CETTIC岗位培训考试试卷

染色体Chromosome染色体研究的方法染色体显微分离与显微克隆(MicroisolatingandMicrocloning)染色体连锁图谱(LinkageMap)：指确定界标染色体上两个遗传位点或遗传标记在染色体上的位置，以及彼此间相对位置的线性排列图。利用目标性状与基因座连锁间的关联性进行的标记。染色体原位杂交(insituHybridization)：DNA-DNA、DNA-RNA和RNA-RNA杂交。荧光原位杂交(FISH)、染色体原位抑制杂交(ISSH)及多彩色荧光原位杂交(M-FISH)、原位杂交显带、荧光原位杂交基因定位等技术染色体研究的方法染色体涂染(Chromosomepainting)：用荧光染料标记探针，作原位杂交时与探针杂交的染色体上的某条染色体臂、某一区段或整个染色体都呈现荧光。染色体基因定位(Genelocalization)：荧光原位杂交技术、放射杂交体法、重叠群拼接以及染色体步移等染色体片段转移(Fragmenttransferring)：染色体介导的基因转移(Chromosomemediatedgenetransferring)。用显微切割方法从染色体上切割下特定的染色体片段，扩增后导入其它细胞或将人工组装染色体导入其它细胞并使之稳定遗传的技术。各种克隆以及基因分析法和能够处理的染色体组的大小以染色体组为对象进行杂交时，由于染色体组中特定序列（Alu及L1等）的存在，当探针是包含Alu及L1序列时，探针也和目标部位以外的染色体组中大量存在的Alu及L1进行杂交，会检测出非特异性的信号。SKY法：用5种荧光色素将人染色体染上不同的颜色。利用流式细胞术对24种染色体进行分离回收。在为各染色体的基因组DNA建立文库后，分别用它们制成不同的染色体探针。光谱核型分析(SKY)适用不同目的的FISH法的选择方法CISS法将无荧光色素标记的Alu及L1与已标记的探针混合进行杂交的方法。已标记探针中的Alu及L1与未标记的Alu及L1间进行竞争，利用未标记的“探针”掩蔽存在于染色体组中的Alu及L1,能除去重复序列引起的非特异性信号。长散在重复序列(longinterspersednuclearelements，LINE)：散在分布的长细胞核因子，是散在分布在哺乳动物基因中的一类重复序列，重复序列较长。LINE是可以自主转座的一类反录转座子，来源于RNA聚合酶Ⅱ的转录产物；短散在重复序列（shortinterspersednuclearelements，SINE）：是非自主转座的反转录转座子，来源于RNA聚合酶Ⅲ的转录物。LINE与SINE重复序列L1:LINE中的一重复序列，长约6500bp，哺乳动物基因组中拷贝数多达10万份，集中在AT富集区。L1及由L1编码的反转录酶作用于其他非自主反转录转座子後所生成的DNA序列，至少占人类基因组全长的四分之一。Alu重复序列：哺乳动物基因组中SINE家族的一员，约50万份拷贝。平均4～6kb中就有一个Alu序列。这种DNA序列中有限制性内切核酸酶Alu的识别序列AGCT，所以称为Alu重复序列。典型的人基因组Alu序列长282bp，由两个同源但有差别的亚基构成。L1与Alu重复序列基因组比较杂交法(comparativegenomichybridization法，CGH法)：将细胞中提取的基因组DNA作探针，以1号～22号及XY染色体的人体染色体为对象，对细胞中产生的染色体拷贝数变化进行测定的基因组分析技术。CGH微阵列法：将已明确了在染色体上的位置的、包含基因组DNA的人工染色体(BAC等)点样在载玻片上而形成的微阵列。G显带G显带多用于染色体的核型分析、肿瘤染色体结构异常(断裂、缺失、倒位和易位等)和数量异常(多倍体)的分析。影响G显带的因素染色体相似性很强,畸变复杂时,结果分析困难;标本中细胞分裂指数低或染色体形态学表型差时,影响获得信息的准确性;染色体的畸变微小(5Mb)到不足以引起图像明显变化时,微小畸变不易检测一位女性病人23对染色体的标准G显带图像C显带染色体核型分析配对：根据染色体相对长度、臂比、着丝点指数、次缢痕有无及位置、随体形状和大小等进行同源染色体的配对；染色体排列：染色体对从大到小，短臂向上，长臂向下，各染色体的着丝粒排在一条直线上，有特殊标记的染色体（如含有随体）以及性染色体等可单独排列。洋葱核型制片一、染色体DNA1.染色体DNA分子的基本序列①DNA复制起始点序列5’A/TTTATPuTTTA/T3’②着丝粒DNA序列③次缢痕④端粒DNA序列有功能的人类着丝粒着丝粒DNA(CEN-DNA)经典的satDNAαsatDNA家族βsatDNA家族γsat星DNA家族48bpsatDNA家族Sn5satDNA家族着丝粒蛋白质(CENP)：CENP-A、CENP-B、CENP-C、CENP-E和CENP-G五种类型．家族I：由42bp的单体组成，其中17bp(ACATAAAATATCDAAAGT)为可变区，25bp(ACCCAAAAAGTAGTATTATATACTGT)为重复单位家族II是保守性差的ATTCC重复；家族III是较保守的ATTCC重复，且与l0bp的序列(ATGTCGGGTTG)相间分布。经典satDNACENP-A：位于着丝点内层并与αsatDNA结合、是着丝粒特异性的核心组蛋白；CENP-B：特异性地与α卫星DNA中17bp的DNA单体(即CENP-Bbox)结合。CENP-C：位于着丝点内层。CEXP-G：位于间期的核基质和着丝点内层，整个细胞周期中始终与着丝粒结合；CENP-E：是有丝分裂特异性的组份。着丝粒蛋白质(CENP)③次缢痕染色体的一种固定形态特征，与核仁的形成有关。由异染色质组成，18S，28SrRNA基因聚集在NOR区，5S基因分布于基因组的很多位置。不同真核生物的rDNA具有很相似的分子同源性。细胞中带次缢痕的染色体数即NOR数和核仁数有的一致，有的不一致。核仁数比NOR数少。④端粒DNA序列端粒序列:GT链的5’-3’方向总是指向染色体的末端，而CA链的5’-3’则方向相反，指向着丝粒;端粒重复单位的复制次数不完全均一；端粒序列的链区内有缺口，有游离的3’端羟基存在，可作为聚合酶合成的引物；端粒序列的末端不能进行末端标记，推测其分子未端不是游离的。5’-CCCCAA-3’3’-GGGGTT-5’TelomereA.FISHofaDNAprobecontainingthesequenceTTAGGG,whichlocalizestothetelomeresofhumanchromosomes.B.DemonstrationthatcertainproteinsbindspecificallytotelomericDNA.Chromosometerritories(染色体领域，CTs)染色体领域概念的提出Boveri研究线虫间期核中染色质的精细布局。发现间期核中染色质并非随机排列，而与有丝分裂分裂期染色体的空间排列基本相似。Wallace用BrdU证实染色质在核中并不是随机分布，而是经过严格组织，每条染色体在间期中各自占据了一块特定的不重叠的核区域---染色体领域。Theexistenceofchromosometerritorieswasdemonstratedexperimentallyduringtheearly1980sinmicrolaserexperimentsbyThomasandChristophCremer.染色体领域：间期核染色质存在的一种特殊的物理状态usedmicrolasertoinducelocalgenomedamage,andpredictedthatinflictingDNAdamagewithinasmallvolumeofthenucleuswouldyielddifferentresultsdependingonhowchromosomeswerearranged.Ifchromosomesoccupieddistinctterritories(left),localizeddamagewouldaffectonlyasmallsubsetofchromosomes,whereasifthechromatinfibresofeachchromosomewererandomlydistributedthroughoutthenucleus(right),manychromosomeswouldbedamaged.Threesets(I–III)ofhamsterchromosomesafterlaserdamage.Onlyasubsetofthechromosomeswasdamaged,asindicatedbytheblackgrainsofradioactivitymostprominentlyseenonchromosomes1and2.Thisdemonstratestheexistenceofchromosometerritories.染色体领域的定位拉布尔构型(Rablconfiguration，1885)：在间期核中，染色体的端粒和着丝粒分别定位在核的两极。果蝇、小麦、燕麦、黑麦、大麦、酵母。染色体领域的定位辐射状定位(Radialpositioning)：具有较大基因密度的、小染色体倾向于定位于核内部；较低基因密度的、较大染色体倾向于定位在核外周。人、鸡、高粱、水稻、玉米。染色体领域的定位染色体相对定位方式(Relativepositioning)：染色体领域相互之间倾向于定位在较邻近的位置。有丝分裂花结(rosettes)染色体领域的定位方式染色体领域的CT-IC模型T.Cremer和C.Cremer按一定比例，将染色体领域的模型画在一个取自活体HeLa细胞的细胞核光学切片上，得到哺乳动物的核建构模型CT-IC(ChromosomeTerritoryInterchromatinCompartment)模型。a：CTs表面处于高度褶皱不平状态，带有活性基因的大染色质环从CTs表面伸进间隔区(Interchromatincompartment,IC);b：在CTs内部，染色体短臂区、长臂区和着丝粒区(*)分开分布，染色质环上的基因(白)离着丝粒异染色质较远具有转录活性，相同的基因(黑)若处于着丝粒异染色质区则无转录活性；低密度染色质延伸进IC内，高密度染色质离IC较远;c：深棕色为高密度，亮黄色为低密度。CTs中的染色质密度不均一分布，处于不同复制时期的染色质区分布位置不同。d：中晚期复制的染色质中基因密度较低(红)，倾向于定位在核外周，与核被膜(黄)紧密联系,包围在核仁外周或被核被膜包围。早期复制的染色质中基因密度较高(绿)，存于基因密度较低的各染色质区之间;e：每一染色质区内都包含小于1Mb的基因；处于严格组织的染色质结构由不同层次的染色质纤维组成，从拓扑学结构上看，活性基因(白点)存在于缠绕的染色质纤维表面；沉默基因(黑点)可能被定位在染色质结构内部;f：IC(绿)包含着转录、拼接、DNA复制、修复等活动所需要的复合物(黄点)和大的非染色质区(黄点形成区块);g：将1Mb的染色质区(红)和IC(绿)在这些区域间展开，间隔区IC、活性基因和无活性基因之间的拓扑关系。图上:活性基因(白点)定位在这些区的表面，沉默基因(黑点)定位在内部。图下:显示出转录激活前,大约100kb左右的闭合的、可选择性的、包含沉默基因的染色质区转变成为开放性结构。CT-IC模型主要观点间期时染色质以不同层次的染色质纤维分布于核中，但不是完全松散的散布，而以区域状分布且区域间不重叠，即以领域(CTs)形式存在于核中。CTs之间为间隔区（ICs)，且CTs与ICs无严格的界限，带有活性基因的大染色质环有可能伸进ICs内，可能与基因的表达调控有关。ICs内包含了转录、拼接、DNA复制、修复等相关因子;一般认为活性基因定位于领