Sepsis幼年小鼠早期循环游离DNAcfDNA)水平与炎性因子淋巴细胞凋亡关系对不良预后预测能力评

Sepsis幼年小鼠早期循环游离DNA（cellfreeDNA，cfDNA）水平与炎性因子、淋巴细胞凋亡关系及对不良预后预测能力评估的实验研究一、理论依据：脓毒症（sepsis）是宿主遭受感染打击后的全身炎性反应综合征（SIRS），以早期过度炎症反应即前炎性因子（如IL-6、TNF-α、IL-10等）风暴和后期的免疫麻痹即淋巴细胞等免疫细胞凋亡为本质特点。其灾难性病理生理过程则表现为sepsis→severesepsis/septicshock→MODS→Death，若在早期阶段（sepsis）能够发现一种高度敏感而特异的可以预测这一病理生理发展的客观标志物，则极有利于实施干预或/和预后判别，优化脓毒症的管理。循环炎性因子风暴和淋巴细胞凋亡等是SIRS的表现，是单核巨噬细胞系统活化程度的反应，而并不能反映宿主器官功能细胞损害（也就是说即使SIRS非常严重，而脏器功能/脏器组织细胞损害并不一定严重、预后并不一定差）；并且一旦应激打击消除，二者亦可随之缓解，故对sepsis预后预测能力较弱。cfDNA由受损伤的组织细胞释放（包括N、Eo、Mo等），是细胞凋亡或组织损伤结局的表现形式之一，其循环水平反映了宿主组织细胞的损伤程度，具备对不良预后较强的预测能力。二、材料方法1.实验动物：幼年小鼠建立脓毒症小鼠模型（可采用盲肠结扎穿刺方法）2.检测指标：cfDNA、IL-6、TNF-α、IL-10及脾脏淋巴细胞计数和组织切片（反映淋巴细胞凋亡程度）3.方法：模型建立成功后（动物发热、不吃、少动等）→采血检测cfDNA、IL-6、TNF-α、IL-10→观察动物死亡后，记录死亡时间段及死亡例数→切除脾脏获得淋巴细胞计数及病理切片→7d实验结束，如图：采血检测cfDNA、IL-6、TNF-α、IL-10Sepsis模型建立成功6h死亡：切除脾脏获得淋巴细胞计数12h、24h3d、7d三、预期结果1.不同时间段死亡小鼠早期cfDNA、IL-6、TNF-α、IL-10水平及死亡时脾脏淋巴细胞计数比较（1）表：ncfDNAIL-6TNF-αIL-10脾脏淋巴细胞计数0~6h~12h~24h~3d~7dP＜0.05（2）图：以死亡时间段为横坐标绘制各指标的折线图（期望呈下降趋势，脾脏淋巴细胞计数增高趋势）2.cfDNA与cfDNA、IL-6、TNF-α、IL-10水平（期望呈正相关）及死亡时脾脏淋巴细胞计数（期望呈负相关）的相关性3.cfDNA分别对3d、7d死亡的ROC曲线及cut-off值4.以获得的3d、7d死亡预测的cfDNAcut-off值为分界，绘制sepsis小鼠3d、7d存活分析曲线（log-ranktest）5.不同死亡阶段脾脏病理切片图