生物发光毒性测试分析

总3页，第1页生物发光毒性测试分析毒性是一项综合的生物学参数，它是衡量样品对活性生物体所产生的影响，不能以化学分析的方法进行测定，一些生物测试方法如鱼类试验、浮游动物试验、藻类试验等则较为复杂，且必须使用高等生物进行试验，从而引起众多的争议。发光细菌测试使用了具有发光特性的天然或人工遗传改造的微生物，这一方法经研究被证实具有快速、简便的特点，同时有很好的灵敏度和可靠性，发光细菌本身又没有危害性。发光细菌试验已成为环境样品毒性检测的生物测试技术，被列入了我国国家标准GB/T15441-1995，德国国家标准(DIN38412)和国际标准(ISO11348)。发光细菌毒性测试方法是一个我国国家标准和ISO标准认证的，运用发光细菌Vibriofischeri进行急性毒理测试。发光细菌闪烁测试（flashtest）是一个改良的方法用于测试含有固体和有色的样品。上述两个系统包括化学发光检测仪（闪烁测试系统的发光仪必需有自动样品注射器），软件程序，试剂冷却/孵育器和冷冻干粉状态的测试用发光细菌。生物重金属试剂盒是一个革命性地用于分析环境中少量样品的方法。这些细菌能够特异性地感受到某种特定金属的存在，如来自固体和液体样品中ppb水平的铅、汞、砷和镉。发光终点测试方法具有很高的灵敏度，快速和高通量进行。发光细菌毒性测试此方法是传统和标准的通过发光细菌方法来测试化合物或污水的毒性（GB/T15441-1995，ISO113483:水质）测定水样对Vibriofischeri发光细菌测试的光发射抑制效果。这个测试方法是建立在此基础之上的――当有毒性的化合物存在时，细菌的发光量会降低。这个方法非常快速，只需要5－30分钟就可以完成。。标准发光细菌的测试过程是：把样品和细菌混合在一起，经过短暂的孵育，测试发光强度。检测仪器只需要化学发光仪（如BertholdDetectionSystems管式或板式化学发光仪)。检测系统包括仪器和试剂（冷冻干粉）。细菌可以常温运送给客户。生物发光毒性测试产品：BertholdDetectionSystems公司的化学发光仪KenrealTM生物毒性试剂盒制冷恒温孵育器分析软件总3页，第2页闪烁测试–改良的水样和沉淀物毒性快速测试生物发光发光细菌广泛应用于测试水样和化学物质的急性毒性。这个测试方法是标准认证的(ENISO11348)，目前已有几种商业化的测试系统。测试样品与细菌混合孵育15或30分钟，在孵育后测试光强度，并与纯的细菌的发光强度比较。光强度的降低认为是毒性。这个方法是快速，它对有机污染物的特异性也非常高。此方法主要的缺点是在大多数的自然样品中存在颜色和混浊会发散光，被认为有毒性。校正颜色和混浊而引起的效果是费时，不方便和不可靠。闪烁测试是一个改良的发光细菌生物毒性测试，设计用来测试固体样品。这方法考虑到了在整个测试过程中的颜色和混浊。测试以动力学的方式进行，一个可自动加样的化学发光仪能够同时进行加样和测试。在V.fischeri细菌的闪烁测试中细菌通过自动加样器加到样品中，信号连续记录30秒钟。在加样后立即收集到最大的信号值（Ipeak），与30秒后的信号值（I30s）相比。对于大多数的化学物质，特别是有机的，毒性效果（光强度的减弱）在孵育几秒钟后就能观察到了。然后对于一些化学物质只有在经过较长时间的孵育后才能观察到效果。因此，在15或30分钟后的动力学数据可以提供可靠的结果。上述描述的特点使得颜色/混浊校正方法不需要了，方便了在极短时间筛选大多数样品的毒性。闪烁测试方法使用30秒的接触时间相比于标准方法钟的15到30分钟的接触时间稍降低了灵敏度。当使用相同的接触时间，标准方法和闪烁方法的灵敏度是一样的。它们的相关差异在1％以下。样品测试体积在1ml以下，根据接触时间的长短此方法每小时可以进行40到80个样品的测试。闪烁测试无毒性和有毒性样品的动力学数据生物闪烁发光毒性测试产品：BertholdDetectionSystems公司的化学发光仪KenrealTM生物毒性试剂盒制冷恒温孵育器分析软件总3页，第3页以生物发光为基础的生物传感器检测重金属通过遗传改造生物体使其能够特异性感受在环境样品中存在的重金属。这些细菌菌株对“生物利用度”这个词赋予了全新的概念，因为现在测试毒性物质中的亚类毒性浓度成为可能。相比于标准方法，它是非常快速，每天测试几百个样品成为可能。目前可以提供测试汞和砷的试剂盒，将来会有更多。这个方法可以在简单的管式化学发光仪上进行，也可以在板式化学发光仪上进行。介绍:•整体细胞传感器检测来自不同样品（水样、沥出物、沉淀物和土壤样品）的重金属的生物利用度组分•生物利用度表示一种金属可进入生物系统的浓度•在测定重金属毒性中的重要因素•不等于溶解度•用传统的化学方法很难测试，但是用生物传感器容易做到•非常灵敏的方法，比传统的毒性测试方法灵敏很多测试原理：环境条件下的细菌变化--代谢反应--可测试信号--测读(发光)--无重金属：荧光素酶合成受到抑制，细菌发出很低的光信号；有重金属：荧光素酶合成激活，细菌发出高强度的光信号。优势：•生物发光能够通过化学发光仪进行高灵敏地定量测试，动态范围宽•发光可以活体测试，细胞完整无缺•微生物生物传感器的一般优势•简单操作：传感器生物体以试剂盒形式（冻干）•高灵敏度vs.背景-化学发光仪•可以作为一个大量样品的筛选工具•相比于传统方法，成本具有很大优势生物闪烁发光毒性测试产品：BertholdDetectionSystems公司的化学发光仪KenrealTM生物毒性试剂盒制冷恒温孵育器分析软件