SOPZL09QC08701药品包装容器(材料)细胞毒性检查标准操作规程微

药品包装容器（材料）细胞毒性检查标准操作规程文件编码：SOP·ZL·09·QC·087·02第1页共3页1目的规范药用包装容器(材料)细胞毒性试验的操作，保证检测有章可循。2范围本程序适用于药用包装容器(材料)中细胞毒性试验的检验。3内容3.1引用标准国家食品药品监督管理局，国家药品包装容器（材料）方法标准YBB00012003-20153.2简述本法是将一定量的供试品溶液加入细胞培养液中，培养细胞，通过对细胞形态、增殖和抑制影响的观察，评价供试品对体外细胞的潜在毒性作用。3.3试验用细胞推荐使用小鼠成纤维细胞（L-929）。试验时采用传代48～72小时生长旺盛的细胞。3.4试验前的准备与样品及细胞接触的所有器具均需无菌（必要时可采用湿热灭菌如115℃保持30分钟；干热灭菌如250℃保持30分钟或用180℃保持2小时）。3.5细胞悬液的制备对已培养48～72小时小时生长旺盛的细胞消化混匀进行计数，将其配制成4×104个/ml的细胞悬液。3.6供试溶液的制备将供试品用肥皂水清洗除去油污，再用纯化水冲洗干净，滤纸吸干后切成0.5cm×2cm条状，用湿热灭菌或紫外线照射消毒后，置玻璃器皿内。除另有规定外，按表1加入氯化钠注射液或无血清培养基作为浸提液，使浸提液浸没供试品；按表2选择浸提条件（若采用含血清培养基，应用37℃±1℃、24小时±2小时的条件）浸提，即得。表1供试品表面积或重量与浸提液的比例供试品厚度（mm）供试品表面积或重量与浸提液的比例≤0.56cm2/ml＜0.5-1.03cm2/ml＞1.01.25m2/ml药品包装容器（材料）细胞毒性检查标准操作规程文件编码：SOP·ZL·09·QC·087·02第2页共3页不规则形状0.2g/ml表2浸提条件浸提温度（℃）浸提时间（小时）37±124±237±172±250±272±270±224±23.7第一法相对增殖法3.7.1阴性对照液为不加供试品的细胞培养液。3.7.2阳性对照液6.3%苯酚的细胞培养液。3.7.3检查法3.7.3.1取培养瓶33只，分别加入细胞悬液1ml，细胞培养液4ml，置37℃±2℃，5%二氧化碳的条件下培养24小时。培养24小时后弃去原培养液。3.7.3.2阴性对照组：取13个培养瓶加入5ml阴性对照液；阳性对照组10个培养瓶加入5ml阳性对照液；试验组10个培养瓶加入5ml含50%供试液的细胞培养液。置37±1℃，（5±1）%CO2的条件下继续培养7天。3.3.3细胞形态学观察和计数：在更换细胞培养液的当天，取3瓶阴性对照组，并在更换后第2、4、7天，每组各取3瓶进行细胞形态观察和细胞计数。3.3.4毒性评定3.3.4.1细胞形态分析标准按下表规定。程度细胞形态无毒细胞形态正常，贴壁生长良好，L-929细胞呈梭形或不规则三角形轻微毒细胞贴壁生长好，但可见少数细胞圆缩，偶见悬浮死细胞中等毒细胞贴壁生长不佳，细胞圆缩较多，达1/3以上，见悬浮死细胞严重毒细胞基本上不贴壁，90%以上呈悬浮细胞3.3.4.2细胞相对增殖度分级标准按下表规定：药品包装容器（材料）细胞毒性检查标准操作规程文件编码：SOP·ZL·09·QC·087·02第3页共3页分级相对增殖度0≥100175～99250～74325～4941～24503.3.4.3根据各组细胞浓度按下式计算细胞相对增殖度（RGR）：供试品组（或阳性对照组）×细胞浓度平均值RGR=────────────────────×100%阴性对照组细胞浓度平均值3.3.5结果评价3.3.5.1试验组相对增殖度（以第7天的细胞浓度计算）为0或1级判为合格。3.3.5.2试验组相对增殖度为2级，应结合形态综合评价，轻微毒或无毒的判为合格。3.3.5.3试验组相对增殖度为3～5级判为不合格。4附件无5培训培训部门：质量部培训对象：全体人员6变更历史变更前版本号变更后版本号变更原因变更批准日期SOP·ZL·09·QC·087·01SOP·ZL·09·QC·087·02执行2015年版药典2015年10月30日