CXCR4和VEGF-C在乳腺癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系

CXCR4和VEGF-C在乳腺癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系黄天从许建华叶凯(福建医科大学附属第二医院外科,福建362000)【摘要】目的探讨趋化因子受体(CXCR4)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)在人乳腺癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系。方法选择65例乳腺癌标本,应用免疫组织化学染色方法,检测CXCR4和VEGF-C在人乳腺癌组织中的表达,同时对其与临床病理参数的关系进行统计学分析。结果CXCR4在乳腺癌组织中的阳性表达率为43.1%,其中淋巴结转移组表达率为57.9%,无淋巴结转移组表达率为22.2%,差异有非常显著的统计学意义(P0.01)。VEGF-C在乳腺癌组织中的阳性表达率为50.2%,其中淋巴结转移组表达率为68.4%,无淋巴结转移组表达率为25.9%,二者差异非常显著(P0·01)。而且,CXCR4阳性表达与VEGF-C阳性表达呈显著正相关(P0·05)。乳腺癌CXCR4和VEGF-C的表达水平与乳腺癌淋巴结转移密切相关,而与病人的月经状态、临床分期、病理类型等无相关性(P0.05)。结论CXCR4和VEGF-C的表达可作为评估乳腺癌病人淋巴道转移的一个观测指标。【关键词】趋化因子受体;血管内皮生长因子C;乳腺肿瘤;淋巴道转移【中图分类号】R737.9【文献标识码】A【文章编号】CorrelationofCXCR4andVEGF-CexpressionswithlymphnodemetastasisinbreastcarcinomaHuangTianCong,XuJianHua,YeKai(DepartmentofSurgery,SecondAffiliatedHospitalofFujianMedicalUniversity,Fujian362000,China)【Abstract】ObjectiveToinvestigatetherelationshipoftheexpressionsofchemokinereceptorCXCR4andvascularendothelialgrowthfactorC(VEGF-C)withlymphnodemetastasisinbreastcarcinoma.MethodsImmuohistochemistrywasusedtodetecttheexpressionsofCXCR4andVEGF-Cin65samplesofbreastcarcinoma.TherelationshipbetweenCXCR4andVEGF-Cexpressionsandtheclinicpathologicaldi-ammeterswasstatisticallyanalyzed.ResultsThepositiverateofCXCR4expressionwithlymphnodemetastasiswashigherthanthatwithoutlymphnodemetastasis(57.9%vs22.2%,P0·01).ThepositiverateofVEGF-Cexpressionwithlymphnodemetastasiswashigherthanthatwithoutlymphnodemetastasis(68.4%vs25.9%,P0·01).ThepositiveexpressionofCXCR4wasconsistentwiththepositiveexpressionofVEGF-C,andtheexpressionlevelsofCXCR4andVEGF-Cwerecloselycorrelatedwithlymphnodemetastasis,butnotwithage,tumorsize,histologicaltype,cellulardifferentiationandinvasiondepth.ConclusionCXCR4andVEGF-Cexpressionsmaybecomepredictorsforthelymphaticmetastasisofbreastcarcinoma.【Keywords】ChemokinereceptorCXCR4;vascularendothelialgrowthfactorC;breastcarcinoma;Lymphaticmetastasis.乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,淋巴道转移是其最常见的转移方式。文献提示：CXCR4、VEGF-C与肿瘤淋巴转移关系密切[1]。在本研究中,我们运用免疫组织化学的方法,检测了乳腺癌组织中趋化因子受体(chemokineCXC4receptor,CXCR4)和血管内皮生长因子C(vascularendothelialgrowthfactorC,VEGF-C)的表达,拟对乳腺癌发生淋巴道转移的机制进行初步探讨。1材料与方法1.1材料收集我科2005年1月至2007年12月部分乳腺癌术中标本65例,全部病例均经组织病理学检查证实为原发性乳腺癌。10例从非乳腺癌手术中获得的正常乳腺组织作对照。所有病例均为女性,中位年龄46.68岁,绝经前41例,绝经后24例,按UICC-TNM标准进行临床分期,Ⅰ期18例,Ⅱ~Ⅲ期39例,Ⅳ期8例。病理类型为浸润性导管癌20例,非浸润性导管癌45例,HE染色腋淋巴结转移38例,无腋淋巴结转移27例。1.2试剂鼠抗人CXCR4为武汉博士德生物工程有限公司产品。兔抗人VEGF-C及S-P试剂盒为北京中山生物技术有限公司产品。1.3方法采用S-P法进行免疫组织化学染色。主要步骤如下:所有标本经常规石蜡包埋,制备5μm厚连续切片。切片经常规脱蜡、水化,3%过氧化氢去除内源性过氧化物酶,组织抗原修复10min(用pH6·0的0.01mol/L柠檬酸缓冲液,于微波炉中94℃,每次5min,共2次),正常羊血清封闭,分别加入CXCR4(工作浓度1∶50)和VEGF-C一抗(工作浓度1∶25)后37℃孵育30min,湿盒中4℃过夜;次日PBS充分洗涤(5min×3次),加入生物素标记二抗37℃孵育30min,PBS漂洗(5min×3次)后加入链亲和素过氧化物酶标记三抗37℃孵育30min,PBS漂洗之后DAB显色;苏木精复染,透明,中性树脂封片,光镜下观察。PBS代替一抗作为阴性对照。1.4结果判断以细胞质内出现淡黄色至棕褐色颗粒为阳性染色,400倍光镜下随机选取5个视野,以定位明确、染色明显,平均20%以上细胞染色的组织切片视为表达阳性。1.5统计学处理所有资料输入SPSS10.0统计软件进行统计学分析,组间样本率的比较用χ2检验法或Fisher确切概率法。P0.05视为显著性差异,有统计学意义。2结果2.1CXCR4的表达CXCR4表达于癌细胞的细胞膜和细胞质,呈淡黄色至棕黄色,有时可呈“菊花样”巢状分布,细胞核不染色,在癌组织内及周围的基质内也可见弱染色(图1)。在65例标本中,有28例染色阳性(43·1%);淋巴结转移组CXCR4的阳性表达率57·9%,无淋巴结转移的6例,阳性染色率22·2%图12.2VEGF-C的表达VEGF-C表达于癌细胞的细胞质,呈淡黄色至棕黄色,为局灶性或弥散性分布,细胞膜和细胞核不染色,在强阳性染色的癌组织附近可见淋巴管内皮着色(图2)。在65例标本中,有33例染色阳性(50·2%);淋巴结转移组VEGF-C的表达率68·4%,无淋巴结转移组阳性表达率25.9%。图22.3CXCR4和VEGF-C表达与临床病理参数的关系由表1可看出,乳腺癌CXCR4和VEGF-C的表达水平与病人的月经状态、临床分期、组织学类型等无相关性(P0·05)。而淋巴结转移有相关性。表1乳腺癌CXCR4和VEGF-C表达与临床病理参数的关系参数病例阳性表达(%)PVEGF-C阳性表达(%)P月经状态绝经前4120(48.8)0.05925(61.0)0.067绝经后246(25.0)9(37.5)临床分期Ⅰ184(22.2)0.5427(38.9)0.596Ⅱ~Ⅲ3914(35.9)20(51.3)Ⅴ82(25.0)3(37.5)组织类型浸润性癌204(20.0)0.3096(30.0)0.383非浸润性癌4514(31.1)18(40.0)淋巴结转移+3822(57.9)0.00426(68.4)0.001-276(22.2)7(25.9)2.4CXCR4表达和VEGF-C表达之间的相关性通过列连表相关分析显示,CXCR4阳性表达与VEGF-C阳性表达呈显著正相关(P0.05)。3讨论CXCR4(CXCchemokinereceptor4)是一类与G蛋白耦联、具7个疏水跨膜结构的受体,其主要表达的细胞为嗜中性粒细胞、单核-巨嗜细胞和树突状细胞。CXCR4与其惟一配体SDF-1的相互作用对于胚胎、血管和心脏形成、移植后造血干细胞归巢及介导炎症细胞跨膜迁移、共刺激T淋巴细胞增殖、炎症反应的参与等有重要作用[2]。近年研究发现,某些肿瘤细胞可以局限性地表达一些趋化因子和趋化因子受体。Muller等[3]研究表明,乳腺肿瘤细胞较正常乳腺细胞CXCR4表达明显增高,其特异性配体SDF-1α与乳腺肿瘤细胞CXCR4结合后,可转导调节肌动蛋白聚合和伪足形成的信号,导致肿瘤细胞趋化和侵袭,而功能性阻断这一受体可以抑制肿瘤的转移,表明趋化因子信号途径在乳腺癌转移中发挥了重要的作用。VEGF-C是目前为止发现的最具特异性的淋巴管内皮生长刺激因子,其受体分别为VEGFR-2和VEGFR-3。在成人,VEGFR-3主要表达于淋巴管内皮细胞,是淋巴管生成的特异性调节因子,VEGF-C与VEGFR-3结合后,通过MEK/ERK和PI3/AKT途径引起淋巴管内皮细胞增生[4,5]。.许多实体瘤均能合成VEGF-C,不同类型的肿瘤表达VEGF-C的能力不同,且其表达强度与肿瘤发生淋巴转移的程度有关。目前,对VEGF-C可增加肿瘤淋巴结转移机制的普遍认识是,VEGF-C通过激活淋巴管内皮,刺激淋巴管增生或扩张,这些新生或扩张的淋巴管,为肿瘤细胞的淋巴转移增加了机会。同时,激活的淋巴管内皮细胞可能分泌某些细胞因子,对肿瘤细胞的定向迁移产生趋化作用[6-9]。本实验通过人乳腺癌组织研究发现VEGF-C的表达与CXCR4的表达呈正相关,同时,两者的表达情况也与乳腺癌腋淋巴结转移呈正相关。抗CXCR4单克隆抗体将乳腺癌细胞中的CXCR4封闭后趋化因子SDF-1对癌细胞的趋化作用明显受到抑制,说明乳腺癌细胞的迁移与其自身的CXCR4有密切关系。我们认为,在人类乳腺癌中VEGF-C可能通过某种机制调节CXCR4的产生或表达,形成VEGF-C-CXCR4信息通路,促进肿瘤细胞向特定器官转移。从本研究的结果中可以看出趋化因子SDF-1与其受体CXCR4结合,是促使乳腺癌细胞向靶器官趋化和侵袭的前提。VEGF-C-CX-CR4-SDF-1生物调节网络为我们今后研究阻断乳腺癌淋巴转移的新方法提供了理论导向[10~12]。本实验统计分析显示,CXCR4阳性表达与VEGF-C阳性表达呈显著正相关(P0·05),说明乳腺癌细胞分泌的CXCR4可能与VEGF-C在促进乳腺癌的淋巴结转移方面存在相互作用,但其具体的分子机制还不清楚,有待于进一步实验研究。我们的研究提示,CXCR4和VEGF-C的表达可作为评估乳腺癌病人淋巴道转移的一个观测指标还待进一步验证,这正是我们下一步的工作目标。当前的研究已高度关注到淋巴管生成在肿瘤转移中的重要性,将成为肿瘤转移研究的焦点。有报道采用反义技术或RNA干扰技术可以阻断VEGF-C或CXCR4的表达,抑制肿瘤的生物学恶性表型[13~14],为基因治疗应用于临床奠定了基础。可见,抑制淋巴管生成和肿瘤淋巴道转移将成为继抗肿瘤新生血管治疗之后的又一肿瘤生物治疗模式,具有美好的应用前景。【参考文献】[1]BachelderRE,etal.CancerRes2002,62(24):7203-7206.[2]Baggiolin