生物性污染防治与

生物性污染防治與基因重組實驗安全臺大醫學院環安衛小組執行秘書微生物學科鄧述諄教授98年9月醫學院生物安全管理相關業務單位•醫學院研發分處1.基因重組實驗安全相關業務2.實驗室生物安全等級分級（Ｐ1、Ｐ2、Ｐ2+、Ｐ3）3.第二級以上感染性生物材料異動申請4.醫學院Ｐ3實驗室管理•醫學院環安衛小組1.全院實驗室抽查訪視2.生物醫療廢棄物清運3.廢尖銳器具（針頭針筒、刀片等）清運4.生物安全相關設備管理抽查（生物安全操作櫃、高壓滅菌鍋）醫學院研發分處•臺大首頁→點選「學術單位」→點選「醫學院」→進入醫學院首頁→點選「行政單位」→點選研發分處醫學院環安衛小組•臺大首頁→點選「學術單位」→點選「醫學院」→進入醫學院首頁→點選「行政單位」→點選總務分處→於庶務股項下選擇「環衛業務」講習大綱研究方向與內容：感染性？毒性？是否為大量培養又宿主為何？有無基因重組實驗？是否為轉殖植物或轉殖動物？有無臨床試驗？生物材料之危險等級？申請計畫：基因重組實驗計畫動物實驗計畫臨床試驗同意書實驗室設施規劃：是否符合操作該實驗之生物安全規範？是否已申請實驗室等級鑑定？實驗產出廢棄物：實驗廢棄物暫存及標示？生物醫療廢棄物之處理、清運？病原微生物之危險性分類第一章總則第二章物理性防護：20公升以下、20公升以上規模實驗之物理性防護，病毒類實驗之物理性防護。第三章生物性防護：防護之層級、安全度評估。是否報備、需經由研究機構生物實驗安全委員會核准後方可進行、需經由行政院所屬主管機構核准後方可進行之實驗。毒素基因之選殖。需經由行政院所屬主管機構監督下方可進行之基本守則外實驗。第四章重組體之處理：重組體之增殖、保管、轉讓及實驗結束後之處理第五章使用動物為宿主之實驗：安全評估、防護基準、基因轉殖動物之運輸、轉讓及實驗結束後之處理第六章使用植物為宿主之實驗：同上第七章確保實驗安全之組織及任務第八章教育訓練及健康管理附表一生物安全操作台附表二病原微生物依其危險性為基礎之分類附表三研究實驗用之微生物附表四病原微生物之分類附表五供研究實驗用之DNA載體是源自真核細胞（屬於真菌屬者除外)之病毒及類病毒安全分類附表六作為DNA供應體等使用的脊椎動物之原蟲的安全度分類附表七不必向主管機構生物實驗安全委員會報備之載體實驗附表八SARSAssociatedCoronaviruses實驗安全準則行政院國家科學委員會中華民國89年11月制訂(93年6月增修)電子檔可至國科會網站下載中華民國93年6月增修版病原微生物之危險性分類附表二、病原微生物依其危險性為基礎之分類甲、第一級危險群（Riskgroup1,RG1）微生物第一級危險群微生物與人類健康成人之疾病無關。例如不產生內孢子之Bacilluslicheniformis,Escherichiacoli-K12,adeno-associatedvirus第一型至第四型，及重組的不含潛在致癌基因產物或毒素之adeno-associatedvirus，且在無輔助病毒存在下進行培養。乙、第二級危險群（Riskgroup2,RG2）微生物第二級危險群微生物在人類所引起的疾病很少是嚴重的，而且通常有預防及治療的方法。例如：(1)細菌（含披衣菌）、(2)真菌、(3)寄生蟲(4)病毒---1.Adenoviruses,human-alltypes2.Coronaviruses（SARS-AssociatedCoronaviruses列於第三級危險群除外）3.HepatitisA,B,C,D,andEviruses丙、第三級危險群（Riskgroup3,RG3）微生物第三級危險群微生物在人類可以引起嚴重或致死的疾病，可能有預防及治療之方法。例如：(1)細菌（含立克次氏菌）、(2)真菌、(3)寄生蟲(4)病毒與變性蛋白（Prions）---1.Coronavirusesa.SARS-AssociatedCoronaviruses（SARS-CoV）2.Retroviruses----a.Humanimmunodeficiencyvirus（HIV）types1and2b.HumanTcelllymphotropicvirus（HTLV）types1and2丁、第四級危險群（Riskgroup4,RG4）微生物第四級危險群微生物在人類可以引起嚴重或致死的疾病，但通常無預防及治療之方法。例如：(1)細菌(2)真菌(3)寄生蟲(4)病毒生物材料分級、實驗室安全等級•病原微生物之危險群（WHO）RG4（RiskGroup4）RG3RG2RG1•宿主B2(Hostvectorsystem)B1•生物性防護(Biologicalcontainment)(實驗操作規範)BSL4（Biosafetylevel4)＞BSL3＞BSL2＞BSL1（BSL1=Practice+Safetyequipment+Personalprotectiveequipment+P1）•物理性防護(Physicalcontainment)(實驗室安全等級)P4＞P3＞P2+＞P2＞P1備註：1.20公升以上規模實驗之物理、生物性防護LS-2(largescaleculturesafetylevel2)＞LS-1＞LS-C2.Animal(plant)Biosafetylevel實驗室生物安全等級分類危險群與生物安全等級、操作規範及設備對照表危險群RISKGROUP生物安全等級BSL實驗室類型LABORATORYTYPE實驗室操作規範LABORATORYPRACTICES安全設備SAFETYEQUIPMENT第一級1第一等級BiosafetyLevel1（P1）基礎教學、研究Basicteaching,research優良微生物學技術GMT無，開放式工作檯None;openbenchwork第二級2第二等級BiosafetyLevel2（P2）初級衛生服務、診斷服務、研究Primaryhealthservices;diagnosticservices,research優良微生物學技術加上防護衣、生物危害標誌GMTplusprotectiveclothing,biohazardsign開放式工作檯加上防止氣霧外流之生物安全櫃OpenbenchplusBSCforpotentialaerosols第三級3第三等級BiosafetyLevel3（P3）特殊診斷服務、研究Specialdiagnosticservices,research同第二等級加上特殊防護衣、進入管制及定向氣流AsLevel2plusspecialclothing,controlledaccess,directionalairflow生物安全櫃及（或）其他所有實驗室工作所需要之基本防護裝備BSCand/orotherprimarydevicesforallactivities第四級4第四等級BiosafetyLevel4（P4）具危險性之病原體Dangerouspathogenunits同第三等級加上氣密門、出口淋浴及廢棄物之特殊處理AsLevel3plusairlockentry,showerexit,specialwastedisposal三級生物安全櫃或二級生物安全櫃並穿著正壓防護衣、雙門高壓蒸氣滅菌器（穿牆式）及經過濾之空氣ClassIIIBSC,orpositivepressuresuitsinconjunctionwithClassIIBSCs,double-endedautoclave(throughthewall),filteredairP1實驗室規範及注意事項1.實驗室須具備跟一般微生物學實驗室相同等級之設備。2.若同時進行其他非基因重組的實驗時，須明確劃分實驗區域，小心進行操作。3.進行實驗時，宜關閉實驗室門窗。4.每日實驗結束時須滅菌實驗台，如實驗中發生污染，須立即加以滅菌。5.實驗所產生之廢棄物，須先滅菌後再依院方規定丟棄。遭污染之器具須先經滅菌後，再清洗使用或丟棄。6.不得用口做吸量操作。7.實驗室內禁止飲食、吸煙及保存食物。8.操作重組體之後，或離開實驗室之前要洗手。9.在所有操作中，應儘量避免產生氣霧。10.從實驗室搬離被污染物品，須將其放入堅固不漏的容器，並密封後才運出。11.防除實驗室之非實驗用生物，如昆蟲及鼠類等。12.如有其他方法可用，應避免使用針頭。13.實驗用衣物的使用，須遵從計畫主持人的指示。14.須遵守計畫主持人所訂之其他事項。P2實驗室規範及注意事項-1壹、隔離的設備1.須設置生物安全操作裝置（第一級或第二級），且每年做一次定期檢查。2.為了處理重組體，而使用容易產生氣霧的磨碎機、冷凍乾燥器、超音波細胞打碎機及離心機等儀器時，須把這些儀器放置在安全操作裝置中。但若機器已經有防止氣霧外洩的裝置，則不在此限。3.實驗室須具備處理污染物及廢棄物滅菌用之高壓滅菌器，最好放置於同一房間。如有困難，則可置放於鄰近處。4.實驗室宜置有UV燈(30’)及雙重門，如無雙重門，則門必須為密閉式。5.實驗室須設有可用腳或肘操作或自動的洗手的裝置。貳、實驗實施要項（除P1實驗室所有規範外，仍須注意下列事項。）1.每天實驗結束之後須滅菌實驗台及安全操作裝置。如發生污染，則立即加以滅菌。2.操作重組體時須戴手套以防污染，操作完畢後及離開實驗室前須洗手或消毒。3.在所有的操作中，應儘量避免產生氣霧（例如：把燒熱的接種用白金環及接種針插入培養基時，若發生大量氣霧，就可能造成污染），亦應避免將吸管或針筒內之液體用力射出。4.實驗室內，要穿著實驗衣，離開前要脫掉。5.禁止對實驗性質不了解的人進入實驗室。6.實驗進行中，在實驗室入口，標示「P2實驗室」，並掛上「P2實驗進行中」的標示，且保存重組體之冰箱及冷凍庫也要做同樣的標示。7.實驗室要經常清理，保持清潔，不得放置與實驗無關的物品。8.安全操作裝置內的HEPA過濾器，在更換前、定期檢查時及實驗內容變更時，須密封安全操作裝置，每立方公尺用10公克的甲醛燻蒸1小時，去除污染。9.若在P2實驗室內同時進行P1實驗時，須明確劃分實驗區域，小心進行操作。P2實驗室規範及注意事項-2P1實驗室與P2實驗室比較表實驗室安全等級P1P2隔間需要：進行實驗時宜關閉門窗需要完善隔間：進行實驗時需關閉門窗（如能裝置UV燈及雙重門尤佳）洗手設備需要需要（必須是能以足、肘或電子操作）註：如無洗手設備，請增設類似Saraya’sAutomaticHandDisinfector。安全操作裝置實驗台（適當防污，或使用第一級安全操作櫃。）第一級或第二級安全操作櫃（若同時進行P1實驗，須明確劃分實驗區域。）滅菌鍋不需要（如有需滅菌之廢棄物，請裝在紅色滅菌袋，滅菌後遵循校方相關規定。）需要（實驗相關之生物材料污染物及廢棄物，請密裝於紅色滅菌袋，滅菌後遵循院方相關規定）。標示需要需要（含冰箱、冷凍庫、培養箱等）實驗實施要領公佈於明顯處並遵循公佈於明顯處並遵循實驗衣需要需要（不能穿出實驗室，須易於區分）P1實驗與P2實驗差異要點1.操作重組基因之宿主微生物屬第二級危險群微生物（詳基因重組實驗守則附表二）之實驗，必須在P2實驗室內進行。2.所重組之基因DNA來源為第二、三級危險群微生物，其宿主微生物為第一級危險群者，若能說明所殖入基因不具造成病原性、傳播感染性則可在P1實驗室內進行。3.操作重組基因實驗於細胞培養系統中，涉及可能會產生具感染性之病毒且屬第二級危險群者，必須在P2實驗室內進行。4.所重組之基因產物具毒性者，依其毒性強度，根據基因重組實驗守則所列而行之。醫學院P3實驗室使用申請規定•欲使用醫學院P3實驗室之計劃主持人，須向P3實驗室管理委員會提出申請，經P3實驗室管理委員會審核通過後方可使用。•使用前須經P3實驗室管理委員會專人指導P3實驗室之使用細則兩個月，並通過考核後才可使用。生物性實驗室等級鑑定申請送至醫