乳酸环丙沙星壳聚糖滴鼻剂的制备及质量控制

1乳酸环丙沙星壳聚糖滴鼻剂的制备及质量控制王艳,王涛,赵国东（1.徐州医学院附属医院药剂科2.徐州医学院04级实习生江苏徐州221002）摘要目的：研制乳酸环丙沙星壳聚糖滴鼻剂并建立其质量控制方法。方法：以壳聚糖为增稠剂、增效剂，乳酸环丙沙星为主药制备滴鼻剂。采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测主药含量，并对其稳定性进行考察。结果：所制备的制剂为无色、微粘、澄明液体,其鉴别符合2005版《中国药典》中的相关规定；乳酸环丙沙星在10～200μg.mL-1范围内线性关系良好（r=0.9999,n=6）。平均回收率为99.19％，RSD为0.94%。日内RSD为0.53%,日间RSD为0.68%。结论：本制剂制备工艺简单可行，质量稳定、可靠，控制方法灵敏、准确。关键词乳酸环丙沙星；壳聚糖；制备；质量控制[中图分类号]R943[文献标识码]APreparationandqualitycontrolofciprofloxacinlactatechitosannasaldropJiHuaixue(JiHX),WangYan(WangY)，WangTao(WangT)，etal(ShortforDepartmentofPharmacy，affiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege,Xuzhou221002)ABSTRACTOBJECTIVE:Toprepareciprofloxacinlactatechitosannasaldropandestablishitsqualitycontrolmethod.METHODS:Thenasaldropwaspreparedusingchitosanasthickenagentandsynergistwithciprofloxacinasprincipalagent.ThecontentofciprofloxacinwasdeterminedbyRP-HPLC.Thestabilityofthepreparationwasinvestigatedaswell.RESULTS:ThepreparednosedropwascolorlesstransparentglutinouslimpidliquidwithitsidentificationitemsalluptotherelatestandardsstipulatedinChinesePharmacopoeia(2005edition).Thelinearrangeofciprofloxacinwas10～200μg.mL-1,r=0.9999(n=6）.Theaveragerecoverwas99.19％,RSDwas0.94%.TheaverageRSDofintra-dayandinter-daywas0.49%,1.50%.CONCLUSIONS:Thepreparationtechnologyissimpleandfeasible.Thequalityofpreparationisstableandcontrollable.Themethodofqualitycontrolisrapidandaccurate.KEYWORDS:ciprofloxacinlactate,chitosan,creparation,qualitycontrol环丙沙星是第三代氟喹诺酮类抗生素，体外抗菌活性在目前在临床应用的氟喹诺酮类抗生素中最强。具有抗菌谱广，抗菌活性强,对革兰阴性阳性菌、支原体及厌氧菌等[作者简介]王艳,女,硕士,主管药师,电话:[phone]有较好抗菌活性,几乎没有潜在的光毒性等优点。该药作用于细菌DNA回旋酶及拓朴异2构酶干扰病原微生物核酸的复制、翻译发挥杀菌作用[1]。目前外用制剂品种包括滴眼剂、滴眼剂、凝胶剂等[2]。壳聚糖是目前药用制剂中较好的媒介，既可增加生物利用度又可减少药物对皮肤粘膜的刺激，迅速缓解感染，同时促进鼻咽部创伤的愈合[3]。鉴于两药以上特点，我们试制了乳酸环丙沙星壳聚糖滴鼻剂，并建立其质量控制方法，旨在为临床提供更优良的制剂。1仪器与试剂Waters高效液相色谱仪（美国，包括515输液泵、2487紫外分光监视器、717自动进样器、Empower色谱工作站）；pH-3B型精密PH计（上海精密科学仪器有限公司）；紫外分光光度仪（日本岛津UV-2401P）；TG328A分析天平。乳酸环丙沙星原料（山西博达制药有限公司。批号：051211）；乳酸环丙沙星对照品(中国药品生物制品检验所提供。批号：130451-200302，含量84.9%)；壳聚糖（江苏镇江东元生物科技有限公司。批号：050118；医药级；相对分子量：1.51×106）；氯化钠（上海凌峰化学试剂有限公司。批号：060212）；环丙沙星壳聚糖滴鼻剂（本院自制）；乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯。2处方与制备2.1处方乳酸环丙沙星3.0g；氯化钠6.0g；壳聚糖2.0g；尼泊金乙酯0.3g；盐酸溶液（0.1moL·L-1）适量；重蒸馏水加至1000mL。2.2制备精密称取乳酸环丙沙星原料3.0g，加入重蒸馏水约300ml，滴加盐酸溶液（0.1moL·L-1）适量，用玻璃棒搅拌使其溶解，再加入氯化钠搅拌使其溶解；另取加热至85℃的重蒸馏水约400ml，加入壳聚糖2.0g并滴加HCl适量，使其自然胶溶至完全溶解，将上述两种液体搅拌，混合均匀，加重蒸馏水定容至1000mL，用1.0moL·L-1NaOH调节PH值至5.5，分装即得。3质量控制3.1性状本品为无色、微黏澄明溶液。3.2鉴别3取本品适量,用盐酸溶液稀释成含乳酸环丙沙星5mg·L-1，紫外分光光度法测定,于波长为277nm处有最大吸收。3.3检查取“2.2项”下制备好的供试品溶液测定PH值为5.5。3.4含量测定3.4.1色谱条件色谱柱XTerra.RP18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相:枸橼酸盐缓冲液-乙腈(80:20,用三乙胺调节PH值至3.5，使用前超声脱气，用0.45μm的微孔滤膜滤过),流速:1.0mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:277nm;进样量:10μL。3.4.2系统适应性试验对照品溶液的制备见“3.4.3”项，供试品溶液的制备见“3.4.7”项,称取处方量空白辅料,以“2.2”项下方法在不加主药乳酸环丙沙星的情况下，制备空白辅料溶液,按“3.4.7”项下方法制备空白样品溶液,进样10μL。由色谱图可见，空白辅料溶液不干扰乳酸环丙沙星对照品溶液和乳酸环丙沙星壳聚糖供试品溶液的测定。同时，乳酸环丙沙星对照品溶液和乳酸环丙沙星供试品溶液的保留时间分别为5.67min和5.65min（见下图1）。结果表明，系统适应性良好。.A:空白辅料；B.对照品；C.供试品A:BlanksampleB:controlC:sample3.4.3标准曲线的绘制精密称取105℃干燥至恒重的乳酸环丙沙星对照品10mg，置10mL容量瓶中，用7%磷酸溶液0.2mL和流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得乳酸环丙沙星标准品贮备液（1μg·μL-1）。分别精密吸取乳酸环丙沙星对照品贮备液0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2.0mL置10mL容量瓶中，加入流动相稀释、定容，震荡、过滤后，按“3.4.1”项下色谱条件，进样10μL，记录色谱图。以峰面积（A）对浓度（C，μg·mL-1）进行线性回归，得回归方程：A=75346C+11668(r=0.9999，n=6)。乳酸环丙沙星的线性范围：10~200μg·mL-1。结果表明，乳酸环丙沙星在10~200μg.mL-1范围内色谱峰面积与浓度具有良好的线性关系。3.4.4重现性试验选取已知含量的样品6份(批号:080515)，以“3.4.7”项下方法制备图1高效液相色谱图Fig1RP-HPLC4供试品溶液。按“3.4.1”项下色谱条件进样10μL，共3次。结果乳酸环丙沙星的含量相当于标示量的99.19%,RSD=0.78%。表明测定方法重现性较好。3.4.5精密度测定取“回收率测定”项下中间浓度的溶液，按“3.4.1”项下色谱条件，在同一天内连续测定5次,代入环丙沙星的回归方程计算含量。结果含量平均值为99.93%±0.04%,RSD为0.53%,表明日内精密度较好。取该溶液在第1、2、3天测定含量,平均值为99.81%±0.03%,RSD为0.68%,表明日间精密度良好。3.4.6加样回收率测定[4]取已知含量的样品6份(批号080515)，分别精密加入环丙沙星标准液0.5mL、1.0mL、1.5mL，置于10mL量瓶中,按“3.4.7”项下制备供试品溶液，进样10μL，记录色谱图，带入回归方程：A=75346C+11668，计算平均回收率。结果平均加样回收率为99.02％，RSD为0.94%。表明含量测定方法可靠。3.4.7样品含量测定准确量取自制乳酸环丙沙星壳聚糖滴鼻剂100mL,超声脱气10min，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。按“3.4.1”项下色谱条件进样10μL。连续平行测定5次,记录色谱图，带入回归方程：A=75346C+11668计算样品含量。结果见表1。3.5稳定性考察[3]取“2.2”项下样品溶液室温放置，分别于0、2、4、6、8、12、24小时测量其含量，同时检查pH值和观察其外观、澄明度等性质。结果，含量、外观无明显变化，PH值为5.50±0.01。4讨论环丙沙星的体外抗菌活性在目前临床应用的氟喹诺酮类抗生素中最强[1],目前已有多种环丙沙星的外用制剂应用于临床，发挥其强大的体外抗菌活性的优点[2]。壳聚糖的加入增加了滴鼻液的黏度,使主药在鼻腔内的滞留时间延长，从而提高药物的生物利用度。同时壳聚糖本身具有一定的治疗作用,在鼻腔抗菌、消炎、止血,促进创伤组织的再生愈合等方面具有较好的临床使用价值[3]。我们配制成复方制剂可以发挥两者的作用优势。表1样品含量测定结果Tab1ResultsofthecontentCiprofloxacinLactateinsample/n=35壳聚糖难溶于水及一般有机溶剂,可溶于酸性溶液,故配制时加盐酸溶液以帮助其溶解。由于鼻腔发炎或过敏时鼻腔粘液是碱性，有利于细菌生长繁殖，并对粘膜纤毛运动起到抑制和破坏作用，可能使主药析出。本制剂的PH值为5.0一6.0，既可抑制细菌的生长、繁殖，又防止因PH值的升高而可能使主药环丙沙星析出[5-6]。本品为无色、微黏澄明液体，适合于鼻腔给药。同时本制剂处方组成合理,制备工艺简便,便于医院配制。采用RP-HPLC法测定乳酸环丙沙星的含量,灵敏度高、操作较简便，结果准确，并且辅料对其测定无干扰，可作为内部质量控制的方法。乳酸环丙沙星壳聚糖滴鼻剂的临床疗效有待进一步探讨。参考文献1李端.药理学.第五版.北京：人民卫生出版社,2003:349.2孔繁明,陈莉,张士军.氟喹诺酮类药物制剂的制备及临床应用进展.中国疗养医学,2007,16(5):313.3张未.壳聚糖在新型给药系统中的最新应用进展.中山大学研究生学刊,2004,25(4):9.4王明丽,胡祥珍.乳酸环丙沙星凝胶滴耳剂的制备及质量考察.中国医院药学杂志,2004,24(5):147.5国家药典委员会编.中华人民共和国药典(二部).2005年版.北京:化学工业出版社,2005:239、附录9、176.6郭锡华.更昔洛韦滴眼液的制备及质量控制.医药导报,2006,25(9):947.6Fig1Tab1批号标示量/%RSD/%08051298.72%1.11%08051399.46％0.49％08051599.17％1.61％t/minAt/minBt/minC