2-1微生物的实验室培养2

2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05微生物的实验室培养2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05特点：小简低微生物病毒细菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界真菌界病毒界是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。1.分类一、微生物2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05芽孢：细菌形成的椭圆形的休眠体2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05放线菌⑴结构：单细胞原核生物分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05（2）繁殖孢子丝|孢子2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05菌落单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05细菌的菌落特征因种而异菌落2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05菌落单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05C、H、O、N、P、S五大营养物质碳源氮源生长因子水无机盐微生物化学元素组成：2.营养及功能2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05二、培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养基质。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、半固体培养基。（2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分分：天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05固体培养基：菌落2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05半固体培养基：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作051000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组分提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨10g氮源和维生素NaCl5g无机盐H2O定容在1000mL氢元素、氧元素2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作054.培养基的用途液体培养基：增菌、工业生产固体培养基：纯化（分离），鉴定、活菌计数、保藏菌种半固体培养基：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作051.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。三、无菌技术2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05（1）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别（2）灭菌的定义：3.常用的消毒与灭菌的方法2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作051.灼烧灭菌灭菌的方法：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052.干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3.高压蒸气灭菌100kPa、121℃下维持15-30min.2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05微生物实验室培养的基本操作程序1.器具的灭菌2.培养基的配制3.培养基的灭菌4.倒平板5.微生物接种6.恒温箱中培养7.菌种的保存2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g将上述物质溶解后，添加自来水，定容至1000mL(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)四、实验操作2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作051．计算、称量2．溶化3．调pH：pH7．64．过滤：这一步可以省去。5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6．加塞7．包扎操作步骤2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作058．灭菌:将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作059．倒平板:待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05倒平板技术①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。12342010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05倒平板技术②右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。12342010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05倒平板技术1234③用左手拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05倒平板技术1234④等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作059．倒平板:待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。10．无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05（二）纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05平板划线的操作方法2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05稀释涂布平板法2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作051.将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101~106的顺序编号。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052.用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作053.从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处.2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？问题讨论2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05微生物的恒温培养微生物的恒温培养2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05微生物的恒温培养2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05菌种的保存1.临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。2.长期保存：甘油冷冻管藏法2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05四、课题成果评价（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05（三）是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？C、H、O、N、P、S五大营养物质碳源氮源生长因子水无机盐微生物化学元素组成：思考12010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。思考22010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作051.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。问题讨论2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05需要使锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？思考3答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。思考42010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？思考5答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作051.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？思考62010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作05答：第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；