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中国科学技术大学2004--2005学年第1学期考试试卷key一、填空题:(30分,1-10每题1分,2-20每题2分)1.一条DNAstrand为5’ATGTACCGATA,转录为mRNAstrand的序列为:(3’UACAUGGCUAU)。2.为什么不同来源的DNA的Tm值不同?因为不同生物(GC)%/(AT)%不同3.嘌呤环上的第9位氮原子与戊糖的第1位碳原子相连形成糖苷键,形成的化合物为嘌呤核苷。4.胰凝乳蛋白酶的催化三联体为:Ser195-His57-Asp1025.抗体酶的原理是什么?利用底物过渡态类似物为半抗原免疫动物获得单克隆抗体,具有催化底物生成产物的功能。6.ATCase(aspartatetranscarbamylase)活性受到CTP的负调控;受到ATP的正调控。(填正、负)。7.纤维素和淀粉都是1→4连接的D-葡聚糖,但纤维素的二糖单位是纤维二糖,残基间通过β(1→4)糖苷键连接;而直链淀粉链的二糖单位是麦芽糖,残基间通过α(1→4)糖苷键连接。所以两者在物理性质上有很大差别。8.MembraneAsymmetry表现为1.内外膜膜脂分布的不对称,膜蛋白分布的不对称,膜糖基本分布于膜外侧。9.肽聚糖的结构单位为胞壁肽,是一个含四肽侧链的二糖单位,四肽侧链中的氨基酸以D型和L型交替排列,可防止酶对它的降解作用。10.Storedfat的meltingpoint要比体温低几度。(填高,低)。11.血型(ABO)是遗传的,血型抗原受基因支配,基因支配的直接产物是专一性的糖基转移酶,再由这些专一性的酶实现血型决定决定簇的合成。12.脂质在血液中的运输,脂肪酸与血浆中的血清清蛋白结合进行运输,磷脂、三酰甘油、胆固醇等-以脂蛋白颗粒形式进行运输。13.甘油磷酯以磷脂酸为骨架,根据极性头部的不同,有磷脂酰胆碱,磷脂酰丝氨酸,磷脂酰乙醇氨,磷脂酰肌醇,磷脂酰甘油(写出三种)。14.integralproteins的跨膜区域一般有20-25个(假如为α-helix跨膜)7-9个(假如为β-sheet跨膜)连续的疏水氨基酸区域。2004--2005学年第1学期第页(共15页)215为什么胰凝乳蛋白酶不能象胰蛋白酶那样自我激活?因为胰脏内无胰凝乳蛋白酶的抑制剂,如能自我激活,会消化器官造成损伤。16与酶高催化效率的有关因素有:邻近定向效应,酸碱催化效应,共价催化效应,形变张力,多元催化。17.DNA双螺旋结构模型,DNA双螺旋直径为2nm,沿轴向每3.4nm旋转一整圈,约相当于10对核苷酸对。糖和磷酸位于双螺旋的外侧,碱基位于内侧。18.为什么双螺旋结构的DNA在高离子强度的溶液中比低离子强度的溶液更稳定?高离子强度,Tm高。19.PCR是聚合酶链式反应,DNA扩增倍数可达2n倍。反应体系包括1.templateDNA,2.thermostableDNApolymerase:e.g.TaqpolfromThermusaquaticus(livesat90°C)2.deoxyribonucleotides(dNTPs),4.2primers,5.buffer(containingMgCl2)。20.Triacylglycerols和polysaccharides两者在贮能上相比较,其优越性分别为前者每单位贮存能量值高,后者动用快。二、问答题(25分)1.对活细胞的实验测定表明,酶的底物浓度通常就在这种底物的Km附近。请解释其生理意义。为什么底物浓度不是高于Km或大大低于Km呢?(4分)当底物浓度大大低于Km值时,酶不能被底物饱和,从酶的利用角度而言,很不经济;当底物浓度大大高于Km值时,酶趋于饱和,随底物浓度改变不大,不利于反应速度的调节;当底物浓度在Km值附近,反应速度对底物浓度的变化较为敏感,有利于反应速度的调节。2.考虑以下方程,试根据稳态假定导出米氏方程,并分析KM、kcat与k1、k-1、k2的关系。(4分)稳态:d[ES]/dt=0K1[E][S]=(K-1+K2)[ES],Km=(K-1+K2)/K1v=Vmax/(Km+[S])V=kcat[Et][S]/(KM+[S])S远大于km,V=kcat[Et]=k2[ES],Kcat=K2S远小于km,V=(kcat/KM)[Et][S]表观二级速率常数(kcat/KM)=k2k1/(k2+K-1)E+SESESE+Pk1k2k-12004--2005学年第1学期第页(共15页)35’…TGTAAGCTTCTTGA…3’3’…ACATTCGAAGAACT…5’3.请写出上述DNA双链的回文结构,并判断用HindⅢ(识别序列为A↓AGCTT)限制性内切酶切割后的产生的DNA片断。(3分)回文结构5`AAGCTTCTT3`3`TTCGAAGAA5`HindⅢ5`TGTA3`3`ACATTCGAAGA5`5`AGCTTCTTGA3`3`ACT5`4.在一酶促反应体系中,根据抑制剂的存在(2mmol/L)和缺失,加入不同浓度的底物后反应速度如下表底物浓度(umol/L)无抑制剂反应速度加抑制剂反应速度310.42.1514.52.91022.54.53033.86.89040.58.1(a)求抑制剂存在和缺失时的Vmax和Km;(b)判断该抑制的类型;(c)假如[S]=10umol/L,求抑制剂存在和缺失时的酶的活性部位被底物饱和的百分数(fES)。(5分)解:(a)1/v=Km/(Vmax[s])+1/Vmaxintheabsenceofinhibitor,Vmaxis47.6umol/min,Kmis11umol/Linthepresenceofinhibitor,Vmaxis9.5umol/min,Km`is11umol/L(2分)(b)uncompetitiveinhibition(2分)(c)intheabsenceofinhibitor,fES=V/Vmax=[s]/([s]+Km)=10/(10+11)=0.476inthepresenceofinhibitor,fES=V/Vmax=[s]/([s]+Km`)=10/(10+11)=0.476(1分)5.用Sangermethod测定DNA序列,星号为荧光标记的引物。DNAsample和DNApolymerase分别与下列的nucleotidemixtue(inanappropriatebuffer)反应,ddNTP的加入量相对很少。2004--2005学年第1学期第页(共15页)4反应后的DNA用agarosegelelectrophoresis分离,mixture1在胶上的florescentbands显示如下,请标出mixture2、3、4的florescentbands。(6分)
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