Forma厌氧工作站在纯生啤酒微生物检测方面的应用

Forma厌氧工作站在纯生啤酒微生物检测方面的应用福建省燕京惠泉啤酒股份有限公司技术质量部孙黎琼【摘要】在纯生啤有害菌检测中，厌氧菌是一个十分重要的指标。如何正确选择厌氧菌培养装置，有效控制纯生啤微生物，是纯生啤微生物检测的关键之一。【关键词】厌氧菌厌氧工作站啤酒检测随着啤酒生产技术的发展，纯生啤酒的生产越来越普遍，纯生啤微生物控制不再单纯是细菌总数、大肠菌群两个指标的检测控制，厌氧菌是控制纯生啤的一个重要指标。按照微生物与氧的关系可以把微生物分为专性好氧菌、兼性厌氧菌、微好氧菌、耐氧菌、专性厌氧菌。对于啤酒来说较有害的为后四类，因为它们都可以在啤酒的微氧或无氧的环境中生长，也是我们实验室检测的重点。培养厌氧菌首先需要特殊的培养装置。目前大概有交层琼脂柱、Hungate滚管技术、厌氧培养皿、厌氧罐与厌氧工作站等几种厌氧培养装置。我公司使用的是Forma公司的厌氧工作站。1、厌氧工作站简介厌氧工作站（AnaerobicSystem），主要由培养室和隔离室两部分组成（如图1）。培养室为严格的无氧环境。操作时把样品放在隔离室内，经过3次抽真空、2次充氮气、1次混合气体（N2/CO2/H2，85/5/10）制造无氧环境。然后打开内门把样品放入培养室培养。微量的氧气是在钯的催化下使氧气与氢生成水，然后被干燥剂吸收。厌氧工作站示意图12．Forma厌氧工作站的优点2．1厌氧工作站使培养专性厌氧菌成为可能。专性厌氧菌是一种危害很大的啤酒有害菌。它只有在其深层的无氧或低氧化还原势的环境下才能生长。即使短期接触空气也会抑制其生长甚至致死。对于厌氧工作站来说，样品从隔离室进入培养室只需要几分钟。厌氧罐是通过反应袋反氧除掉而达到厌氧环境，而使用反应袋制造无氧环境需要150分钟以上。所以对于专性厌氧菌来说，厌氧工作站的培养环境优于厌氧罐，能准确地把专性厌氧菌检测出来，这对纯生啤的微生物控制是非常重要的。取几瓶已发生生物混浊的瓶装啤酒，分别取1ml于NBB-A培养基平板中，同一试样分别置厌氧工作站和厌氧罐中培养5天观察，结果见表1表1试样厌氧工作站厌氧罐菌落总数(个/ml）菌落形态KOH、H2O2酶试验菌落总数（个/ml）菌落形态KOH、H2O2酶试验1134无色、透明KOH－、H2O2－94无色、透明KOH－、H2O2－白色、不透明KOH＋、H2O2＋白色、不透明KOH＋、H2O2＋294白色、不透明KOH＋、H2O2＋83白色、不透明KOH＋、H2O2＋336无色、透明KOH－、H2O2－2白色、不透明KOH＋、H2O2＋4214金黄色、透明KOH－、H2O2－165金黄色、透明KOH－、H2O2－白色、不透明KOH＋、H2O2＋白色、不透明KOH＋、H2O2＋5123无色、透明KOH－、H2O2－101无色、透明KOH－、H2O2－白色、不透明KOH＋、H2O2＋白色、不透明KOH＋、H2O2＋从表1可以看出：同一试样，在厌氧工作站检测的厌氧菌数往往高于厌氧罐。对检测的厌氧菌鉴定：厌氧工作站检测的菌为好氧菌、微好氧菌、专性厌氧菌，而厌氧罐检测的菌为好氧菌、微好氧菌，没有专性厌氧菌。2．2厌氧工作站便于观察样品的生长情况厌氧工作站采用外源供气，用无氧混合气体充到培养箱里，把箱里的氧抽掉而形成厌氧环境，可直接恒温培养，培养皿随时取出观察，不会解除厌氧环境。观察时，通过厌氧工作站的透明观察窗（如图1），十分方便。取几瓶已发生生物混浊的瓶装啤酒，分别取1ml于NBB-A培养基平板中，置厌氧工作站培养5天，每天取出观察，结果见表2。单位为：个/ml表2时间试样1天2天3天4天5天100058KOH－、H2O2－134KOH－、H2O2－223240122KOH＋、H2O2＋254KOH＋、H2O2＋KOH＋、H2O2＋KOH＋、H2O2＋KOH＋、H2O2＋300040KOH－、H2O2－158KOH－、H2O2－47KOH＋、H2O2＋45KOH＋、H2O2＋69KOH＋、H2O2＋167KOH－、H2O2－314KOH－、H2O2－KOH＋、H2O2＋KOH＋、H2O2＋500578KOH－、H2O2－409KOH－、H2O2－KOH－、H2O2－从表2可以看出：在厌氧培养中，第一、二天生长出的菌落一般是好氧菌，后两天生长出的才是厌氧菌。而厌氧罐只能在培养完毕后才能观察。通过每天的菌落观察及鉴定，可以判断所污染的菌是否对啤酒有害。2．3厌氧工作站的培养条件与啤酒的环境相似，这样可以检查出真正的啤酒有害菌。厌氧工作站的培养环境是1个大气压或略大于1个大气压下，充满N2和CO2的条件下培养的，这和啤酒内的环境十分相似。而厌氧罐是在负压中培养的。根据观察发现在厌氧工作站培养的菌落比厌氧罐中生长的好。2．4使用中我们发现发生意外情况如轻微泄漏时，厌氧工作站优于厌氧罐。厌氧罐的反应袋所能制造的无氧环境是有限的，如我们使用的是适应有效容积2.5L，反应时间4-6小时的反应袋。一旦发生轻微泄漏就无能为力了。而厌氧工作站内氢气与氧气的反应是不断进行的。这就保证在出现意外时，培养箱内样品的安全。2．5厌氧工作站操作方便，培养量大。厌氧工作站通过多次换气就可以实现多次样品的放入，容量大。厌氧罐必须使用多个厌氧罐配合反应袋才能做到，且不能直接恒温培养，需再放到另一个恒温系统中培养。3、结论厌氧工作站使用方便，工作容量大，通过菌落观察及鉴定，可以判断所污染的菌是否对啤酒有害，且可以准确地把专性的厌氧菌检测出来，是实验室检测厌氧菌的理想设备，可以准确、有效地控制纯生啤的微生物污染。