2017高考生物一轮复习第十一单元现代生物科技专题专题30克隆技术考点2动物细胞工程对点训练(B)

1动物细胞工程1．科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子Ⅸ医用蛋白，其技术路线如图：(1)由过程①获得的A为________________________________。(2)在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是______________。受体应选用________期卵母细胞。(3)进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生________，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。(4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为______________________________。答案(1)含目的基因的表达载体(2)保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞MⅡ中期(3)免疫排斥反应(4)整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养解析(1)依据图示，①为表达载体构建过程，A为含有目的基因的表达载体。(2)在核移植前，去掉受体卵母细胞核的目的是保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞；受体细胞应选用减Ⅱ中期的卵母细胞。(3)在胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本不发生免疫排斥反应，这为重组胚胎的存活提供了可能。(4)由于整合有目的基因的成纤维细胞可以进行传代培养，故理论上可获得无限个转基因绵羊。2．某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。2若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过________次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是________小鼠，理由是______________________。(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有____________________________________，体系中出现多种类型细胞的原因是_________________________。(3)杂交瘤细胞中有________个细胞核，染色体数目最多是________条。(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_________________________________________________________。答案(1)4YY小鼠的血清抗体效价最高(2)B淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，且融合率达不到100%(3)1100(4)不能无限增殖解析本题考查动物单克隆抗体技术的原理及应用。(1)由图看出，到第4次免疫时，Y和Z的血清抗体效价已达到要求，即16000以上，而前3次免疫后，3只小鼠的血清抗体效价均未达到要求。从第3次开始，Y小鼠的血清抗体效价最高，所以Y小鼠最适合用于制备B淋巴细胞。(2)仅考虑细胞之间的两两融合。该融合体系中有5种类型的细胞：2种未融合型(B淋巴细胞、骨髓瘤细胞)，3种融合型(B淋巴细胞＋B淋巴细胞、骨髓瘤细胞＋骨髓瘤细胞、B淋巴细胞＋骨髓瘤细胞)，由此可看出细胞融合具有随机性。(3)杂交瘤细胞是B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的，有1个细胞核，核内染色体数为40＋60＝100。(4)B淋巴细胞不能无限增殖，所以经多次传代培养后都不能存活。3．人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答：3(1)单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有___________。(2)若要分析杂交瘤细胞中染色体，可通过______________等过程制成装片，然后在显微镜下观察。杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是________________，在HAT培养基上存活的细胞可能包括________(填下列序号)。①无抗体分泌的细胞②抗HPV抗体的分泌细胞③其他无关抗体的分泌细胞(3)对于抗体检测呈________性的杂交克隆应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～10个/mL，每孔加入细胞稀释液__________mL[0.1/(1/10)]，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。(4)由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是______________________________________。(5)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的一种制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路_____________________。答案(1)动物细胞培养、动物细胞融合(2)解离、漂洗、染色和制片染色体数目加倍①②③(3)阳0.1(4)小鼠形成的抗体对人体来说是抗原，存在着排异反应(5)通过基因工程向浆细胞中导入prG；利用核移植技术将浆细胞的细胞核移植到去核的无限增殖细胞中(答对其一即可)解析(2)利用显微镜观察有丝分裂过程中的染色体，需先制作临时装片；杂交瘤细胞中含有浆细胞和骨髓瘤细胞的染色体，所以比普通淋巴细胞的染色体数目多一倍；在HAT培养基上生存的细胞均为杂交细胞，这些杂交细胞中有分泌HPV抗体的细胞，有分泌其他抗体的细胞，也有不能分泌抗体的细胞。(3)抗体检验呈阳性，说明该杂交瘤细胞可产生所需抗体；为保证每个小孔不多于一个细胞，根据浓度可推断加入细胞稀释液的量：设加入细胞稀释液的最大量是X，则10个/mL×X＝1个，X＝0.1mL。(4)小鼠形成抗体与人体抗体不同，故在人体内可引起免疫反应，所以上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体。(5)根据所给信息可知，还可通过转基因技术或核移植技术获得既能大量增殖，又能产生特定抗体的杂交细胞。