Agilent1100LC现场培训教材-print

1Agilent1100LC现场培训教材基本操作步骤:(一)、开机：1、打开计算机,进入WindowsNT（或Windows2000）画面,并运行BootpServer程序。2、打开1100LC各模块电源。3、待各模块自检完成后，双击Instrument1Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。4、从“View”菜单中选择“MethodandRuncontrol”画面,单击”View”菜单中的“ShowTopToolbar”，“Showstatustoolbar”，“Systemdiagram”,”Samplingdiagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。5、把流动相放入溶剂瓶中。6、打开Purge阀。7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入泵编辑画面。8、设Flow：5ml/min，单击OK。9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pumpcontrol选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，2直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击PumpControl选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purgevalve。11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。12、单击泵下面的瓶图标，如图所示（以二元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：●从“Method”菜单中选择“Editentiremethod”项，如上图所示选中除“Dataanalysis”外的三项，单击Ok，进入下一画面。2、方法信息：●在“MethodComments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。3●单击Ok进入下一画面。3、泵参数设定：（以二元泵为例）●在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“SolventB”处输入70.0,(A=100-B),也可Insert一行”Timetable”,编辑梯度。在“PressureLimitsMax”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。●单击Ok进入下一画面。4、自动进样器参数设定:●选择合适的进样方式,如图所示，进样体积1.0ul,洗瓶位置为6号。“StandardInjection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“InjectionwithNeedleWash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Useinjectorprogram”---可以点击Edit键进行进样程序编辑。●●点击Ok进入下一画面。45、柱温箱参数设定:●在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more”键,如图所示,选中”Sameasleft”---使柱温箱的温度左右一致。●点击ok进入下一画面。6、VWD检测器参数设定:●在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在”Peakwidth(Responsetime)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,如0.1min(2s)。●在Timetable中可以“Insert”一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。点击ok进入下一画面。7、DAD检测器参数设定:●检测波长:254nm,BW=30nm,参比波长=350nm,BW=100nm;●检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参5比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。Peakwidth（Responsetime）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit—狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。●点击Ok进入下一画面。8、在“Runtimechecklist”中选中“Dataacquisition”，单击Ok。9、单击“Method”菜单，选中“Savemethodas”，输入一方法名，如“test”，单击Ok。10、从菜单“View”中选中”Onlinesignal”,选中Windows1,然后单击Change钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中Windows2)。11、从“Runcontrol”菜单中选择“Sampleinfo”选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Datafile”中选择“Manual”或“Prefix”。6区别:Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。Prefix—在Prefix框中输入前缀，在Counter框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。12、从Instrument菜单选择Systemon。13、等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Runmethod”，进样。（DAD,VWD色谱图如下所示：）（三）、数据分析方法编辑:1、从“View”菜单中，单击“Dataanalysis”进入数据分析画面。2、从“File”菜单选择“Loadsignal”，选中您的数据文件名，如下图所示。单击Ok。73、做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signaloptions”选项，。从Ranges中选择Autoscale及合适的显示时间，单击ok,或选择”UseRanges”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。4、积分:(1)、从“Integration”中选择“Autointegrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“IntegrationEvents”选项，选择合适的Slopesensitivity，Peakwidth，Areareject，Heightreject。(2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项，则数据被积分。(3)、如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。(4)、单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。5、打印报告:(1)、从“Report”菜单中选择“Specifyreport”选项，进入如上画面。(2)、单击“QuantitativeResults”框中Calculate右侧的黑三角，选中Percent（面积百分比），其它选项不变。8(3)、单击Ok.(4)、从“Report”菜单中选择“Printreport”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击Report底部的“Print”钮。(四)、关机:●关机前，用冲洗好仪器和色谱柱，用酸或碱的流动相用纯水冲洗干净管路。●退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）。●关掉Agilent1100电源开关。(五)、Agilent1100LC维护保养：1、色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（如ACN适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）2、对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。*3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。*4、带seal-wash的1100，要配制90%水+10%异丙醇，以每分2—3滴的速度虹吸排出，溶剂不能干涸。5、其它主意事项见说明书，或由现场工程师介绍。维护知识问答1、为什么溶剂和样品要过滤?溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的9磨损。样品过滤头的类型：30mm内径：适用于大进样量的过滤，由0.2µm和0.45µm两种规格,材料有纤维素,醋酸纤维,聚四氟乙烯。处理样品体积少于50µl。13mm内径：适用于范围广的过滤，由0.2µm和0.45µm两种规格,材料为纤维素。3mm内径：适用于小进样量的过滤，由0.2µm和0.45µm两种规格。处理样品体积为7µl。滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶液，推荐用于蛋白质和其相关样品。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸，70%乙醇、二氯甲烷、不适用于二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：具有蛋白吸收低，同样适用水溶性样品和有机溶剂。2、为什么HPLC用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项？HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时,必须使用该在线冲洗选项.清洗液配制:90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。3、为什么Agilent1100LC的流动相管路非常细?在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响，由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级，液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。因此，样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低。为使柱外效应减之最小，获得理想的分析结果，Agilent1100LC使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。毛细管线分类：0.17mm内径------绿色;0.12mm内径-------红色。PEEK管线：内径-----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。毛细管线优点:柔韧性好.***Agilent公司同时备有1/16in的粗外径毛细管线,适用于不同习惯的用户,优点是刚性好,但柔韧性差一些。4、流动相使用前为什么要脱气？流动相使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体（如O2），以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。若用FLD，可能会造成荧光猝灭。常用的脱气方法比较：10氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。抽真空脱气法：易抽走有机相。超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10-15min，此法效果最差。在线真空脱气法：Agilent1100LC真空脱机利用膜渗透技术，在线脱气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。5、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞，以及堵塞后的处理？溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行，尤其水溶液或磷酸盐缓冲液（PH=4—7）。以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。A：请严格执行溶剂过滤。B：请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液C：如果应用许可，可在溶剂中加入0.0001---0.001M的叠氮化钠.D:在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气,以隔绝空气。E：避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。堵塞后的处理法方法：将过滤头从组件中取下，在浓硝酸（35%）中浸泡1h，然后用二次蒸馏水冲洗干净并超声处理。6、Agilent1100LC泵如何维护？Agilent1100L