AG1478和AP23573对人神经母细胞瘤细胞的作用研究

1项目编号滨州医学院大学生科技创新活动基金项目申请书项目名称：AG1478和AP23573对人神经母细胞瘤细胞的作用研究申请者：李莲所在院系：护理学院申请金额：1800元申请日期：2011年11月6日联系电话：[phone]电子信箱：[e-mail]2滨州医学院科研处一、基本情况1．项目情况项目名称AG1478和AP23573对人神经母细胞瘤细胞的作用研究项目来源√自主立题□教师指导选题申请金额0.18万元起止时间自2011年11月至2012年6月项目类别实验研究依托研究（教研、实验）室人体解剖与组织胚胎学研究所2．申请者情况姓名李莲性别女年龄21民族汉院（系）护理学院年级、班级09级护本2班专业护理学3．项目组成员情况姓名性别年龄专业分工每周工作时间签字李莲女21护理学细胞培养7李聪女21护理学资料搜集7曾梦荣女20护理学数据统计与分析7刘春曰女21护理学撰写论文74．指导教师情况姓名王利民职称副教授学历学位硕士研究生专业人体解剖与组织胚胎学[e-mail]所属院系基础学院电话[phone]签字注：项目类别：实验研究、小发明、软件开发、调查研究等。年级班级：应规范填写，如2008级临本1班等。申请书文件名格式：学院名称--申请者姓名--指导教师姓名。3二、立题依据1．研究意义：神经母细胞瘤是目前威胁儿童生命的主要肿瘤之一，在我国发病率高度10/10万，手术切除加辅助化疗是主要的治疗手段，效果非常有限，长期生存率低且严重影响患儿的正常发育。已有研究表明mTOR抑制剂对胃癌细胞的生长具有抑制作用，EGFR抑制剂对鼻咽癌细胞的生长具有抑制作用。通过本实验研究，可以为神经母细胞瘤的治疗提供另一种治疗方法，提高患儿生存率。2.国内外研究现状：EGFR抑制剂AG1478研究现状：已有实验表明此抑制剂对食管癌细胞具有杀伤作用，主要机制是阻滞细胞周期，使细胞阻滞于G。/G期，抑制肿瘤细胞的进展，发挥抗肿瘤效应；此外，EGFR抑制剂还有抑制肿瘤血管生成作用，抑制肿瘤细胞的生长。mTOR抑制剂AP23573研究现状：2010年8月18日，美国FDA核准一项药物，AP23573注射剂，治疗软组织及肿瘤。AP23573通过抑制mTOR发挥抗肿瘤活性，抑制蛋白生成和细胞生长。前期临床结果表示：AP23573安全性良好，且对多种癌症有抗肿瘤活性。尽管有EGFR抑制剂和mTOR抑制剂AP23573对其他肿瘤作用的研究，但是国内外并没有这两种药物对神经母细胞瘤细胞的作用研究。3.研究目的：本试验通过对神经母细胞瘤细胞的培养，研究AG1478和AP23573对神经母细胞瘤细胞生长的有无抑制作用，如果有抑制作用，其作用机制是什么，为神经母细胞瘤的提供科学的临床理论依据。44.主要参考文献：［1］徐大志，侯景辉，詹有庆，等.胃癌组织中p-roTOR表达与患者预后的关系[J].中华普通外科学文献（电子版）,2009,3（6）:36-38.［2］王利平，张华，符鹏程，等.EGFR抑制剂吉非替尼对食管癌细胞的抑制作用[J].广东医学,2010，31(22):2895-2897.［3］李金超，许爱娥，宋秀祖，等.mTOR活化抗UVB诱导HaCaT细胞凋亡的研究[J].中华皮肤科杂志,2010，43(9):633-636.［4］韩磊，蒲佩玉，康春生.脑胶质瘤PI3K信号通路的研究进展[J].中国神经肿瘤杂志,2010,8(1):39-43.［5］孙晓杰，黄常志.PI3K-Akt信号通路与肿瘤[J].世界华人消化杂志,2006,14（3）:306-311.［6］陈增保，王笃伦，王华玲.中枢神经组织毛细血管密度测量改良Elias法的比较研究[J].解剖学杂志,1997,20(4):339-342.5三、研究方案1．研究内容与方法：（1）SH-SY5Y细胞株的培养：实验分组：a．空白对照（细胞株正常培养）b.AG1478作用组c.AP23573作用组d.AG1478和AP23573共同作用组（2）流式细胞术检测处于细胞周期各期的细胞（3）MTT法测定凋亡细胞占总细胞的比例（4）WesternBlot测定pAkt、pmTOR的含量（5）免疫组化Elias法测量血管密度（6）数据的统计学处理：运用SPSS13.0统计软件对相关数据资料进行统计处理，所有数据以均数±标准差(x_±S)表示。多个样本均数间的比较先进行方差齐性检验和正态性检验，符合这两种检验的数据进行单因素方差分析，两组间的比较采用q检验；对于不能符合这两种检验的数据采用秩和检验。检验水准α＝0.05。62．研究目标和创新：研究目标：IL-4、5和CRP在羊水栓塞时含量的变化创新之处：①研究课题新颖，国内外研究中少见。②应用科学技术全面③可为临床上对羊水栓塞的诊断治疗提供一个新的思路。3．预期成果和形式：（1）实验数据（2）研究报告（3）在国内期刊发表论文4．研究进度及安排：2012.11～2011.12查阅相关文献，熟悉ELISA的相关操作方法。2013.03～2013.05完成相关实验及相应指标的测量和数据的记录。2013.05～2013.06数据整理、统计分析、完成课题结题报告。5．所需仪器设备：离心机分光光度计婴儿称CRP、IL-4、5的ELISA试剂盒6．经费使用计划：CRP、IL-4、5的ELISA试剂盒750元实验动物（20只）1000元论文打印费、动物饲养等其他费用元四、审批情况71．指导教师推荐意见：指导教师签字：年月日2．院（系）推荐意见：负责人签字：部门公章：年月日4．科研处意见：负责人签名：部门公章：年月日6．学校审批意见：校领导签名：单位公章：年月日