenprotopanoxadioland14-3-3proteinis7．8×10-4M．Meanwhile，theaffinity(KD)betweenpanaxatrioland14-3-3proteinis5．62×10-4M．Conclusion:The14-3-3proteinisoneofthetargetsforbrainofginsengtotalsaponins，andthatprotopanoxadiol，panaxatriolcouldbeactiva-torsof14-3-3protein．Keywordsginsengtotalsaponins(人参皂苷);pulldown;massspectrometry;14-3-3protein;protopanoxadiol;panaxatriol二氢杨梅素对糖尿病小鼠降糖作用研究*逯凤肖，王恩花，秦湉，郁建平＊＊(贵州大学药学院，贵阳550025)摘要目的:研究藤茶中二氢杨梅素的降糖作用。方法:一次性尾静脉注射四氧嘧啶(75mg/kg)建立糖尿病小鼠模型，以二甲双胍为阳性对照，研究二氢杨梅素对糖尿病小鼠的体重、摄食量、饮水量、空腹血糖、糖耐量、糖原、抗氧化能力、血清胰岛素和胰*贵州藤茶资源及加工应用示范(黔科合NY［2011］3094号)46中药药理与临床2016;32(3)腺组织的影响。结果:二氢杨梅素100、150mg/kg对四氧嘧啶致病小鼠能极显著降低血糖;提高糖尿病小鼠的糖耐量，减少四氧嘧啶对胰岛的损害，促进糖尿病小鼠肝糖原的合成和胰岛素的分泌;提高糖尿病小鼠的抗氧化能力。结论:二氢杨梅素对四氧嘧啶糖尿病小鼠有降糖作用，其降糖机制可能是通过提高抗氧化作用减轻四氧嘧啶对肝脏和胰岛B细胞的损伤，促进了肝糖原和胰岛素的合成。关键词二氢杨梅素;糖尿病;血糖;糖原;抗氧化DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2016.03.012二氢杨梅素来源广泛，是藤茶的主要活性成分，藤茶是葡萄科蛇葡萄属的藤本植物，学名为显齿蛇葡萄(Ampelopsisgrossedentata)，广泛分布在我国湖北，湖南，贵州，广西等省［1，2］。前人的研究证明藤茶总黄酮对糖尿病模型具有较好的区［3］。本研究基于藤茶总黄酮的降糖作用降血糖作用，且毒性小进一步研究二氢杨梅素对糖尿病小鼠血糖的影响。1材料和方法1．1试验药物二氢杨梅素为白色粉末，实验室自制，经HPLC测定，色谱条件:色谱柱为DiamonsilC18(250mm×4．6mm，5μm，Dikma);流动相:甲醇-0．2%磷酸水溶液(25:75v/v);流速:1．0ml/min;检测波长:291nm;柱温:35℃;进样量:20μl。)，纯度95．1%，临用前用生理盐水配制为所需浓度的;二氢杨梅素标品HPLC98%，批号:20120916，上海源叶生物科技有限公司。图1二氢杨梅素标准品色谱图(保留时间3．821min)图2二氢杨梅素样品色谱图(保留时间3．814min)二甲双胍为北京京丰制药有限公司产品。1．2动物KM小鼠，清洁级，雄性，体重23～25g，由贵州医科大学动物实验中心提供，实验动物生产许可证号:［SCXK(黔)2012-0001］。1．3试剂四氧嘧啶(Alloxan)为Sigma产品。血糖含量测定试剂盒和糖原测定试剂盒为苏州科铭生物技术有限公司产品，胰岛素ELISA试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测定试剂盒为上海恒远生物科技有限公司产品。1．4仪器TU-1901双光束紫外分光光度计为北京普析通用仪器有限责任公司产品。酶标仪为芬兰LabsystemsMultiskanMS352型号。日本岛津液相色谱仪(SPD-20A检测器、LC-20AT二元泵、LCsolution色谱工作站)。1．5方法［4，5］，雄性小鼠，普通饲料适应性喂养l参照文献周，随机取出10只作为正常对照组，其余小鼠禁食不禁水12h后，一次性尾静脉注射四氧嘧啶75mg/kg，72h后尾静脉取血测小鼠空腹血糖，把血糖值高于16．7mmol/L的小鼠定为糖尿病鼠。糖尿病鼠按血糖值随机分为5组:模型对照组，二氢杨梅素50、100、150mg/kg和二甲双胍150mg/kg。分别给予生理盐水，二氢杨梅素和二甲双胍每天灌胃一次，连续