DNA的提取和电泳实验报告

基因组DNA的提取和电泳（实验五）实验报告一、实验目的了解DNA提取的方法，以及琼脂糖凝胶电泳分析DNA技术。二、器材和试剂1.器材水平琼脂糖电泳仪，离心机，水浴锅，研钵，离心管、移液枪、水稻幼苗等2.试剂1.1mol/LTris.Cl(pH8.0)的配制：称取12.11g的Tris，置于80mL的ddH20,加入浓盐酸（约4.2mL）,调节pH值至8.0，定容至100mL。2.0.5mol/LEDTA(pH8.0)的配制：18.61gNa2EDTA·2H2O，加入80mL的ddH2O,用NaOH颗粒调pH值至8.0（约需2g），定容至100mL。3.提取缓冲液的配制：100mmol/LTris.Cl(pH8.0),20mmol/LEDTA,500mmol/LNaCl,1.5%SDS4.80/4/16氯仿：异戊醇：乙醇5.6☓Loadingbuffer：0.15％溴酚蓝，0.15％二甲苯青FF，5mmol/LEDTA，50％甘油6.5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445mmol/LTris碱445mmol/L硼酸盐10mmol/LEDTA水54g27.5g硼酸20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）补足1L三、实验步骤1.在15mL的离心管中加入5mL的提取缓冲液，60℃水浴预热。2.植物叶1-2g，剪碎，在钵体中加入石英砂，加入预热的提取缓冲液，磨成粉末状，60℃水浴保温20min，其间不时缓慢摇动。3.5000rpm离心5分钟，仔细吸取上清液至另一离心管中，4.加入5mL氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀（需带手套，防止皮肤损伤），室温下静置5-10分钟，使水相和有机相混匀。5.室温下离心5000rpm离心5分钟。6.仔细吸取上清液至另一离心管中，加入一倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出现絮状沉淀。7.离心5000rpm，离心5min，弃去异丙醇，室温晾干。8.视沉淀多少，加入1mL左右ddH2O溶解，可在60℃水浴中放置15分钟以上助溶。9.取DNA样品5µL，加入1µL6☓Loadingbuffer，混匀，加入0.7%的琼脂糖凝胶加样孔中，电泳，检测DNA的分子大小。4、实验结果和讨论实验分析：本次实验由于种种原因我是和植保102班的同学一起做的，我们组3人，实验过程比较严谨，受到了老师的表扬，实验结果也很令人满意。下面是实验过程中的注意点：1、研磨不能太久太用力，会导致DNA片段断掉。2、实验室的某些试剂，如氯仿，有毒性，应带手套进行。电泳的时候不知是时间的原因还是都做得不错，结果相差不是很远（如上图），第五组和第六组是我们的，第六组是我自己加的。实验过程中要耐心细心，这样才能得到满意的结果。园艺101石颖20100107011