2011年执业药师药学专业知识药物分析部分教材考点(第七章)

第七章药物杂质检查第一节杂质和杂质的限量检查一、杂质的来源和分类杂质：是影响药物纯度的物质;为存在于药物中没有疗效(氯化物、硫酸盐)或影响药物的疗效和稳定性(水分)，甚至对人体健康有害(砷盐、重金属)的微量物质。★检查杂质、控制纯度的目的：确保用药安全、有效，保证药品质量★杂质检查收载在药品质量标准的“检查”项下，检查的项目一般按杂质的名称命名★《中国药典》“杂质检查”项下包括的内容有：杂质检查的项目、检查方法和杂质限量。检查时应完全按照质量标准的要求进行。(一)药物中杂质的来源(生产、贮藏)1.生产过程中引入：★化学合成药物中：未反应完全的原料、反应的中间体和副产物。★植物原料经提取分离制得的药物中：与药物的结构、性质类似的物质、所用溶剂的残留。★药物制剂中：药物的降解产物、溶剂。如：《中国药典》中盐酸普鲁卡因原料药不检查对氨基苯甲酸，而注射剂则要检查此杂质。★由制备药物的金属设备可能带来的杂质为：砷盐、重金属(Pb)、铁盐、铜盐、锌盐等。2.贮藏过程中产生：贮藏过程中产生杂质原因为：水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等。(二)杂质的分类1.按其来源分：一般杂质和特殊杂质。★一般杂质：分布广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入。(检查方法收载于药典附录中)★特殊杂质：个别药物生产和贮藏过程中引入(检查方法收载在药典该药物的正文项下)2.按其结构分：无机杂质和有机杂质。★无机杂质：氯化物、硫酸盐、重金属等。★有机杂质：有机药物中引入的有机原料、中间体、副产物、分解产物、异构体和残留溶剂3.按是否有害分：普通杂质和有害杂质★★二、杂质的限量检查(纯度检查)一般不要求准确测定含量，只检查杂质是否超过限量。药物中所含杂质的最大允许量，称杂质限量。通常用百分之几或百万分之几(ppm或10-6)表示。砷等有毒杂质一般控制限量不超过百万分之十。杂质限量=(杂质最大允许量/供试品量)×100%杂质限量=(杂质标准溶液的浓度C×杂质标准溶液的体积V/供试品量S)×100%L=(CV)/S三个参数的单位一定要一致例1：检查葡萄糖中的重金属。取葡萄糖4.0g，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，依法检查重金属，含重金属不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多少毫升(每ml相当于10μg的Pb)L=(CV)/S则：V=(LS)/C=5×10-6×4.0/(10×10-6)=2(ml)P375例2、例3例4葡萄糖中重金属检查方法为：取本品适量，加水23ml溶解后，加醋酸缓冲溶液(pH3.5)2ml，依规定方法检查，与标准铅溶液(每ml相当于10mgPb)2.0ml同法制成的对照液比较，不得更深。如重金属的限量要求为百万分之五，需取本品的量为(g)：A.1.B.2.0C.4.0D.6.0E.8.0L=C·V/S则S=C·V/L=10×10-6×2.0/(5×10-6)=4.0(单位g/ml;ml)例5对乙酰胺基酚中氯化物的检查：取本品2.0g，加水100ml，加热溶解后，冷却，滤过，取滤液25ml，依法检查，与标准氯化钠溶液5.0ml(每1ml相当于10ug的Cl)制成的对照液比较，浊度不得更大。问氯化物限量为多少?第二节一般杂质的检查方法《中国药典》在附录中收载了一般杂质的检查方法。一般杂质为在多数药物的生产和贮藏中容易引入的杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐等。一般杂质的检查几乎都用对照品比较法。供试品供试液对照品对照液平行操作色斑比较色斑颜色比色浑浊比浊杂质最大允许量1.氯化物检查法检查药物中的Cl-比浊度法(1)原理(2)所用试剂：稀硝酸、硝酸银试液、标准氯化钠溶液加稀硝酸的作用：①避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成而干扰检查;②加速AgCl沉淀的生成并产生较好的乳浊。(3)所检查的氯化物溶液的最佳浓度范围：50ml溶液中含50~80g的Cl-。(4)供试液若不澄清：用不含氯化物的滤纸滤过后检查。(5)供试液若有色：内消法与外消法先经调色处理使对照液与供试液颜色一致，再检查内消色法：《中国药典》附录所规定方法。在供试品溶液中先加AgNO3试液，如混浊，滤过，制成无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再进一步制成对照溶液。即除去所检查杂质成分的供试品溶液作对照溶液的溶剂。外消色法：根据化学性质设计排除干扰的方法。炽灼破坏或加入其他试剂消除药物呈色性或加入有色溶液(稀焦糖溶液或标准比色液)调节颜色。如高锰酸钾，先加乙醇适量使其还原褪色。2.硫酸盐检查法：检查药物中的SO42-比浊度法(1)检查适宜浓度：50ml溶液中含SO42-0.1~0.5mg(2)所需试剂：标准硫酸钾溶液、氯化钡试液、稀盐酸盐酸酸度：50ml中含稀盐酸2ml，溶液pH值约1加稀盐酸目的：防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀生成。(3)溶液不澄清，用盐酸酸性水洗净硫酸盐的滤纸滤过(4)溶液若有色：内消色法3.铁盐检查法(Fe3+;Fe2+)属于比色法《中国药典》采用硫氰酸盐法(SCN-)检查铁盐(1)目视比色法检查铁盐杂质时，同置于白色背景上，自上向下观察。以50ml溶液中含铁10~50mgFe3+为宜。(2)检查铁盐所用试剂为：硫氰酸盐(铵)溶液、稀盐酸、过硫酸铵、标准铁溶液★硫氰酸盐(铵)作用：显色剂，与Fe3+生成红色[Fe(SCN)6]3-。★稀盐酸的作用：防止Fe3+水解。★过硫酸铵[(NH4)2S2O8]的作用：为氧化剂，氧化Fe2+成Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。(3)需加入过量的硫氰酸铵溶液原因：Fe3+与SCN-的显色反应为可逆反应(4)供试液管与对照液管色调不一致或呈红色较浅，不便于比较措施：用正丁醇或异戊醇提取分离。★★4.重金属检查法：定义：在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠(S2-)作用显色的金属杂质，以铅为代表。中国药典(2005年版)收载有四种方法：第一法：硫代乙酰胺法;第二法：炽灼破坏后检查法第三法：硫化钠法;第四法：微孔滤膜法(1)重金属检查第一法：即硫代乙酰胺法与对照液比较法，比色法①在pH3~3.5时，硫化铅的沉淀较完全。采用醋酸盐缓冲液(pH3.5)维持酸度。②所需试剂：硫代乙酰胺试液，醋酸盐缓冲液(pH3.5)，标准铅溶液③第一法的适宜目视比色浓度范围为：每27ml溶液中含10~20mg铅。④采用外消色法消除颜色干扰：在加硫代乙酰胺试液前于对照液管中滴加稀焦糖溶液，或其他无干扰的有色溶液，使其颜色与供试品溶液管一致。(2)第二法将供试品炽灼破坏后检查或取炽灼残渣项下遗留的残渣进行检查的方法。①适于：难溶于水或乙醇、能与重金属离子形成稳定配位化合物而干扰检查的有机药物②原理：炽灼除去药物干扰，残渣经处理后同第一法检查，比色法。③炽灼破坏药物的温度为：500~600℃。(3)第三法硫化钠法磺胺类、巴比妥类药物难溶于稀酸，但溶于碱性水溶液，按第三法检查重金属。原理：在氢氧化钠溶液中，硫化钠与重金属离子反应而呈色。比色法。所用试剂：氢氧化钠试液、硫化钠试液、标准铅溶液(4)第四法又称微孔滤膜法重金属限量低时，用微孔滤膜法，通过过滤，使重金属硫化物沉淀富集于滤膜上，比较滤膜上供试溶液和对照溶液的色斑深浅，判断重金属是否超过限量。可提高检查的灵敏度。★检查原理同第一法。斑点比较法。适用于含2~5g重金属杂质的检查。★当药物所含重金属杂质用纳氏比色管检查难以观察判断结果时，应改用第四法。★★5.砷盐检查法(限量检查法)《中国药典》采用①古蔡氏法②二乙基二硫代氨基甲酸银法Ag-DDC法①古蔡法：金属锌与酸作用产生新生态的氢，氢与药物中微量砷盐反应，生成砷化氢气体，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液同法所得砷斑比较，来判断砷盐含量所用试剂：金属锌、盐酸、KI试液、酸性SnCl2试液、溴化汞试纸、醋酸铅棉花★金属锌粒2g与盐酸的作用：生成新生态的氢(活泼性氢)★加KI和酸性SnCl2试液：将五价砷还原为三价砷，可加快砷盐被新生态氢还原为砷化氢的反应速度。★溴化汞试纸的作用：与砷化氢形成呈色的砷斑。★加醋酸铅棉花：吸收H2S，消除锌粒或供试品中含有的硫化物所产生硫化氢气体的干扰。★最佳条件：标准砷斑用2ml标准砷溶液(相当于2mgAs)制备。2mgAs为砷盐杂质的限量。②二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC法)★原理：产生砷化氢以前和古蔡氏法一样。砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中的银还原为红色胶态银。★检测方法：直接目视比色;或于510nm波长处测定吸收度★所用试剂：锌粒、盐酸、KI试液、酸性SnCl2试液、醋酸铅棉花，Ag-DDC吡啶溶液(作用：生成红色胶态银)★《中国药典》：用Ag-DDC的三乙胺-氯仿(1.8:98.2)溶液作砷化氢的吸收液，无吡啶恶臭，但灵敏度低。而《美国药典》采用吡啶溶液。6.干燥失重测定法：主要检查药物中的水份，也包括其他挥发性物质如残留有机溶剂等。属于间接挥发重量法(1)常压恒温干燥法：一般105℃。干燥至“恒重”的第二次及以后各次称重间隔为1h。供试品平铺在扁形称量瓶中的厚度一般不超过5mm。(2)干燥剂干燥法★适用于受热易分解的药物：氯化铵、苯佐卡因、硝酸异三梨酯、马来酸麦角新碱★常用干燥剂：硅胶、浓硫酸和五氧化二磷(3)减压干燥法：适用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除的药物。肾上腺素、地高辛(4)热重分析法Thermogravimeticanalysis，TGA热重法是在程序控制温度下，测量物质质量与温度关系的一种技术。适用于结晶水的测定、贵重药物或空气中易氧化药物干燥失重的测定。7.炽灼残渣检查法：检查有机物中混入的各种无机杂质(如金属的氧化物或盐等)属于直接挥发重量法。★样品炭化后+H2SO4湿润→700～800℃炽灼至恒重→称重★若炽灼残渣需留作重金属检查时，则改在500～600℃炽灼至恒重第二次及以后各次称重均应继续炽灼0.5h后进行。8.易炭化物检查法检查药物中遇硫酸易炭化或易被氧化而呈色的微量有机杂质。★方法：H2SO4炭化后与标准比色液比较(或与对照液比较法)★对照液的配制：比色用重铬酸钾液(黄色)0.25ml、比色用硫酸铜液(蓝色)0.25ml、比色用氯化钴液(红色)0.40ml、加水至5ml。9.残留溶剂测定法(一)分类根据有机溶剂的毒性，国际统一将残留溶剂分四类★第一类溶剂为应该避免使用的溶剂，一般为致癌物或危害环境的物质，共有5种：苯、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、1,1-二氯乙烯、1,1,1-三氯乙烷。★第二类溶剂：应限制使用的溶剂，一般具有非基因毒性，不可逆或可逆毒性。共有27种，常见的有：甲苯、三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇、正己烷、乙腈。★第三类溶剂：毒性低，对人体危害较小的溶剂★第四类溶剂：目前尚无足够毒理学资料的溶剂(二)检查方法各国药典均采用气相色谱法检查残留溶剂。进样方法：顶空进样、溶液直接进样10.溶液颜色检查法：控制药物中有色杂质含量方法Ch.P(2005)采用三种方法检查★第一法：与标准比色液比较法标准比色液由三种有色无机盐配成，分别为比色用重铬酸钾液(0.8000mg/ml，黄色)、比色用硫酸铜液(62.4mg/ml，蓝色)、比色用氯化钴液(59.5mg/ml，红色)★第二法：可见分光光度法★第三法：色差计法：测定与水的色差值∆E*11.澄清度检查法比浊度法检查药物中的微量不溶性杂质，注射剂的原料药应作此项检查。★浊度标准液是用硫酸肼和乌洛托品(六亚甲基四胺)配制而成。乌洛托品易水解产生甲醛，甲醛与肼缩合成甲醛腙，形成白色浑浊，故可作为浊度标准贮备液。《中国药典》规定，“澄清”系指供试品溶液的澄清度相当于所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。(二)阿司匹林的杂质检查(1)阿司匹林中特殊杂质：未反应完全的苯酚及水杨酸;同时生成的副产物(不含羧基)：醋酸苯酯、水杨酸苯酯及乙酰水杨酸苯酯等。(2)检查项目：阿司匹林原料药除一般杂质检查项目外，还需检查①溶液的澄清度：检查碳酸钠试液中不溶物。控制原料药中无羧基的特殊杂质。原理：苯酚、醋酸苯酯、水杨酸苯酯及乙酰水杨酸苯酯等