HE4作业指导书

XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书文件编号：LAB－OP－MY020第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-0117ElecsysE170/e601/e411人附睾蛋白4(HE4)1.分析原理采用双抗夹心法原理，整个过程18分钟完成。1)第1次孵育：10μl标本、生物素化的HE4特异性单克隆抗体和钌复合体a标记的HE4特异性单克隆抗体一起孵育，形成抗原抗体夹心复合物。2)第2次孵育：加入链霉亲合素包被的磁珠微粒后，该复合体通过生物素与链霉亲合素的相互作用与固相结合。将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell/ProCellM除去。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度。通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线是通过2点定标和试剂条形码上获得的主曲线生成的。2.标本要求血清样本须用标准试管或有分离胶的真空管收集。Li-肝素，K2-和K3-EDTA血浆以及含有分离凝胶的Li-肝素血浆试管。判断标准：斜率0.9-1.1+截距≤±10pmol/L，相关系数≥0.95。2-8℃可稳定保存48小时，15-25℃可稳定保存5小时，-20℃可稳定保存12周。样本可冻存两次。选用测试时市售样本收集试管检测所列出的测试样本，即并非检测了所有厂商的试管产品。各生产商提供的样本采集系统可能含有不同的材料，某些情况下这些材料有可能影响到检测结果。如果采用原始试管（样本采集系统）处理样本，请参照试管生产商提供的说明。如果样本中有沉淀，进行测定前离心。切勿使用加热灭活的标本。不可使用叠氮化物作为稳定剂的样本和质控品。检测前，请确保标本、定标液及质控液平衡至室温（20–25℃）。考虑到可能的蒸发效应，上机。3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲合素包被的磁珠微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5mL：包被链霉亲合素的磁珠微粒，0.72mg/mL；防腐剂。R1：生物素化的抗-HE4抗体(灰盖)，1瓶，10mL：生物素化的抗HE4单克隆抗体（小鼠），浓度0.75mg/L；磷酸缓冲液100mmol/L，pH6.5；防腐剂。R2：Anti-HE4-抗体～Ru(bpy)32+（黑盖），1瓶，10mL：钌复合体标记单克隆抗-HE4抗体(小鼠)1.5mg/L；磷酸盐缓冲液100mmol/L，pH7.4；防腐剂。校准品：ElecsysHE4CalSetXXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书文件编号：LAB－OP－MY020第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-0127ElecsysE170/e601/e411人附睾蛋白4(HE4)质控品：PreciControlHE4其他所需材料：常规实验设备ElecsysE170/E411Elecsys系统清洗液（SysClean）,货号11298500利用ROMA（卵巢恶性风险算法）评估上皮卵巢癌风险：•CA125II，100测试，货号11776223322，•REF11776240322，CA125IICalSet，4x1mL•REF11776452122，PreciControlTumorMarker，用于PreciControlTumorMarker1和2，各2x3mL•REF11732277122，DiluentUniversal，2×16mL样本稀释液或者REF03183971122，DiluentUniversal，2x36mL样本稀释剂ElecsysE170分析仪所需材料:Elecsys系统缓冲液（ProCellM）,货号12135019Elecsys检测池洗液（CleanCellM）,货号12135027ElecsysPC/CC杯,货号03023141Elecsys清洗液（ProbeWashM），货号03005712Elecsys反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号12102137Elecsys系统清洗适配器（SysCleanAdapterM），货号03027651ElecsysE411分析仪所需材料:Elecsys系统缓冲液（ProCell），货号11662988Elecsys测量池清洗液（CleanCell），货号11662970Elecsys系统清洗液（SysWash），货号11930346Elecsys适配器（AdapterforSysClean），货号11933159,Elecsys反应杯（CUP），货号11706829Elecsys加样头（TIP），货号11706802XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书文件编号：LAB－OP－MY020第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-0137ElecsysE170/e601/e411人附睾蛋白4(HE4)4.仪器和校准使用仪器：罗氏公司生产Elecsys2010/E170/e601/e411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批试剂必须用新鲜试剂和校准一次。另外，以下情况需要再次校准：校准过期:批校准稳定28天，盒校准7天。根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；更换某些试剂时，根据规定进行多次标定。5.操作步骤参见仪器标准操作规程。6.质量控制用质控品PreciControlHE4，至少每24小时或每一次校准后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7.计算方法分析仪自动计算每份样本的分析物浓度，单位为pmol/L。存在盆腔肿瘤的患者风险评估一项国际多中心临床试验利用库存样本确定了ElecsysHE4联合ElecysCA125II检测用于盆腔肿瘤患者中上皮性卵巢癌风险评估的有效性。针对上皮性卵巢癌，开发了一项公式（ROMA=巢恶性肿瘤公式）来评估其风险。这项公式考虑到了HE4和CA125值以及患者的月经状况。这项公式计算得到上皮卵巢癌可接受手术治疗的预测可能性。计算预测指数（PI）利用下面的公式（1）和公式（2）来分别计算绝经前和绝经后患者的预测指数。计算PI时，根据女性的月经状况，将通过ElecsysHE4检测和ElecsysCA125II检测获得的检测值插入到下面的公式中。(1)绝经前：PI=-12.0+2.38*LN[HE4]+0.0626*LN[CA125](2)绝经后：PI=-8.09+1.04*LN[HE4]+0.732*LN[CA125]其中，LN=自然对数切勿采用LOG=LOG10。计算ROMA值计算ROMA值时（即预测可能性），将所计算的PI值插入到公式（3）：XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书文件编号：LAB－OP－MY020第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-0147ElecsysE170/e601/e411人附睾蛋白4(HE4)(3)ROMA值(%)=exp(PI)/[1+exp(PI)]*100其中，exp(PI)=ePI8.参考范围健康的绝经前和绝经后妇女（所有年龄）的第95th百分位数分别为92.1pmol/L和121pmol/L。各实验室应对各自地区人群的甲胎蛋白正常值波动范围进行调查，如有必要应自己测定一个参考值范围。绝经前妇女ROMA值≥11.4%=患上皮卵巢癌风险高ROMA值11.4%=患卵巢上皮癌风险低绝经后妇女ROMA值≥29.9%=患卵巢上皮癌风险高ROMA值29.9%=患卵巢上皮癌风险低9.分析性能检测范围：15.0-1500pmol/mL精密度：根据CLSI（临床实验室标准委员会）的方案（EP5-A2），使用Elecsys试剂、样本和质控品来测定精密度：每天2次重复检测，共21天（n=84）。获得如下结果：10.干扰因素以下情况下，检测结果不受干扰：黄疸（胆红素1130μmol/L或66mg/dL），溶血（血红蛋白0.621mmol/L或1.0g/dL，脂血(脂肪乳剂2000mg/dL)和生物素（205nmol/L或50ng/mL）。判断标准：回收率在初始值±XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书文件编号：LAB－OP－MY020第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-0157ElecsysE170/e601/e411人附睾蛋白4(HE4)10％之内。对于接受高剂量生物素治疗的患者（5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集样本。检测结果不受类风湿因子影响（RF不超过1500IU/ml）。HE4浓度低于40000pmol/mL时无高剂量钩状效应。体外对18种常用药物进行试验未发现会影响检测结果。未发现有药物影响检测结果。采用下表中给出的浓度监测特殊癌症药物。未发现有药物影响检测结果。判断标准：回收率在初始值±10％之内。药物浓度（μg/mL）卡铂600顺铂180环磷酰胺500地塞米松20多柔比星120亚叶酸钙750美法仑15密都锭-二钠150紫杉醇265氟尿嘧啶900贝伐珠单抗（阿伐他汀）750厄洛替尼（特罗凯）150利妥昔单抗（美罗华）750曲妥珠单抗（赫赛汀）600少数病例中极高浓度的分析物特异性抗体、链霉亲合素或钌抗体会影响检测结果。通过适宜性的实验设计可将影响因素降到最低。作为诊断指标，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。11.临床意义人附睾蛋白4（HE4，也称为WFDC2）属于乳清酸性四-二硫化物核心（WFDC）蛋白家族，疑似带有酪氨酸抑制剂特性。1,2相应基因编码一种13KD蛋白质。这种蛋白在其成熟的糖基化形式下的分子量约为20-25KD，由一条单肽链构成，其中含有两个WFDC结构域。HE4最初是在远端附睾上皮细胞中检定。它在包括卵巢在内的呼吸和生殖系统组织上皮中呈低水平表达，但在卵巢癌细胞中高水平表达。5高分泌水平还见于卵巢癌患者的血清中。6预计HE4还有助于上皮XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书文件编号：LAB－OP－MY020第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-0167ElecsysE170/e601/e411人附睾蛋白4(HE4)卵巢癌的风险评估。卵巢癌在女性癌症相关死亡病因中占第四位。它是最常见的致死性妇科癌症形式，如果得到早期诊断并由熟悉卵巢癌治疗的外科医生治疗，这种癌症可以治愈。然而，卵巢癌的症状与存在附件肿瘤相关，常常模糊而不明确。因此，有70-75%的卵巢癌都是在晚期才获检出。根据国际癌症研究署的统计，卵巢癌患者的5年存活率为46%。然而，如果这种疾病获得早期诊断，存活率可增加到94%。作为肿瘤标记物，HE4对于卵巢癌的检测具有最高的灵敏度，尤其是对于I期疾病（无症状性早期）。联合CA125，HE4在95%特异性上具有最高76.4%的灵敏度。另外，在子宫内膜癌早期，HE4要比CA125更敏感。CA125正常情况下，HE4的升高可能意味着存在卵巢癌或其他类型的癌症，例如子宫内膜癌。结合其它标记物，例如CA125，HE4可帮助确定绝经期前和绝经期后妇女的盆腔肿瘤是良性或是恶性。CA125和HE4双重标记物联合是比其中任何一种单用更为精确的癌性疾病预测因素。Huhtinen等人报告卵巢癌相较于子宫内膜异位性囊肿95%的特异性下有着78.6%的灵敏度。13HE4水平与CT成像检查确诊患有卵巢癌的妇女的临床治疗响应性或复发状况有关。因此，HE4可能是疾病复发的一种重要的早期指标。12．参考文献1)IsraeliO,Goldring-AviramA,RiensteinS,etal.Insilicochromosomalclusteringofgenesdisplayingalteredexpressionpatternsinovariancancer.CancerGenetCytogenet2005;160:35-42.2)BouchardD,MorissetD,BourbonnaisY,etal.Proteinswithwhey-acidic-proteinmotifsandcancer.LancetOnco