实验二-细菌基本形态及特殊结构观察

实验二细菌基本形态和特殊结构观察一目的要求1了解普通光学显微镜原理及构造。2学习并掌握普通光学显微镜油镜的正确使用方法。★3用油镜观察细菌基本形态。4了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜观察细菌的荚膜、芽孢形态。5细菌运动性观察。二基本原理１普通光学显微镜的结构２普通光学显微镜的光学成象原理3荚膜染色4芽孢染色１普通光学显微镜的结构（1)机械系统包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等（2)光学系统包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。２普通光学显微镜的光学成象原理（1）显微镜的放大倍数放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积。目镜：物镜低倍镜：10X高被镜：40X油镜：100X10X100X目镜物镜⑵显微镜的分辨率油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。原因：◆油镜分辨率高于低倍镜、高倍镜◆油镜汇聚光线的能力大于低倍镜、高倍镜◆分辨率是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（R）R=λ∕（2NA）(λ为入射光波波长；NA为显微镜数值孔径)NA=η.sinθη为标本、物镜之间介质的折射率。θ为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的一半。η低倍镜=η高倍镜=η空气=1.0，η油镜η香柏油=1.52θ低倍镜θ高倍镜θ油镜，sinθ低倍镜sinθ高倍镜sinθ油镜NA低倍镜NA高倍镜NA油镜所以，油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高。汇聚光线的能力油镜高于低倍镜、高倍镜。3荚膜染色主要成分多为糖类，无色透明且不易着色常用负染色观察。负染色是将细菌细胞和背景着色，从而把无色透明、不着色的荚膜结构衬托显现出来。菌体荚膜菌胶团：多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体。菌胶团4芽孢染色细菌芽孢壁厚而致密，透性低，难于染色，但一旦被染色又难于脱色。因此先用强着色力的染料（孔雀绿）处理，并同时加热，使菌体以及芽孢均着色，后使菌体脱色，而芽孢保留原色，经复染（蕃红），菌体与芽孢分别以不同颜色显现。芽孢菌体菌体芽孢对有芽孢的菌体进行简单染色（只用一种染料染色）。菌体和芽孢着色情况如何？菌体芽孢三实验材料▲细菌基本形态标本片：大肠杆菌片枯草杆菌片八叠球菌片▲细菌特殊形态标本片：枯草芽孢杆菌芽孢片▲示范片观察：荚膜片观察悬滴法观察活细菌的运动四实验内容及步骤1细菌基本形态观察2细菌特殊结构观察3悬滴法观察活细菌运动1细菌基本形态观察学习油镜的正确使用方法。用油镜观察——大肠杆菌枯草杆菌八叠球菌2细菌特殊结构观察学习油镜的正确使用方法。用油镜观察细菌特殊结构——枯草芽孢杆菌芽孢（油镜）钾细菌荚膜（高倍镜）（示范）荚膜菌体菌胶团菌体芽孢3悬滴法观察活细菌运动悬滴片制好后，用低倍镜调焦，换高倍镜观察。注意：视野中暗光观察。运动的菌体发亮。▲观察前准备：显微镜的准备和调试视野明亮▲低倍镜观察▲高倍镜观察（此步可以省略）▲油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦▲显微镜油镜头的清洗和归位（二甲苯清洗）油镜使用主要步骤注意！！！——显微镜调焦方法五实验报告绘大肠杆菌枯草杆菌八叠球菌形态示意图绘枯草芽孢杆菌芽孢形态示意图菌名：大肠杆菌放大倍数：16×100X细菌形态示意图绘图要求：①选择形态典型的部分细菌细胞绘图。②仅绘出细菌细胞轮廓，但不同细菌的细胞大小比例应适宜，且形态上应有所区分。③细菌与视野相对大小应符合实际，应将细菌细胞排布在视野中离开中心的部位（即绘空心图）。必须注明菌名、放大倍数。思考题（1）观察细菌染色片时应如何调节光线？（即如何调亮光，如何调暗光）（2）油镜观测时，是否可以用除香柏油以外的其它液体作介质？