不同地方区域麻黄中麻黄碱含量的测定

中国是世界上惟一的天然麻黄碱生产国，麻黄为我国特产中药。我国麻黄的主要产地是内蒙古，其次是新疆、山西、吉林、辽宁、宁夏、甘肃、陕西、河北、河南等地。草麻黄产量最大，麻黄商品主流；中麻黄次之，木贼麻黄产量最小。其他药源：丽江麻黄产云南，四川，贵州。表面具较粗深的纵沟纹。膜质叶先端2裂。麻黄碱含量不少于0.6％。每年仅新疆地区，消耗麻黄草的用量在8～10万吨左右。由于生长麻黄草的主产区是中国沙漠化最为严重的地方。而麻黄草又是这些地区的主要固沙植物，所以，近年来麻黄草的过度采挖，已经对这些地区的生态环境造成了严重影响。因此。以化学合成手段生产符合市场要求的麻黄碱将是减少麻黄草的采挖，保护生态环境，满足市场需求的有效途径。目前，化学合成手段生产麻黄碱面临的主要问题是如何低成本地得到光学纯的产物。后面合成的时候我们再具体介绍。三种麻黄的性状比较：草麻黄（1）呈细长圆柱形，略扁，少分枝，直径l～2mm。（2）表面淡绿色至黄绿色，有细纵棱线，触之微有粗糙感。（3）节明显，节间长2～6cm。节上有膜质鳞叶，裂片2（稀3），锐三角形，先端灰白色，反曲，基部连合成筒状，红棕色。（4）体轻，质脆，易折断。断面近圆形，略呈纤维性，周边黄绿色，中央髓部红色或红棕色，类圆形。（5）气微香，味涩、微苦。选择时：以干燥、茎淡绿、内心充实红棕、手拉不脱节、味苦涩者为佳。中麻黄：（1）多分枝，直径1.5mm～3mm，有粗糙感。（2）节间长2cm～6cm。（3）膜质鳞叶长2mm～3mm，裂片3（稀2），先端锐尖、断面髓部呈三角状圆形。茎节表面观木贼麻黄：（1）较多分枝,直径1～1.5mm，无粗糙感。（2）节间上1.5cm～3cm，膜质鳞叶长1～2mm，裂片2（稀3），上部为短三角形，灰白色，先端多不反曲，基部棕红色至棕黑色。三种麻黄的共性：①均具节与节间。②表面具纵棱线。③叶退化成膜质鳞叶，基部联合成筒状。④折断时有粉尘飞出。⑤断面髓部红棕色（玫瑰心）。⑥味苦涩（生物碱、鞣质）。【采收加工】秋季采割绿色的草质茎，阴干或晾至七成干时晒干。曝晒过久则色易变黄，受霜冻则色变红，均影响药效。本实验对不同溶剂提取麻黄的方法进行比较，采用HPLCc4法测定不同产地麻黄中麻黄碱的含量，为制剂越婢加术颗粒的麻黄药材来源提供可靠保障。一，麻黄与麻黄碱的来源之异同：麻黄的来源：麻黄是一种药用植物,为麻黄科植物草麻黄或木贼麻黄或中麻黄的干燥草质茎。麻黄是一种与麻黄碱同效的草药,而麻黄碱是其主要有效成分之一,5中国药典6规定麻黄草中麻黄碱(C10H15NO)的含量018%以上才符合药用标准。麻黄碱的来源：麻黄碱可以从麻黄植物中提取麻黄碱,也可以有机合成法合成麻黄碱、微生物发酵生成麻黄碱、细胞培养法生成麻黄碱。二，麻黄的化学成分：麻黄主含生物碱,主要是1-麻黄碱、d-伪麻黄碱、麻黄次碱及甲基麻黄碱和去甲基麻黄碱等,另含少量的挥发油、有机酸等成分。其中主要药用成分为麻黄碱和伪麻黄碱。麻黄碱是植物麻黄的主要药用成分之一。三，麻黄与麻黄碱的药理作用之异同：麻黄的药理作用：（1）发汗作用：麻黄发汗作用已为几千年临床所证实,古人也正是利用其发汗作用,治疗风寒束表、发热无汗的表实证。实验证明,麻黄的挥发油有发汗作用,也曾有人观察到在一般情况下,麻黄虽不能诱发人体出汗,但当人处在温热环境中,用麻黄50~60mg、经015~210h后,汗腺分泌确比未用麻黄者更多、更快。其发汗作用,有人认为可能是由于麻黄阻碍了汗腺导管对钠的重吸收而导致汗液分泌增加。现已发现,麻黄根的生物碱部分能抑制低热和烟碱所致的发汗,此与临床经验相吻合。（2）平喘作用麻黄平喘作用,沿用千年,但其作用及作用机理的探讨,直至21世纪30年代始进行。大量的试验研究证明,麻黄碱是平喘的有效成分。其平喘机理主要是通过以下环节实现的。(1)促进肾上腺素能神经和肾上腺髓质嗜铬细胞释放去甲肾上腺素和肾上腺素而间接发挥拟腺素的作用。(2)因其化学结构与肾上腺素相似,亦可直接与支气管平滑肌上的B-肾上腺素受体结合,使支气管平滑肌松弛。(3)阻止过敏介质的释放。(4)直接兴奋A-肾上腺素受体,使末梢血管收缩,从而可缓解支气管粘膜的肿胀,对哮喘的发作和预防有效。麻黄碱的平喘作用与肾上腺素相比,其特点是显效较慢,而作用温和、持久,且口服有效。（3）利尿作用麻黄有一定的利尿作用,以d-伪麻黄碱作用最显著。利尿作用的机理,有人认为是由于其扩张肾血管使肾血流增加的结果,也有人认为是阻碍肾小管对钠离子重吸收的缘故。（4）升高血压麻黄碱能兴奋肾上腺素能神经而使心跳加快,心肌收缩力增强,心输出增加,血管收缩,血压升高。因其同时兴奋A、B-肾上腺素受体。故收缩压的升高较舒张压明显,其升压特点是缓慢、温和、持久,反复应用易产生快速耐受体。（5）兴奋中枢神经系统麻黄对中枢神经系统有兴奋作用,以麻黄碱最为突出,治疗剂量即能兴奋大脑皮质和皮质下中枢,引起精神兴奋、失眠等症状,并可缩短巴比妥类催眠作用时间,亦能兴奋中脑,延脑呼吸中枢和血管运动中枢。（6）解热、抗病毒。麻黄碱的药理作用：对心血管系统的作用(1)对心脏的影响麻黄碱通过激动B受体,加快心率,增加收缩力。(2)对血管及血压的影响麻黄碱激动A受体而收缩动脉。麻黄碱和伪麻黄碱均有升高血压、增加心输出量的作用。对胃肠道、气管、输精管等平滑活动的影响麻黄碱激动A受体增强小鼠输精管的自发收缩活动,同时麻黄碱作用于突触前膜受体,而增强电刺激致小鼠输精管的收缩[1,2]。激动B受体,舒张气管平滑肌,且麻黄碱与异丙肾上腺素有交叉脱敏现象。对神经肌肉传递的作用低浓度麻黄碱可通过选择性激动B2受体,而拮抗高K去极化引起的大鼠膈肌麻痹。对中枢神经系统的作用麻黄碱兴奋中枢神经系统。1仪器与试药1．1仪器岛津(SHIMADZU)LC高效液相色谱仪，SHIMADZULC一20AT多功能紫外检测仪，SHIMADZUSPD一20A型泵，LCsolutionLite色谱工作站，海尔冰箱，万用电炉(北京市永光明医疗仪器厂)，电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)，循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)，1／10万分析天平(上海精天电子仪器厂)，超声波清洗器(巩义市予华仪器有限责任公司，型号KQ一500E)，回流装置。1．2试药甲醇(上海沃凯)色谱纯，乙腈(上海沃凯)色谱纯，甲醇，磷酸二氢钾，三乙胺，磷酸，95％乙醇，盐酸均为分析纯，娃哈哈纯净水，氢氧化钠，盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号1241—200102，含量99．9％)，蒸馏水。1．3药材4种麻黄药材来源于哈尔滨医科大学大庆校区中药标本馆，经该校生药研究室魏东华教授鉴定均为麻黄科植物草麻黄(Ephedraesinicastapf)的干燥草质茎。2方法和结果2．1色谱条件色谱柱为INERTSILODS—SP柱(4．6mnl×150mm，5m)，检测波长：205nm，流动相：乙腈一(0．02mol／L磷酸二氢钾+0．02％三乙胺+0．2％磷酸水溶液)(10：90)，流速：1ml／min，进样量10l。2．2溶液制备2．2．1对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱标准品4mg，置50ml量瓶中，甲醇溶液稀释至刻度，得80g／ml对照品溶液。2．2．2样品溶液的制备分别精密称取产地为山西、河北、陕西、内蒙的麻黄粗粉各5g，各置于250ml圆底烧瓶中，加70％乙醇50ml回流1h，过滤，重复回流3次，合并滤液，最后制成每100ml相当麻黄生药lg的4份不同产地的麻黄样品溶液。对照品和样品色谱图如图1。1．盐酸麻黄碱图1对照品(A)样品(B)HPLC色谱图2．3线性关系考察精密吸取8Og／ml对照品溶液l0、8、6、5和2．5Tn1分别置10m1量瓶中，甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为80、64、48、40和20g／IIll的对照品溶液，在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液各10l进样，记录色谱峰峰面积，以盐酸麻黄碱对照品的含量(g)为横坐标，峰面积积分值l，为纵坐标进行回归，得回归方程为Y=5E+0．6X+119445(r=0．9997)，线性范围为0．2—0．8g02．4精密度试验精密吸取对照品溶液10，分别自上述色谱条件下，连续进样5次，记录色谱峰面积，计算麻黄碱峰面积积分值，RSD值为0．71％。理论塔板数为2354，表明仪器的精密度良好。2．5稳定性试验精密吸取山西样品溶液，于配制后0、2．5、5．0、7．5、10．0和l2．5h自上述色谱条件下分别进样测定，共测定5次，记录色谱峰面积，计算麻黄碱峰面积积分值，RSD值为1．53％。表明山西样品溶液在l2．5h内稳定。2．6加样回收率试验精密称取已知麻黄碱含量的山西麻黄5份，每份2．5g，分别准确加入盐酸麻黄碱标准品适量，依照样品溶液的制备方法制备成5份样品，按上述色谱条件进样，记录麻黄碱峰面积，计算麻黄碱平均回收率(r／,=5)为98．21％，RSD值为0．79％。2．7提取方法的确定本实验在考察含量测定的同时，注重提取方法的研究。本实验对水蒸气蒸馏法，酸水回流法，乙醇回流法，盐酸乙醇回流法，半仿生法进行了对比[引。2．7．1水蒸气蒸馏法取麻黄粗粉10g，置圆底烧瓶中，加100ml水，冷浸10min，回流3次，分别为1、0．5和0．5h，每次过滤，合并滤液，浓缩，于60℃干燥，称重。2．7．2酸水回流法取麻黄粗粉10g，置圆底烧瓶中，加100ml水，O．75ml盐酸，冷浸10min，回流3次，分别为l、0．5和0．5h，每次过滤，合并滤液，浓缩，于60℃干燥，称重。2．7．3乙醇回流法取麻黄粗粉10g，置圆底烧瓶中，加60％乙醇100ml，回流3次，每次1h，每次过滤，合并滤液，浓缩，于6O℃干燥，称重。2．7．4酸水乙醇回流法取麻黄粗粉l0g，置圆底烧瓶中，加60％乙醇100ml，0．75ml盐酸，回流3次，分别为1、0．5和0．5h，每次过滤，合并滤液，浓缩，于60℃干燥，称重J。2．7．5半仿生法取麻黄粗粉1Og，置锥形瓶中，加100ml水，加盐酸调至pH=1，煎煮0．5h，过滤，滤渣加80ml水，加氢氧化钠调至pH=10，煎煮2次，每次0．5h，每次过滤，合并滤液，浓缩，于60℃干燥，称重。精密吸取按上述5种方法提取的麻黄浸膏适量，分别加入甲醇适量制成每100ml相当麻黄生药1g的样品溶液。精密吸取对照品溶液和上述5种样品溶液各10l，按照“2．1”项下色谱条件分别进样，记录色谱峰面积，计算麻黄碱含量，结果半仿生法从麻黄中提取的盐酸麻黄碱含量最高，乙醇回流法次之，其次为盐酸乙醇回流法，酸水回流法，水蒸气蒸馏法。考虑到乙醇回流法较半仿生法差距不甚显著，且半仿生法对实验器材要求较高，由此确定了乙醇回流法为提取麻黄较好的方法，其原因在于游离的麻黄碱在提取和干燥的过程中易蒸发损失，水的沸点比乙醇高，因而损失较多，乙醇可减少蒸发损失，提取量也较高引。见表1。表1提取方法结果比较2．8样品含量测定结果精密吸取“2．2．2”项下方法制备的四种不同产地麻黄样品溶液l0l，按“2．1”项下色谱条件，分别注入液相色谱仪，每份测定3次，记录峰面积，计算样品溶液中麻黄碱含量。结果见表23讨论：HPLC法测定麻黄碱含量的报道较多，色谱条件多样，本实验分别考察了5种流动相：甲醇一水、乙腈一水、乙腈一0．1％磷酸水溶液、乙腈一0．2％磷酸水溶液、乙腈～(0．02mol／L磷酸二氢钾+0．02％三乙胺+0．2％磷酸水溶液)，前4种流动相均有不同情况的拖尾或基线漂移现象。结果流动相为乙腈一(0．02mol／L磷酸二氢钾+0．02％三乙胺+0．2％磷酸水溶液)(10：90)基线平稳，可使色谱峰较好分离，加入三乙胺试剂可防止拖尾现象发生．1叫。在麻黄提取工艺中，乙醇回流法为较好的提取方法。不同产地麻黄中麻黄碱含量差异较大，以山西的最高，其次为河北，再次为内蒙，陕西麻黄最低。说明产地因素对麻黄中麻黄碱的含量有重要影响。