UPLC_MSMS和HPLC_MSMS操作规程

ABSCIEXTRIPLEQUADTM5500的PPG质量准确度校准操作规程一、前期准备1、PPG稀释溶液的准备，对于5500系列采用的标准溶液：正离子模式：POSPPG2E-7M；负离子模式：NEGPPG3E-5M2、离子源的垂直旋钮调至“5”位。3、用质谱仪上的针泵式进样针吸取适量的PPG校准液，检查管路是否连接好。二、操作步骤1、双击“HardwareConfiguration”，激活“MSOnly”。2、菜单栏切换到“Installation”项目。3、双击“ManualTurning”，打开手动调谐界面。4、点击“OpenFile”，选择相对应的采样方法（Q1PosPPGs.dam；Q3PosPPGs.dam；Q1NegPPGs.dam；Q3NegPPGs.dam），先正离子再负离子，先Q1调谐再Q3调谐，扫描速率依次为10、200、1000、2000Da/s，对应MCA分别为10、50、50、100。5、点击“StartSyringePump”，再点击“Start”开始采集数据。6、将会在界面上出现采集到的质谱图，右键点击右侧质谱图区域，选择“OpenDate”。7、点击工具栏中的“CalibrationFromSpectrum”。8、在弹出的菜单中选择合适的校验标准，在“Standard”中选择对应的校准溶液，点击“Start”开始校准前的计算。9、第一个图形代表的是此次校准与理论值的质量偏差，各点应位于“±0.1Da”线内。若某质量点超出了设定的范围，则应点击“UpdateMassCalibration”，更新那些偏离的质量点的电场参数，使之落到“±0.1Da”线内。10、第二个图形代表的是PPG校准峰的半峰高宽度，各点应位于“0.6~0.8”范围内。若某点质谱峰半峰宽超出标准范围，点击界面上的“Advanced”按钮，调节对应的“Offset”电压，使之合规。质谱分辨率质谱半峰宽（FHWM）Offset值增加提高减小Offset值降低降低增加11、第三个图形代表的是此次校准与上次校准所有PPG校准点峰强度变化的百分比。14、待校准完成后，点击“Stop”停止进样，并灭活“MassOnly”。三、结束工作针泵吸取50%甲醇水溶液，对管路进行冲洗，2~3次即可。标准品质谱条件调谐（TuneandCalibrate）操作规程一、前期准备1、检查离子源是否干净，将垂直旋钮跳到“5”位。2、用50%甲醇水溶液（乙腈水溶液也可）配置20~50ng/mL的标准溶液（根据响应值调节浓度，将目标化合物母离子与周围离子响应值相差明显即可）。√正离子化合物，可添加0.1%甲酸√负离子化合物，无需添加二、操作步骤1、创建project：打开Analyst软件，在菜单栏中打开“Tools”，选择“project”下的“CreateProject”，输入“Projectname”即可。2、双击“HardwareConfiguration”，激活“MSOnly”，双击“ManualTuning”，打开调谐界面。3、Q1Scan：在当前界面设置扫描模式为“Q1MS（Q1）”，将扫描范围设为100~MW+30，扫描速率为200Da/s，Duration为5min，先点击“StartSyringePump”，再点击“Start”，找到目标化合物母离子。待扫描完成后，选择“Center/Width”，将目标母离子的m/z输入“Center（Da）”中，“Width（Da）”设置为3，“Scanrate”设置为10Da/s，选上“MCA”，“Cycles”设置为20~50，点击“Acquire”采集数据并保存。4、ProductionScan：扫描模式为“ProductIon（MS2）”，在“Productof”中输入母离子的m/z，将CE值修改为5eV，扫描范围为100~MW+30，扫描速率约200Da/s，Duration为5min，点击“Start”开始扫描，以5eV为步长手动调节CE，找到合适的子离子（母离子的强度为基峰强度的1/3到1/4为宜），点击“Stop”。选上“MCA”，“Cycles”设置为20~50，点击“Acquire”采集数据并保存二级质谱图（若要获得柱状图需在AdvancedMS中选择Centroid）。5、优化化合物参数：根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对，输入右侧框中，每对离子对建议分析时间为100ms（若化合物比较多减小时间），并输入ID。点击“EditRamp...”，先后选择CE和DP，点击“Start”进行优化，将优化好的CE和DP值添加到表格中。6、保存质谱方法，灭活“MSOnly”。三、结束工作针泵吸取50%甲醇水溶液，对管路进行冲洗，2~3次即可。ACQUITYUPLC串联质谱（UPLC-MS/MS）操作规程一、前期准备1、检查线路是否连接完好。2、最重要的是离子源的垂直旋钮调至“2”位。3、将流动相准备好，过0.45微米的滤膜并超声脱气。4、连接好进样采集触发线。二、操作步骤1、打开UPLC的SampleManage和BinarySolventManager电源，待其自检完成后，打开质谱分析软件，左下角双击“ACQUITYConsole”，点击“Control”，分别进行“PrimeA/Bsolvents...”和“Primesealwash”，用A、B流动相冲洗5min。2、激活“UPLCMS”。3、安装并用甲醇或乙腈活化新的色谱柱，一般活化30min即可。4、点击Analyst软件菜单栏中的“Script”，选择“MergeMRM”合并所需测的多种目标分析物的MRM通道（也可双击“BuildAcquisitionMethod”建立方法手动输入），并存储一个新的采样离子通道的质谱方法文件。5、双击“BuildAcquisitionMethod”，将同步模式选为“LcSync”，打开文件选择需要的质谱方法。点击“EditParameters”，设置“CUR”：35；“IS”：+5500（正离子），-4500（负离子）；“TEM”：550℃；“GS1”：50；“GS2”：50；每一个的MRM的驻留时间（DwellTime）要进行优化，尽可能使“TotalScanTime”控制在最窄峰的峰宽的1/12；“Duration”与UPLC的样品运行时间设为一致，保存此质谱方法。6、双击左侧栏“ACQUITYMethodEditor”，通过“File”打开刚保存的质谱方法。选择进样方式、进样针的强洗和弱洗、色谱柱温度及样品室温度、流动相组成与梯度程序及运行时间（与质谱分析时间一致），保存此方法。7、双击左侧栏“BuildAcquisitionBatch”建立处理批次，选择上述保存的方法，添加批次（SET1可修改为日期），添加样品，设置样品名称、甁号（48vial2mLholder）及“Datefile”，保存此批次。8、提交（submit）此样品序列，点击工具栏中“Equilibrate”按钮，观察压力变化，待“Delta”小于50时，点击工具栏中“Ready”，准备进样，在“ViewQueue”界面下可查看所提交的序列，准确无误后，点击“startsample”开始进样。三、结束工作1、重新建立一个分析批次，选择Penicillin项目下的“UPLC_MS_FLUSH”方法，放置空白样品（水）于样品盘中，提交并运行，对液相及质谱仪进行冲洗。2、待机器冲洗完毕后，灭活“UPLCMS”系统，关闭质谱软件，关闭UPLC电源。WatersAllianceHPLCe2695串联质谱（HPLC-MS/MS）操作规程一、前期准备1、检查线路是否连接完好。2、离子源垂直旋钮调至“2”位。3、将流动相准备好，过0.45微米的滤膜并超声脱气。4、连接好进样采集触发线。二、操作步骤1、打开WatersHPLCe2695的SeparationsModule主机电源，待自检完成后(屏幕显示Idle)，在控制屏点击“Menu/Status”，选择“DirectFunction”进入冲洗选项界面，分别进行“DryPrime”、“WetPrime”及“PurgeInjector”，排除管道内的气泡。2、安装并活化新的色谱柱，一般活化30min即可。3、打开桌面“Empower”软件，输入用户名（system）及密码（manager）。点击“配置系统”，在配置管理器界面打开“系统”，将“alliance_MS”改为在线模式。左栏点击“项目”添加新项目并保存。4、在软件初始界面，点击“运行样品”，选择所需项目及色谱系统。5、通过菜单栏“编辑”选择“仪器方法”，新建液相方法，设置流动相组分、洗脱程序、柱温及样品室温度，保存当前的仪器方法。6、通过菜单栏“编辑”选择“新建方法组”，使用向导模式创建新方法组，选择上述方法，点击“完成”。7、在主界面上编辑样品运行序列，选择所需的“方法组/报告方法”，输入“进样体积”、“样品名称”及“运行时间”。8、将控制质谱电脑上的Analyst软件打开，激活“HPLC（2695）_MS”。9、点击Analyst软件菜单栏中的“Script”，选择“MergeMRM”合并所需测的多种目标分析物的MRM通道，并存储一个新的采样离子通道的质谱方法文件（也可双击“BuildAcquisitionMethod”建立方法手动输入）。10、双击“BuildAcquisitionMethod”，将同步模式选为“LcSync”，打开文件选择需要的质谱方法。点击“EditParameters”，设置“CUR”：35；“IS”：+5500（正离子），-4500（负离子）；“TEM”：550℃；“GS1”：50；“GS2”：50；每一个的MRM的驻留时间（DwellTime）要进行优化，尽可能使“TotalScanTime”控制在最窄峰的峰宽的1/12；“Duration”与HPLC的样品运行时间设为一致，保存此质谱方法。11、编辑出与液相相同顺序的样品运行序列。12、在Waterse2695主机SeparationsModule界面上输入仪器方法的初始流动相比例进行平衡色谱柱，监测系统压力，待Delta值降至50以下即可。13、在质谱控制电脑上，点击“Submit”进行样品提交，再点击“Startsample”，待右下角四级杆图谱变为“Wait”状态，在液相端电脑上点击运行样品即可进行分析。三、结束工作1、在Empower操作界面，添加一个空白样品（水），设置进样数为1，“方法组/报告方法”为“HPLCMSFLUSH”。2、在Analyst软件界面上，打开编辑一个空白样品（水），选择Penicillin项目下的“HPLCMSFLUSH”方法，并提交运行样品，同样在Empower软件中点击运行，完成冲洗工作。3、待冲洗完毕后，灭活“HPLC（2695）_MS”，关闭软件。4、关闭HPLC的电源。WatersAllianceHPLCe2695操作规程一、前期准备1、检查线路是否连接完好。2、将流动相准备好，过0.45微米的滤膜并超声脱气。二、操作步骤1、打开WatersHPLCe2695主机的SeparationsModule主机电源，待自检完成后(屏幕显示Idle)，在控制屏点击“Menu/Status”，选择“DirectFunction”进入冲洗选项界面，分别进行“DryPrime”、“WetPrime”及“PurgeInjector”，排除管道内的气泡。2、安装并活化新的色谱柱，一般活化30min即可。3、打开桌面“Empower”软件，输入用户名（system）及密码（manager）。点击“配置系统”，在配置管理器界面打开“系统”，将“alliance_PDA/ELSD/DAD…”改为在线模式。左栏点击“项目”添加新项目并保存。4、在软件初始界面，点击“运行样品”，选择所需项目及色谱系统。5、通过菜单栏“编辑”选择“仪器方法”，新建液相方法，设置流动相组分、洗脱程序、柱温、样品室温度及检测器参数，保存当前