SamplePreparation

•28判断前处理方法好不好的原则之一前处理省时才是真正的省时分析过程时间分布图•29判断前处理方法好不好的原则之二简便、高效的前处理更大程度地降低误差色谱分析误差来源分布表•30怎么办？实际样品成分太复杂颗粒物色素、淀粉和糖蛋白质，多肽，氨基酸磷脂、油脂有机酸，有机碱含硫化合物（大蒜、韭菜）盐类•31X当前的样品不能直接进行色谱分析!!!同时出峰---样品基质含有其它物质,干扰目标化合物分析无法检出---分析物未得到足够浓缩,而不能满足定量测定污染色谱配件---对色谱柱或者色谱系统不兼容或者有损害样品前处理：采样技术和样品制备技术。采集→样品→适合分析的形态。过程→耗时、繁琐、误差前处理不好→需要灵敏度高、测定范围宽的检测器和分离效率高的分离柱。一、进展和发展趋势衍生化derivation•种类–柱前–柱后•目的•方法–有机物衍生–无机物衍生气相色谱衍生化目的•增加样品挥发性•减弱样品的吸附活性–去除化合物中的活泼氢原子，改变样品与固定液的配位特性•柱外或者柱上衍生获得更多配位特性有机物衍生•硅烷化•酯化•酰化硅烷化•可硅烷化物质–-OH、-NH2、-NHR、-COOH、-SH•硅烷化试剂–TMCS三甲基氯硅烷•优点–衍生物更易挥发，更加热稳定•缺点–试剂和衍生物一般对水都非常敏感–糖类的TMS衍生物除外酯化•甲基酯类：最常见的羧酸衍生物–挥发性好–高脂肪酸的气相色谱测定–易分离，必须无水介质中进行•甲酯化方法–浓硫酸甲醇法•慢，难定量•可用BF3催化加速–重氮甲烷•反应快，有毒易爆，-20度贮藏•不适合不饱和脂肪酸酰化•适用基团–对羟基、氨基、巯基•酰化试剂–酸酐类物–最好：BMTFA–常用：TFAA，PFPA，HFBA无机物衍生•水分衍生•无机气体衍生•无机酸•金属元素液相色谱衍生•紫外衍生•荧光衍生•取已剪碎的发样0.1-0.5g•↓•索氏抽提140ml丙酮-环己烷（1：1/v:v，10h）•↓•脱丙酮（40ml的1.5%无水NaSO4溶液，2h）•↓•水相反萃（15ml环己烷，0.5h）合并有机相•↓•水洗（30ml超纯水水洗两次1h/次）•↓•无水NaSO4有机相脱水（20ml的无水NaSO4）•（用总量20ml环己烷洗分液漏斗和三角漏斗，将液体回收入样品中）•↓•旋蒸至15-20ml•↓•取1.5-2ml移入5ml刻度管•（其余样品倒回分液漏斗，同时用20ml环己烷分3次冲洗球形瓶和量筒，并将冲洗液倒回分液漏斗）•↓•浓硫酸净化至有机相无色（3次0.5h/次，15/10/10ml）•↓•水洗至中性（40ml，30ml，30ml，0.5h/次）•↓•无水NaSO4有机相脱水（15ml的无水NaSO4）•（用总量20ml环己烷洗分液漏斗和三角漏斗，将液体回收入样品中）•↓•旋蒸至3-4ml•↓•移入5ml刻度管•（两滴管环己烷洗球形瓶，将淋洗液倒入5ml刻度管）•注：胎盘和脐带取干样1-2g，除所用试剂加倍外，其余实验步骤按上述处理流程进行。索氏提取器的示意图•2：烧瓶–烧瓶中的液体不能装得太多–一般是索氏提取器溶剂的3至4倍•3：蒸汽路径•4：套管•5：固体•6：虹吸管•7：虹吸出口•8：转接头索氏提取器SoxhletExtractor•索氏提取器–待提纯的化合物在溶剂中溶解度有限而杂质不溶于这种溶剂进行提取•过滤–待提纯化合物在溶剂中溶解度很高样品处理的必要性•提高样品浓度•提高检测灵敏度•去除基体干扰•排除杂质干扰•防止样品变质①制备过程中避免组分发生化学变化；②要防止和避免欲测定组分的沾污；③尽可能减少无关化合物引入制备过程；④尽可能简单易行。二、样品处理的原则Sampletreatmentmethodology•CollectionofSample•Preparationofsample–Why？SampleCollection样品的代表性样品的保存样品差异•目标分析物的性质•存在状态•基底类型•形状CollectionofSample——gas•直接采集–容器种类：刚性、塑性–采样动力•富集采集–固体吸附法–溶剂吸收法–冷阱收集法CollectionofSample——Liquid•直接采集–棕色玻璃瓶–保存•富集采集–吸附–分离浓缩CollectionofSample——other•Solidsample–GlasscontainerwithAlfoil–gloves•Suspendedsample利用被测样品（气-液和气-固）加热平衡后，取其挥发气体部分进入气相色谱仪分析。静态顶空萃取进样方式固相微萃取液体直接进样Headspaceapplication•平衡温度50oC•平衡时间30min•30*0.53mm石英柱•聚二甲苯硅氧烷什么是顶空进样：用于分析挥发性化合物的前处理技术（最初采用水浴的方法进行，存在一定的缺点）手动顶空进样自动顶空传输线•过程:1)样品放到小瓶后迅速封口。2)小瓶被放到顶空进样器上。3)获得分析结果。–自动加热使汽液两相达到平衡。–将液上气体注入到气相色谱并实现分离。顶空进样器•需要定量分析挥发性有机物时•样品不适合直接进样时•想要最少的样品前处理时•想要提高分析效率•痕量化合物/低浓度•Turbomatrix的最高操作温度为210度顶空进样器什么时候采用?HeadspaceStaticHeadspace(SHS)1:恒温液出口；2:注射器入口；3:恒温器；4:放置样品口；5:恒温液入口；6:样品DynamicHeadspace(DHS)•职业病检测–体液：水、尿、血–苯、甲苯、二甲苯•塑料包装食品袋中甲苯残留静态顶空气相色谱动态顶空气相色谱两相间存在平衡的问题不需要用气体吹扫样品存在于平衡的气相中样品用气密性注射器进样没有两相间存在平衡问题要用气体吹扫液相或固相用吸附剂吸附样品并浓缩（或用冷阱富集）样品从吸附剂上脱附进入色谱柱液氨采集瓶手动气体采样器气体采样管气体采样管气体取样管便携式空气过滤便携式气体检测器SamplePreparation常见样品处理技术•结晶crystalization•蒸馏distillation•过滤filtration•膜分离membraneseparationprocess•吸附•萃取extraction•裂解•衍生•生物样品制备Crystallization•未知样品试用溶剂顺序–甲醇、乙醇、混合低碳醇，或者与水的混合物–水、丙酮、丙酮和乙醇或其他醇的混合物–苯、苯-甲苯、石油醚、苯-石油醚–冰醋酸、含水醋酸Distillation•Atmospheric/simpledistillation•Vacuumdistillation•Steamdistillation•RotaryevaporationSimpledistillationVacuumdistillationVacuumDistillationSteamdistillation微蒸馏Extraction•Solventextraction–L-L、L-S、L-G•Solidextraction–LC小色谱柱SPME•Gasextraction–Headspace•MAE(microamplitudeextraction)•SFE(supercriticalfluidextraction)K-D浓缩器五、常用样品制备技术溶剂萃取蒸馏技术固相萃取微波萃取衍生化超临界萃取样品制备本节首页退出本章SupercriticalfluidextractionCO2的压缩图CriticalpointCriticalpressureCriticalvolume样品处理的原则•处理方法为分析目的服务•操作尽可能简单易行•所采集样品具有代表性•处理过程中防止样品被污染•防止目标组分发生变化或者丢失•衍生化处理必须定量完成样品预处理的质量控制•Controlsample–仪器、试剂、全程空白–实验室空白加标–样品加标75职业病检测标样•血液、尿液、胃液•微量常用有机溶剂–甲醇、乙醇、丙醇、甲醛、氯仿–甲苯、乙基、苯二甲苯、三氯甲烷等标样血液脑液胃液稀料罐残存物