一轮复习动物细胞工程.

考纲点击考情示例植物组织培养Ⅱ动物的细胞培养与体细胞克隆Ⅰ细胞融合与单克隆抗体Ⅱ2013四川1、江苏11、课标全国卷Ⅱ40、天津9、重庆2、海南31、浙江62012广东2、江苏22、北京312011江苏14,16、广东32015高考导航细胞工程动物细胞工程常用的技术手段动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体核移植_________________是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞培养技术动物细胞培养动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖.2.原理：细胞增殖1.概念3.过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液（单个细胞）胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系剪碎细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。动物细胞生长特性：1.细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。2.接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。原代培养：将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。传代培养：用胰蛋白酶将出现接触抑制的贴壁细胞从培养瓶壁上脱离下来，制成细胞悬液，分装到多个培养瓶中继续培养，这个过程叫传代培养。上述过程中，在第一培养瓶中培养到接触抑制就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等、维生素。）3、温度和PH36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。4、气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2）补充合成培养基中缺乏的物质4.动物细胞培养的条件•（1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。•（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。还可作为基因工程中的受体细胞。•（3）用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。•（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据5.动物细胞培养技术的应用获得细胞细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物组织培养和动物细胞培养的比较二、动物体细胞核移植技术:将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物1.核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植（难度高）电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎卵母细胞采集、培养MⅡ期卵母细胞供体牛供体细胞注入去核卵母细胞代孕母牛克隆牛体细胞培养去核卵母细胞去核胚胎移植2.体细胞核移植过程（体细胞克隆动物）3.体细胞核移植技术的应用前景畜牧业、医药卫生以及其他领域有着广泛应用前景1加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育2保护濒危物种，增加动物的存活数量3可作为生物反应器，生产医用蛋白，克隆动物细胞、组织、器官可作为移植的供体，了解胚胎发育及衰老过程、做疾病模型等4.体细胞核移植技术存在的问题1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。2.成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。5.克隆动物的研究意义1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白2.改良动物品种3.治疗人类疾病，作为供体4.保护濒危动物诱导方式物理法化学法生物法：灭活的病毒三、动物细胞融合1.方法是指两个或两个以上的细胞融合为一个细胞的过程。2.动物细胞融合的原理：细胞膜的流动性四、单克隆抗体什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。效应B淋巴细胞产生抗体。1、单克隆抗体制备过程注射抗原效应B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体诱导其融合的方法有哪些？1细胞两两融合后，有哪些类型？B-BB-瘤(杂交瘤细胞)瘤-瘤2如何筛选出杂交瘤细胞？单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。2、单抗隆抗体的应用①作为诊断试剂②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。③用于治疗疾病和运载药物利用同位素标记单抗，在特定组织成像制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。1.以下四种细胞工程技术中培育出的新个体，只有一个亲本遗传性状的方法是()A．植物组织培养B．细胞融合C．动物胚胎移植D．细胞核移植A（课标Ⅰ卷）40.[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞（染色体数目40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目60条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：（1）制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是小鼠，理由是Y小鼠的抗体效价最高四Y2）细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有，体系中出现多种类型细胞的原因是。（3）杂交瘤细胞中有个细胞核，染色体数目最多是条。（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是。不能无限增殖B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，且融合率达不到100%1200