《实验诊断学》红细胞与白细胞数量测定实验

《实验诊断学》实验报告实验一红细胞计数、白细胞计数学院：专业年级：学号：姓名：实验日期：2015一.实验原理1.红细胞计数用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算求得每升血液中的红细胞数量。2.白细胞计数血液经白细胞稀释液稀释，成熟红细胞全被溶解，在显微镜下计数一定体积内白细胞数，换算出每升血液中白细胞数量。二.实验内容与步骤1.实验器材改良Neubauer计数板、显微镜、盖玻片、试管、微量吸管、移液管、洗耳球、生理盐水、RBC稀释液、WBC稀释液（冰乙酸3ml、蒸馏97ml、10g/L亚甲蓝溶液3滴混合过滤后备用）2.实验步骤（1）红细胞计数1、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试管内。2、用微量吸管吸至l0ul处。3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。6、待3~5分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。红细胞计数的区域：中心大方格中的5个中方格(正中一个和四角各一个)。计数原则：数上不数下，数左不数右的计数原则即凡压在中方格边线(双线)上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不计入。计算方式：RBC/L＝5个中方格内RBC数×5×10×200×106＝5个中方格内RBC数/100×1012参考值：男性：(4.0～5.5)×1012/L女性：(3.5～5.0)×1012/L新生儿：(6.0～7.0)×1012/L（2）白细胞计数1、取小试管一支，加白细胞稀释液0.38ml。2、用微量吸管准确吸收末梢血20ul,擦去管外余血，将吸管插入试管中稀释液底部，轻轻将血液放出，并吸取上清液清洗吸管两次，混匀。3、待红细胞完全破坏，液体变为棕褐色后，再次混匀后充池，静置2~3min，待白细胞下沉。4、用低倍镜计数四角4个大方格内的白细胞数，对压线细胞按“数上不数下、数左不数右”的原则进行计数。计算方式：WBC/L＝(4个大方格内WBC数/4)×10×20×106＝(4个大方格内WBC数/20)×109参考区间：成年男性：（3.97~9.15）×109/L成年女性：（3.69~9.16）×109/L儿童：（8~10）×109/L婴儿：（11~12）×109/L新生儿：20×109/L三.实验结果红细胞计数实验结果如下图：左上角方格右上角方格右下角方格左下角方格正中方格表一红细胞分类计数表左上角方格右上角方格右下角方格左下角方格正中方格421302248480RBC/L＝5个中方格内RBC数×5×10×200×106＝5个中方格内RBC数/100×1012＝（42+130+224+84+80）/100×1012＝5.60×1012本实验使用的血液标本来自于一52岁男性，成年男性红细胞量参考范围(4.0～5.5)×1012/L。因此实验测得数据略大于正常范围。白细胞计数实验结果如下图：右上角方格左下角方格右下角方格左下角方格表一红细胞分类计数表左上角方格右上角方格右下角方格左下角方格518081103WBC/L＝(4个大方格内WBC数/4)×10×20×106＝(4个大方格内WBC数/20)×109＝[(51+80+81+103)/20]×109=15.75×109本实验使用的血液标本来自于一52岁男性，成年白性红细胞量参考范围（3.97~9.15）×109/L。因此实验测得数据远大于正常范围。四.讨论1.红细胞计数：本实验使用的血液标本来自于一52岁男性，测得红细胞量为5.60×1012。成年男性红细胞量参考范围(4.0～5.5)×1012/L。因此实验测得数据略大于正常范围。就实验结果来说，只是略大于正常范围，应当可以接受。但是在实验过程中也出现了一些不规范的操作或失误。比如：在使用移液管时双眼未平视液面最底部与刻度线相切；在使用微量吸管的时候，吸取血液的量有偏差，而且在吸取上清液清洗微量吸管时，有少量上清液被吸入胶头，造成结果偏差；观察右下角方格中的红细胞时，发现其中有聚集在一起的红细胞团，推测可能是血液在微量吸管中时间过长，发生凝固，亦或是加入红细胞稀释剂后未搅拌均匀。2.白细胞计数：本实验使用的血液标本来自于一52岁男性，测得白细胞量为15.75×109。成年白性红细胞量参考范围（3.97~9.15）×109/L。因此实验测得数据远大于正常范围。此实验结果大大超出了预计范围，一般来说，此实验中，白细胞数量偏高可能原因有两方面：一方面是实验操作失误，另一方面是被采血者处于病理状态。实验中可能出现的失误有：（1）用微量吸管吸取血液后未将吸管外周的血液擦拭干净。（2）将稀释后的血液滴至计数板上是，血液未充满玻片与计数板之间的空隙，所以实验时又多加了一滴，可能造成结果偏差。（3）移液管吸取0.38mL稀释液至试管中时，可能有少量残余在移液管中，导致血液稀释倍数不够。如果患者是因为病理原因出现白细胞数量过高可能的原因有：（1）细菌感染,炎症（2）寄生虫病、过敏性疾病及某些皮肤病（3）慢性粒细胞白血病及慢性溶血性贫血