中药化学课件.

第十二章其他成分第一节脂肪酸类化合物一、概述1.定义脂肪酸是脂肪族中含有羧基的一类化合物。2.分布此类化合物广泛分布于动植物中。3.生物合成以乙酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶A为原料而被生物合成的，它们在生物体内几乎均以酯的形式存在。1．饱和脂肪酸棕榈酸（16:0）：CH3-(CH2)14-COOH硬脂酸（18:0）：CH3-(CH2)16-COOH2．不饱和脂肪酸（1）单不饱和脂肪酸分子中有一个双键。油酸（18:1）：CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-COOH棕榈油酸（16:1）：CH3-(CH2)5-CH=CH-(CH2)7-COOH（2）多不饱和脂肪酸分子中有两个以上双键。二、脂肪酸的结构分类亚油酸（18:2）：CH3-(CH2)4-(CH=CH-CH2)2-(CH2)6-COOHα-亚麻酸（18:3）：CH3-CH2-(CH=CH-CH2)3-(CH2)6-COOHγ-亚麻酸（18:3）：CH3-(CH2)4-（CH=CH-CH2)3-(CH2)3-COOH花生四烯酸（20:4）：CH3-(CH2)4-(CH=CH-CH2)4-(CH2)2-COOH二十碳五烯酸（20:5）CH3-CH2-(CH=CH-CH2)5-(CH2)2-COOH，EPA二十二碳六烯酸（22:6）：CH3-CH2-(CH=CH-CH2)6-CH2-COOH,DHA分布：含2个或3个双键的脂肪酸-植物油脂4个以上双键的多不饱和脂肪酸-海洋动物的脂肪三、脂肪酸的理化性质1．溶解性脂肪酸不溶于水，溶于乙醚、己烷、苯、氯仿、热乙醇等有机溶剂，可溶于冷氢氧化钠溶液。2．酸性脂肪酸含有羧基，可与碱结合成盐。3．羟基的置换反应羧基中的羟基可被卤素、烃氧基、酰氧基、氨基等置换，分别生成酰卤、酯、酸酐和酰胺。4．酸败脂肪酸在空气中置久，会产生难闻的气味，这种变化称为酸败。5．显色反应（1）碘酸钾-碘化钾试验（2）溴的四氯化碳试验（3）高锰酸钾试验（4）溴-麝香草酚蓝试验样品溶液加溴-麝香草酚蓝试液，呈蓝色。四、脂肪酸的提取与分离1．提取（1）有机溶剂提取法常用乙醚、石油醚及环己烷等亲脂性有机溶剂进行提取，回收溶剂即得粗脂肪酸。（2）超临界流体萃取法通常在0.1Kpa~5Kpa，温度30℃~45℃下提取总脂肪酸。2．分离（1）蒸馏法减压分馏和分子蒸馏两类方法。（2）丙酮冷冻法原理：碳链长度及饱和程度不同的脂肪酸，在过冷的丙酮溶剂中溶解度不同，借此达到分离的目的。操作：将脂肪酸混合物加到预先冷至-25℃以下的丙酮中，搅拌，滤过，除去结晶，浓缩后，即得含有较高浓度的EPA及DHA。（3）脂肪酸盐结晶法将脂肪酸混合物经氢氧化钠醇溶液皂化为脂肪酸盐，冷却，使饱和及单不饱和脂肪酸盐析出，滤液酸化提取，得高浓度的多不饱和脂肪酸。此法适用于工业生产。（4）尿素结晶法原理：尿素能与脂肪族化合物形成加合物，形成加合物的能力与脂肪酸的饱和程度有关，不饱和程度愈低，愈易形成加合物。操作：将脂肪酸混合物与尿素的醇溶液混合，保温搅拌，冷却，滤过，得较高浓度的EPA和DHA。第二节有机含硫化合物1.芥子苷类-白芥子与黑芥子RCNOSO3KSglc+CNOSO3KSglcCH2CHCH2+CNOSO3SglcCHCHCH2CH2OHOCH2.(CH3)3NOCOHOCOCH3H3+芥子苷通式白芥子苷sinalbin黑芥子苷sinigrin芥子苷类化合物的特点：1.在植物体内通常以钾盐的形式存在，但有时也以钠盐、铵盐的形式存在。2.水解在中性条件下，以芥子苷酶进行水解，先生成葡萄糖和硫代羟肟酸，后者经转位最后产生异硫氰酸酯。2.大蒜新素（allitridi）-大蒜性质：淡黄色油状液体，相对密度1.085，折光率1.580（20℃）。药理作用：大蒜新素具有抗病原微生物、抗肿瘤、降血脂、清除自由基及保护肝、胃等作用。CH2=CH—CH2—S—S—S—CH2—CH=CH2大蒜新素（allitridi）蔊菜（Rorippamontana）的全草或花水煮沸，滤过滤液减压浓缩浓缩液加入乙醇至乙醇含量为75%，过滤沉淀滤液减压浓缩，10℃下放置，滤过沉淀滤液3.蔊菜素Rorifon沉淀40%NaOH溶液处理，水洗至中性粗品乙醇重结晶，硅胶柱色谱，EtOAc洗脱乙酸乙酯洗脱液浓缩，加Et2O至混浊，滤过蔊菜素祛疾作用较强，镇咳作用次之，平喘作用微弱。用于慢性支气管炎，可使痰量减少，咳喘减轻。此结晶不溶于酸或碱溶液，遇碘化铋钾呈橙红色。第三节氨基酸、环肽、蛋白质和酶NH2CHCOOHCH2NOOONHH2CCH3CNCH2COOHCOOHH使君子氨酸（quisqualicacid）海人草氨酸（kainicacid）使君子（Quisqualisindica）鹧鸪茶（Caloglossaleprieuii）一、氨基酸COOHHNNH2COOHC=ONH....NH2CH2CHCOOHH2NCOCH2CHCOOHNH2南瓜子氨酸（cucurbitine）三七素（dencichine）田七氨酸天门冬素（asparagine）（二）氨基酸的结构与分类中性、酸性和碱性氨基酸氨基和羧基相对位置氨基和羧基的数目α-氨基酸、β-氨基酸、γ-氨基酸等（三）氨基酸的理化性质性状无色结晶，具较高熔点溶解性易溶于水，难溶于有机溶剂成盐与强酸、强碱均能成盐；分子内氨基和羧基可相互作用生成盐等电点当将氨基酸溶液调至某一特定pH值时，氨基酸分子中羧基电离和氨基电离的趋势恰好相等，这时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。不同的氨基酸，具有不同的等电点。在氨基酸的等电点时，其溶解度最小，可以沉淀析出。酸性氨基酸2.8~3.2中性氨基酸4.8~6.3碱性氨基酸7.6~10.8茚三酮反应与亚硝酸反应除亚氨基酸（脯氨酸、羟脯氨酸）外，α-氨基酸中的氨基能与亚硝酸作用，放出氮气，生成α-羟基酸。（四）氨基酸的检识1．理化检识（1）Ninhydrin反应取供试液1ml，加0.2%茚三酮溶液2～3滴，摇匀，在沸水浴中加热5分钟，冷却后，如显蓝色或蓝紫色，表明含有氨基酸、多肽或蛋白质。供试液制备：取中药粗粉1~2g，加水10~20ml温浸1小时，滤过，得滤液。（2）吲哚醌试剂（Isatin反应）NHOO(3)1,2－茶醌－4－硫酸试剂（Folin试剂）OOSO3H2．色谱检识（1）纸色谱展开剂：①正丁醇-醋酸-乙醇-水（4:1:1:2）②甲醇-水-吡啶（20:20:4）③水饱和的酚（2）薄层色谱展开剂：①正丁醇-醋酸-水（4:1:5，上层）②氯仿-甲醇-17%氨水（2:2:1）③96%乙醇-26%氨水（77:23）④酚-水（3:1）（五）氨基酸的提取分离（1）水提法（2）稀乙醇提取法(1）溶剂法原理：根据各种氨基酸在水和乙醇等溶剂中溶解度的不同，将氨基酸彼此分离。胱氨酸和酪氨酸在冷水中极难溶解，而其它氨基酸易溶，故可将这两种氨基酸与其他氨基酸分离；酪氨酸在热水中溶解度大，而胱氨酸在冷、热水中溶解度均小，借此分离。氨基酸的分离（2）成盐法（3）电泳法将总氨基酸水溶液调至适当pH，于电泳槽或纸片上，在一定电场中，中性氨基酸留在原点，带净正电荷的碱性氨基酸移向阴极，带净负电荷的酸性氨基酸则移向阳极，此种现象称为电泳。氨基酸的电泳移速，与氨基酸本身所带电荷、缓冲液离子性质、pH值、粘度、温度等有关。溶液的pH越接近等电点，氨基酸净电荷越低，离子移动速度越慢；反之，则加快。控制电泳液pH，可使氨基酸完全分离。电压：0～30kV；分离柱为毛细管空管，内径100µm；紫外检测器，检测波长280nm；缓冲液：5mMNaH2PO4缓冲液（pH3.0）；样品：色氨酸(0.50g/L)、酪氨酸(饱和)的混合稀盐酸溶液。高效毛细管电泳仪总氨基酸水液pH5.5时阳离子交换树脂交换氨基酸强度碱性中性酸性阴离子交换树脂交换氨基酸强度酸性中性碱性（4）离子交换树脂法二、环肽（cyclopeptides）1．定义指由酰胺键或肽键形成的一类环状肽类化合物。主要来源于植物、海洋生物和微生物等。2.生物活性抗肿瘤、抗病毒和免疫调节作用：didemB-海洋被囊动物(Trididemnumsolidum)安眠作用：Zizyphine-酸枣仁（Ziziphusjujuba）二、分类IIIIIIA-B=-CHH-，CH（CO）CH2-，-COCH2R1，R2=芳基，烷基R3=氨基酸残基部分3．环肽的理化性质（1）性状一般易于结晶，熔点多高于260℃，有旋光性。（2）溶解性易溶于水，可溶于甲醇、氯仿等有机溶剂。4．环肽的提取分离（1）酸碱法采用经典的生物碱提取法，即酸提取液经中和、浓缩、碱化后，用硅胶柱色谱分离，不同比例氯仿-甲醇（99:1～70:30）洗脱。适用范围：Ⅰ型～Ⅲ型环肽分离。（2）溶剂法甲醇或乙醇提取，提取液浓缩，经溶剂（多用醋酸乙酯或氯仿）分离，通过硅胶柱色谱、高效液相色谱、制备薄层色谱以及制备衍生物等方法进一步分离。此法适合于Ⅴ型和Ⅵ型环肽分离。5．环肽的检识-薄层色谱吸附剂：硅胶G或硅胶H展开剂：氯仿-甲醇（9:1）显色剂：0.2%茚三酮溶液茜草中环肽的提取与分离三、蛋白质和酶一、概述（一）定义蛋白质为氨基酸经肽键相连聚合而成得高分子化合物（分子量几万～几百万），酶为具高度特异催化性的蛋白质。蛋白质一般作为杂质除去（中药注射剂中有蛋白质可引起异性蛋白过敏）。但有些蛋白质具一定生理活性或药理作用。天花粉蛋白中期引产菠萝蛋白酶抗水肿，抗炎雷丸素（蛋白酶）杀绦及钩虫超氧化歧化酶（SOD）延缓机体衰老２．蛋白质和酶的理化性质（1）溶解性多数蛋白质和酶溶于水，不溶于有机溶剂。蛋白质的溶解度受pH影响。（2）分子量蛋白质和酶的溶液具有亲水胶体特性，分子量多在一万以上，高的可达一千万左右，为高分子物质，不能透过半透膜，此性质可用于提纯蛋白质。（3）两性和等电点蛋白质分子两端有氨基和羧基，同氨基酸一样具有两性和等电点。（4）盐析和变性蛋白质和酶在水溶液中可被高浓度的硫酸铵或氯化钠溶液盐析而沉淀，此性质是可逆的。当蛋白质和酶被加热，或与酸、碱等作用时，则变性而失去活性，此反应不可逆。（5）水解蛋白质在酸、碱、酶等作用下可逐步水解，最终产物为各种α-氨基酸。（6）酶解酶具有很高的催化性及专属性。如麦芽糖酶（maltase）只能水解α-苷键，而对β-苷键无作用。（7）沉淀反应①与酸作用：蛋白质与鞣质、三氯醋酸、苦味酸、硅钨酸等反应产生不溶性物质。②与金属盐作用：蛋白质与多种金属盐如氯化高汞、硫酸铜等反应产生沉淀。（8）颜色反应①Biuret反应：蛋白质在碱性溶液中与稀硫酸铜溶液作用，产生红色或紫红色。②Dansyl反应：分子中末端氨基在碳酸氢钠溶液中与1-二甲氨基萘5-磺酰氯反应生成相应的磺酰胺衍生物，显黄色荧光3.蛋白质与酶的提取与分离一般采用水或5%～8%的氯化钠水溶液提取蛋白质1．分级沉淀法分离（1）有机溶剂分级沉淀法溶剂：EtOH,MeOH（2）无机盐分级沉淀法（3）pH分级沉淀法利用蛋白质在等电点时溶解度最小的原理改变pH值进行沉淀。②透析法除去粗蛋白中的盐类及其它小分子杂质③超速离心法不同分子量的蛋白质经超速离心，其沉降速度有显著差异，借以分离不同分子量的蛋白质混合物。④色谱法常用的色谱法有离子交换色谱法、葡聚糖凝胶色谱法等。①加热沉淀实验②Biuret反应③Solwaypurple反应3.蛋白质与酶的检识薄层吸附剂：硅胶G展开剂：氯仿-甲醇（或丙酮）（9:1）显色剂：2%茚三酮溶液天花粉蛋白的提取第十三章中药复方药效物质基础研究复方原意：以两个或两个以上的单方组成的方剂金人成无己的《伤寒明理论·序》现代人所说复方：由两味或两味以上的中药组成。六味地黄丸、麻黄汤、四君子汤第一节研究意义及必要性中药复方物质基础研究1、是中药复方研究的关键问题2、有利于阐释中医药理论3、可搭建中西医结合的纽带和桥梁4、中药现代化的必经途径5、促进中药制剂等相关学科的发展第二节研究进展一、中药复方配伍理论的物质基础研究四逆汤《伤寒论》中回阳救逆代表方生脉散半夏泻心汤