001有机氯类农药残留量测定法标准操作规程

有机氯类农药残留量测定法标准操作规程编制/修订人：日期：年月日部门审核人：日期：年月日分管负责人：日期：年月日质量审核人：日期：年月日企业负责人：日期：年月日实施日期：年月日文件类别：[]管理标准受控状态[]技术标准[√]工作标准本文件由质量部颁布，根据需要分发于以下部门：行政人事部[]生产部[]质量部[1]工程部[]采购部[]物资部[]计财部[]商务部[]存档[1]有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1第2页共7页【目的】规范有机氯类农药残留量测定法检验的程序和方法，确保有机氯类农药残留量测定法检验结果准确可靠。【适用范围】适用于本公司有机氯类农药残留量测定法的检验。【职责】1QC检验人员负责起草，按审批后的标准执行。2质量部经理、质量负责人负责审核、监督执行。3总经理负责审批。【内容】1简述有机氯类农药是农药史中使用量最大，使用历史最长的一类农药，其化学性质稳定，脂溶性强，残效期长(可达30～50年之久)，易在脂肪组织中蓄积，造成慢性中毒，严重危及人体健康。本法通过提取、净化和富集等步骤制备供试品溶液，采用气相色谱法，电子捕获检测器测定。2仪器与用具2.1气相色谱仪，带有63Ni-ECD电子捕获检测器，载气为高纯氮，必须安装脱氧管。2.2超声波处理器。2.3离心机。2.4旋转蒸发仪。2.5色谱柱：SE-54或DB-1701弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)2.6具塞刻度离心管（10ml)，刻度浓缩瓶，具塞锥形瓶（100ml)，移液管等。3试药与试液3.1丙酮、石油醚(60～90℃)和二氯甲烷均为分析纯，且全部经过全玻璃蒸馏装置重蒸馏，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求。3.2无水硫酸钠和氯化钠均为分析纯，硫酸为优级纯。3.3农药对照品：六六六（BHC）[包括α-BHC，β-BHC，γ-BHC和δ-BHC四种异构有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1第3页共7页体]，滴滴涕（DDT)[包括pp'-DDE，pp'-DDD，op'-DDT和pp'-DDT四种异构体]及五氯硝基苯(PCNB），由中国计量科学研究院提供标示含量(浓度)的农药标准品，也可采用国际认可的农药标准品自行配制。49种有机氯类农药残留量测定法4.1色谱条件与系统适用性试验以（14%-氰丙基-苯基）甲基聚硅氧烷或（5%苯基）甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30mX0.32mmX0.25um),63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度230℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温：初始温度100℃，每分钟10℃升至220℃，再以每分钟8℃升至250℃，保持10分钟。按上述条件操作，理论板数以α-BHC峰计算应不低于1X106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。4.2操作方法4.2.1对照品贮备液的制备精密称取六六六(BHC)（α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC）、滴滴涕(DDT)[P，P'-DDE，P，P'-DDD，O，P'-DDT，P，P'-DDT]及五氯硝基苯(PCNB)农药对照品溶液适量，用石油醚(60~90℃)分别制成每1ml约含4~5μg的溶液，即得。4.2.2混合对照品储备液的制备精密量取上述各对照品贮备液0.5ml，置10mI量瓶中，用石油醚60~90℃)稀释至刻度，摇匀，即得。4.2.3混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备液，用石油醚(60~90℃)制成每1L分别含0ug，1μg，5μg，10μg，50μg，100μg和250μg的溶液，即得。4.2.4供试品溶液制备方法1（药材或饮片）取供试品，粉碎成粉末（过三号筛），取约2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g，精密加二氯甲烷30ml，称定重量，超声处理15分钟，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置（使分层），将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml，于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚(60~90℃)如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚(60~90℃)溶解并转移至有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1第4页共7页10ml具塞刻度离心管中，加石油醚(60~90℃)精密稀释至5ml，小心加入硫酸1ml，振摇1分钟，离心(3000转/分钟)10分钟，精密量取上清液2ml，置具刻度浓缩瓶中，连接旋转蒸发器，40℃下(或用氮气)将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml，即得。同法制备空白样品。4.2.5方法2(制剂)取供试品，研成细粉(蜜丸切碎，液体直接量取)，精密称取适量(相当于药材2g)，以下按方法1，制备供试品溶液。4.2.6测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1μ1，注入气象色谱仪，按外标法计算供试品中9种有机氯农药残留量。522种有机氯类农药残留量测定法5.1色谱条件与系统适用性试验分析柱：以50%苯基50%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30mX0.25mmX0.25um),试验柱：以100%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30mX0.25mmX0.25um)，63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度240℃，检测器温度300℃，不分流进样，流速为恒压模式（初始流速为1.3ml/min）。程序升温：初始70℃，保持1分钟，每分钟10℃升至180℃，保持5分钟，再以每分钟5℃升至220℃，最后以每分钟100℃升至280℃，保持8分钟。理论板数以α-BHC计算应不低于1X106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。5.2操作方法5.2.1对照品储备液的制备精密称取表1中农药对照品适量，用异辛烷分别制如表1中浓度，即得。5.2.2混合对照品储备液的制备精密量上述对照品贮备溶液各1ml,置100ml量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，即得。5.2.3混合对照品溶液的制备分别精密量取上述对照品备贮溶液，用异辛烷制成每1L分别含10μg、20μg、50μg、100μg、200μg、500μg的溶液，即得（其中β-六六六，异狄氏剂、P，P'-滴滴滴、O，P'-滴滴涕每1L分别含20μg、40μg、100μg、200μg、400μg、1000μg)。5.2.4供试品溶液制备取供试品，粉碎成粉末（过三号筛）,取约1.5g，精密称定，置于50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加水10ml，混匀，放置2小时，精密加入乙有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1第5页共7页腈15ml，剧烈振摇提取1分钟，再加人预先称好的无水硫酸镁4g与氣化钠1g的混合粉末，再次剧烈振摇1分钟后，离心(4000转/分钟）1分钟。精密吸取上清液10ml，40℃减压浓缩至近干，用环己烷-乙酸乙酯（1:1)混合溶液分次转移至10ml量瓶中，加环己烷-乙酸乙酯（1:1)混合溶液至刻度，摇匀，转移至预先加入1g无水硫酸钠的离心管中，振摇，放置1小时，离心（必要时滤过)，取上清液5ml过凝胶渗透色谱柱（400mmX25mm,内装BIO-BeadsS-X3填料；以环己烷-乙酸乙酯（1:1)混合溶液为流动相；流速为每分钟5.0ml)净化，收集18〜30分钟的洗脱液，于40℃水浴减压浓缩至近干，加少量正己烷替换两次，加正己烷1ml使溶解，转移至弗罗里硅土固相萃取小柱[1000mg/6ml,用正己烷-丙酮（95:5)混合溶液10ml和正己烷10ml预洗]上，残渣用正己烷洗涤3次,每次1ml，洗液转移至同一弗罗里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷-丙酮(95：5)混合溶液10ml洗脱，收集全部洗脱液,置氮吹仪上吹至近干，加异辛烷定容至1ml，涡旋使溶解，即得。5.2.5测定法分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1ul，注入气相色谱仪，按外标标准曲线法计算供试品中22种有机氣农药残留量。5.2.6限度除另有规定外,每1kg中药材或饮片中含总六六六（a-BHC,β-BHC，γ-BHC,δ-BHC之和）不得过0.2mg；总滴滴涕（P，P'-DDE，P，P'-DDD，O，P'-DDT，P，P'-DDT之和）不得过0.2mg；五氣硝基苯（Quintozene)不得过0.1mg；六氯苯（Hexachlorobenzene)不得过0,1mg;七氯（Heptachlor)、顺式环氧七氯（Heptach丨orexo-epoxide)和反式环氧七氯(Heptachlor*endo-epoxide)之和不得过0.05mg;艾氏剂（AIdrin)和狄氏剂（Dieldrin)之和不得过0.05mg;异狄氏剂(Endrin)不得过0.05mg;顺式氯丹Chlordane)、反式氯丹（trans-Chlordane)和氧化氯丹（oxy-Chlordane)之和不得过0.05mg;a-硫丹(a-Endosulfan)β-硫丹(β-Endosulfan)和硫丹硫酸盐（Endosulfansulfate)之和不得过3mg。【附注】(1)当供试品中有农药检出时,可在验证柱中确认检出的结果，再进行定量。必要时,可用气相色谱一质谱法进行确证。(2)加样回收率应在70%〜120%之间。有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1第6页共7页表122种有机氯类农药对照品贮备液浓度、相对保留时间及检出限参考值序号中文名英文名对照品贮备液（ug/ml)相对保留时间(分析柱）检出限（mg/kg)1六氯苯Hexachlorobenzene1000.5740.0012a-六六六a-BHC1000.6010.0043五硝基苯Quintozene1000.6450.0074γ-六六六y-BHC1000.6670.0035β-六六六β-BHC2000.7050.0086七氣Heptachlor1000.7130.0077δ-六六六δ-BHC1000.7500.0038艾氏剂Aldrin1000.7600.0069氧化氯丹Oxy-Chlordane1000.8160.00710顺式环氧七氣Heptachlor-exo-epoxide1000.8330.00611反式环氧七氣Heptachlor-endo-epoxide1000.8440.00512反式氯丹trans-Chlordane1000.8540.00513顺式氯丹cis-Chlordane1000.8670,00814a-琉丹a-Endosulfan1000.8720.0115p,p/滴滴伊p,p/-DDE1000.8920.00616狄氏剂Dieldrin1000.9010.00517异狄氏剂Endrin2000.9320.00918o,p/滴滴涕o,p/f-DDT2000.9380.01819p,p/滴滴滴p,p/f-DDD2000.9440.00820β-硫丹β-Endosulfan1000.9560.00321p,/p-滴滴涕p,p/-DDT1000.9700.00522硫丹硫酸Endosulfansulfate1001.0000.004注：各对照品的相对保留时间以硫丹硫酸盐为参照峰计算有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1第7页共7页6注意事项6.1本试验所用器皿应严格清洗(不能残存卤素离子)。6.2供试品溶液制备时，有机相减压浓缩务必至近干，避免待测成分损失。6.3为防止假阳性结果，可选择不同极性的色谱柱进行验证，有条件的可采用气质联用予以确认。6.4如样品中其它成分有干扰，可适当改变色谱条件，但需进行空白验证。【相关文件】文件名称文件编号《中国药典》2015版四部/