ELISA法乙肝两对半检测影响因素分析和临床意义_薛春杨

中国误诊学杂志2011年6月第11卷第16期ChinJMisdiagn,Jun2011Vol11No.16·3913··医学论坛·ELISA法乙肝两对半检测影响因素分析和临床意义薛春杨,周建波东南大学医学院附属江阴医院检验科,江苏江阴214400摘要:目的探讨ELISA法检测乙肝两对半常见影响因素和临床意义。方法回顾分析ELISA法检测乙肝两对半的检验步骤,总结乙肝两对半检测的影响因素,并对临床意义进行探讨。结果检验前标本的准备、检验人员的业务水平、检验过程中的标准操作规程、检验结果的研读等是ELISA法检测乙肝乙肝两对半的影响因素,两对半各项指标对临床诊治乙肝具有指导意义。结论乙肝两对半是乙肝临床治疗依据的重要指标,ELISA法是检测乙肝的灵敏方法,严格按照操作步骤,加强质量控制,可有效排除影响因素干扰。主题词:肝炎,乙型/诊断;肝炎抗体,乙型/分析;肝炎抗原,乙型/分析;酶联免疫吸附测定中图分类号:R512.62文献标识码:B文章编号:1009-6647(2011)16-3913-02乙肝两对半是诊断、治疗乙肝的有效指标,常用的检测方育,温育使反应孔内的酶标物质辣根酶催化底物生成有色产法为酶联免疫吸附试验(ELISA),但影响因素较多[1]。本文对物。此过程受温度时间和光线等条件影响通常底物显色在、,ELISA法检测乙肝两对半的影响因素和临床意义进行探讨,为37℃10～40min反应彻底完成,底物液受光照会自行变色,显临床诊疗提供参考。色反应需在避光环境进行。1检测前的影响因素1.1标本的影响标本应避免溶血,红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰与显色剂发生显色反应。血块完全收缩使标本中的非特异性活性物质部分或全部失活,若在血液还未开始凝固时强行离心分离血清,ELISA测定过程中可形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果[2]。1.2试剂盒的影响试剂盒的质量是保证实验结果准确性的必要前提,各厂家的试剂盒灵敏度、特异性、精密度、稳定性和操作简便性有一定的差异。试剂盒保存要求在2～8℃环境,实验时将试剂盒必须放到室温平衡0.5h。1.3检验人员的影响检验医师应掌握ELISA用于乙肝两对半测定的质控方法原理及失控处理原则,熟悉操作中易出现问题的实验环节,掌握乙肝两对半各标志物之间存在意义,正确使用测定仪器及加样器。2检验过程的影响因素2.1加样吸嘴的清洁与否和吸量的准确性直接影响检测结果,严格执行加样器使用操作规程,向反应孔加标本时应将吸头尖触及到反应孔侧壁下1/3处,决不能污染其他反应孔。放到温育箱前,必须将所加样用振荡器混匀30s以上。2.2温育标本加入板孔后,易产生边缘效应,抗原抗体结合及酶促反应因酶标板周围与内部孔升降温速率不同,造成周边与内部孔结果差异。干育容易产生周边效应,即反应板周边孔温度与中间孔温度差异,这样升温速率差会影响到结果准确性[3]。在实验操作中应该采取水育使反应孔底部接触到恒温水,尽量保证整板温度迅速达到温度平衡,减少边缘效应造成的误差。2.3洗板通过洗涤分离结合与未结合抗原抗体复合物及酶标记物,也可以把非特异性吸附蛋白质、血球、细菌中酶等干扰去掉。每次洗板都应使用新鲜制造的蒸馏水或去离子水稀释洗涤剂,防止洗涤液受污染影响洗板效果。2.4显色显色是ELISA法测定乙肝两对半中最后一步温3检测结果研读的影响结果判断须在终止液加入后10min内完成,以免出现孔内结晶,影响酶标仪的测试。操作者要有高度的责任心,确保试剂的质量及有效期的同时,对于复查后的异常结果应重新采集标本再予复查,在整个实验过程中加入外部质控血清进行严格的质量控制。所有复检要有详细记录。4临床意义[4]4.1HbsAg乙肝病毒表面抗原,为已经感染病毒的标志,并不反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱。4.2HbsAb乙肝病毒表面抗体,为中和性抗体标志,是是否康复或是否有抵抗力的主要标志。乙肝疫苗接种者,若仅此项阳性,应视为乙肝疫苗接种后正常现象。4.3HbeAg乙肝病毒e抗原,为病毒复制标志。持续阳性3个月以上则有慢性化倾向。4.4HbeAb乙肝病毒e抗体,为病毒复制停止标志,病毒复制减少,传染性较弱,但并非完全没有传染性。4.5HbcAb乙肝病毒核心抗体,为曾经感染过或正在感染者都会出现的标志,核心抗体IGM是新近感染或病毒复制标志,核心抗体是感染后就会产生的,对于辅助两对半检查有一定意义。5讨论乙肝是当前严重危害人们身体健康的传染病之一,血清两对半检测对乙肝的诊断,病程监测,疗效观察起到了一定的作用,常用的检测方法为ELISA法[5]。但ELISA检测中受到许多因素的影响,如标本留取与处理、加样、孵育、洗板、显色及结果判读,如不注意可能导致假阳性或假阴性的结果。具体操作中应严格按照操作步骤进行,设立阴阳对照及临界值测定,同时做好室内质控、室间评价,以严谨的工作作风检测每一份标本,对有疑义的检验结果要复查,才能保证检测质量,杜绝假阳、假阴性结果。·3914·中国误诊学杂志2011年6月第11卷第16期ChinJMisdiagn,Jun2011Vol11No.16参考文献中国现代药物应用,2010,4(11):74-75.[4]李辉霞,王德志,杨朋.乙肝两对半定量检测及临床意义[J].医学[1]臧勇.酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析[J].信息,2010,23(9):21-22.中国实用医药,2010,5(24):124-125.[5]黄波,廖常贵.乙肝两对半两种检测方法的比较[J].国际检验医[2]冯秀河,朱峰,王凤玲.酶联免疫吸附试验检测假阳性结果分析学杂志,2009,30(2):165-167.[J].中国误诊学杂志,2008,8(20):4870-4871.收稿日期:2011-03-01责任编辑:郭怀勇[3]解殿清,瞿静.ELISA法乙肝两对半定性检测影响因素探讨[J].·教训分析·急性出血性坏死性肠炎误诊3例分析白虎,王永兴,乌力吉,王洪儒解放军第253医院普外科,内蒙古呼和浩特010051主题词:小肠结肠炎,坏死性/诊断;误诊中图分类号:R725.746.2文献标识码:B文章编号:1009-6647(2011)16-3914-01急性出血坏死性肠炎(Acutehemorrhagicnecrotizingen-2结果teritis,AHNE)是一种主要累及小肠,以小肠广泛出血及坏死本组3例均行剖腹探查术后确诊,确诊后积极治疗,均转为特征的急性蜂窝组织炎,多见于儿童,成人少见,病变早期即危为安,10～20d后均痊愈出院,出院后门诊随访,预后良好,有腹痛、血便,继而出现肠管坏死、穿孔、腹膜炎、休克等全身症无一例死亡。状,延误诊治或者治疗失当可于数日至数周内死亡,死亡率可达20%～27%[1]。但因临床少见,且起病初无特异性,常被误3讨论诊为中毒性细菌性痢疾肠梗阻急性化脓性阑尾炎极易造成急性出血性坏死性小肠炎发病率低,国内外文献报道较少。、、,现已证实C型产气荚膜杆菌(即可产生B毒素的welchili杆菌)误诊,国内外文献均有报道。本文收集的3例AHNE患者,初期均未能及时诊断。现报告如下。是引起急性出血坏3死性小肠炎的主要致病菌。该细菌产生的1临床资料B毒素可选择性的作用于小肠血管,使之痉挛、凝血,造成小肠黏膜下层水肿、出血、坏死及炎症细胞浸润等,进而发生急性出血1.1一般资料我院2008-2010年收治3例AHNE患者,性坏死性小肠炎[2]。便血、腹泻、腹痛及全身中毒症状是本病的均为成年男性,年龄21～30岁,平均26.3岁。四个重要症状。临床症状典型结合有不洁饮食史,诊断并不困1.2误诊情况3例均急性起病,发病至就诊时间为3～48h,难,临床上可分为便血腹泻型、腹膜炎型、中毒休克型。2例发病前有不洁饮食史,1例病因不清。其中误诊为急性肠3.1误诊原因分析(1)本病发病率低,医师对本病特点缺乏梗阻1例,急性细菌性痢疾1例,急性胰腺炎1例。认识;(2)本病的发展阶段及类型不同,临床表现差异很大。急1.3检查方法本组均有腹痛,多为持续性痛阵发性加重。1性肠梗阻和细菌性痢疾各1例的患者缺乏典型的血便而致误例为脐周及上腹部疼痛伴恶心、呕吐、腹胀。查体发现中上腹诊,缺乏全面综合分析能力;(3)急性胰腺炎1例患者过于依赖部轻度压痛及反跳痛,肠鸣音弱,起病36h后出现少量多次陈辅助检查,满足现有诊断,未能仔细观察病情。旧性血便,腹部DR示中上腹可见大小不等液平面,疑似肠梗3.2误诊预防我们认为以下情况应考虑本病:(1)发病早期阻。入院48h后行剖腹探查术确诊。1例表现为脐周阵发性症状与体征不相称,即症状重而体征轻;(2)有急性腹痛、呕吐、疼痛、高热、腹泻,腥臭血便伴里急后重感,疑似急性细菌性痢腹泻、发热或继而出现便血、肠梗阻现象,迅速出现全身中毒症疾,1d后出现大量陈旧性血便,持续性高热,脐周部压痛及反状、休克和内脏功能衰竭而不能用其他疾病解释时;(3)X线透跳痛明显,肠鸣音亢进,行大便培养结果排除细菌性痢疾,急诊视可见肠管积气,气液平面,肠痉挛和狭窄,卧位盆腔呈月形暗行剖腹探查术确诊。1例表现为持续性上腹部疼痛、陈发性加影紧靠盆腔下缘(其他急腹征均无此体征);(4)腹腔穿刺液为重,伴恶心、呕吐。体征剑突下压痛明显,无反跳痛,无移动性血性;(5)结合临床表现应常规肛诊检查,了解有无血便情况,浊音,肠鸣音弱。实验室检查血尿淀粉酶均不同程度增高。腹必要时进行大便产气荚膜杆菌培养和内毒素测定。部MRI示胰腺增大,边缘模糊,T2胰腺信号增高,胰腺周围T2参考文献多发不规则高信号渗出影,左侧肾前筋膜增厚,疑似急性胰腺炎。予以禁食水、持续胃肠减压、抗感染、抑酸、抑制胰酶分泌、[1]简燕婷,麦国丰,王继德,等.炎症性肠病研究进展[J].国外医学维持水电解质平衡及肠内营养支持治疗,腹部疼痛稍有好转。内科学分册,2005,32(1):17-20.2d后出现大量血便,腹部疼痛明显加重,腹部彩超提示腹腔内[2]卢亚军,刁建友,张淑文.急性出血性坏死性小肠炎误诊分析[J].大量积液。行腹部穿刺抽出洗肉样积液。急诊行剖腹探查确临床误诊误治,1997,10(1):40-41.收稿日期:2011-02-20责任编辑:郭怀勇诊为AHNE。