10菌种的衰退复壮和保藏

周鑫军（水生动物类执业兽医师）武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司为什么在养殖水体中需要经常性反复投放活菌制剂？常见活菌制剂成品的保存条件及适宜储存时间？常见活菌制剂成品的剂型？武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司在生物进化的历史长河中，遗传性的变异是绝对的，而它的稳定性则是相对的；退化性的变异是大量的，而进化性的变异却是个别的。猿猴－猿人－古人－现代人退化：阑尾、运动能力、消化功能等进化：语言、文字、大脑功能等武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司在自然条件下，个别的适应性变异通过自然选择得到保存和发展，最后成为进化的方向;在人为条件下，人们也可以通过人工选择去有意识地筛选出个别的正突变体用于实践中。相反，如不进行有意识的人工选择，则大量的自发突变菌株就会泛滥，最后使菌种衰退。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司指群体中退化个体在数量上占一定比例后，表现出菌种生产性能下降或优良性状丧失的现象。对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。其他原有典型性状变得不典型了，也是衰退。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司最易发现的是菌落和细胞形态的改变。再次，是代谢产物生产能力或其对寄生能力的下降。最后，衰退还表现在抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能力的减弱等。菌种的衰退是一个由量变到质变的逐步演变过程，必须及时采取有效措施进行复壮。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司由于菌种自然衰退导致其功能（尤其是我们需要的功能）逐渐减弱甚至丧失；细菌代谢产物产量的逐渐下降；环境突变、养殖水体中部分营养元素缺乏等诸多外部因素导致活菌数量下降；相对来说，市场上销售的活菌成品制剂泼洒到养殖水体就是在给这个水体接种。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司控制传代次数：生产企业自行留种或不留种？创造良好的培养条件：生产设备的先进性？生产人员的水平高低？特定的定向培养基技术？利用不同类型的细胞接种传代：高科技？采用有效的菌种保藏方法：后面详细介绍武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司1.纯种的分离：通过纯种分离可把退化菌种中的一部分仍保持原有典型性状的单细胞分离出来，经过扩大培养就可恢复原菌株的典型性状。粗放的方式：只能达到“菌落纯”的水平，即从种的水平来说是纯的。较精细的方式：单细胞或单孢子分离方法。它可以达到“细胞纯”即“菌株纯”的水平。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司2.通过寄主进行复壮：对于寄生性的微生物的退化菌株，可通过接种到相应昆虫或动植物寄主体内以提高菌株的毒性，如经过长期人工培养的苏云金杆菌会发生毒力减退、杀虫率降低等现象，可用退化的菌株去感染菜青虫的幼虫，然后再从病死的虫体内重新分离典型菌株。如此反复多次，就可提高菌株的杀虫率。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司3.淘汰已衰退的个体：有人曾将“5406”分生孢子在低温（－10度~－30度）下处理5－7天，使其死亡率达到80%，结果发现在抗低温的存活个体中留下了未退化的健壮个体。以上综合了实践中收到一定效果的防止衰退和实现复壮的某些经验。但是，在使用这些方法之前，必须仔细分析和判断自己的菌种究竟是衰退、污染还是仅属于一般性的表型改变。只有对症下药才能使复壮工作奏效。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司工业化生产过程中菌种的衰退是必然的，必须进行菌种的复壮。菌种的复壮需要高科技的相关设备及高水平的专业技术人员。一般不建议不具备相应设备和人员条件的生产企业进行菌种的复壮工作。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司菌种是国家的重要自然资源，菌种保藏是微生物学的重要基础工作。菌种保藏的目的是使之不混乱、不死亡、不污染，并稳定保持原有特性。农业微生物学国家重点实验室－－国内唯一的、代表我国农业微生物科研领域最高水平的实验室。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司1.低温保藏法：低温可以抑制微生物的代谢活动，是一种简单有效的保藏菌种的方法。近年来采用零下150度到零下196度的液态氮超低温保藏菌种，能保存所有的微生物菌种，而且微生物的代谢水平处于最低状态，菌种发生变异的可能性极小。这是目前最理想的菌种保藏方法。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司2.隔绝空气保藏法：该法保藏的原理主要是通过限制氧的供应以削弱微生物的代谢作用，故不适用于厌氧菌。石蜡油保藏法橡皮塞密封保藏法琼脂柱穿刺封口保藏法武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司3.干燥保藏法：断绝对微生物的水分供应，能使微生物的代谢活动强度明显减弱。1）.砂土管保藏法此法适用于产生孢子的放线菌、霉菌和产生芽孢的细菌。将培养好的菌种斜面。用无菌水洗下孢子，制成孢子悬液，再将孢子悬液接入无菌的砂土管中，用接种针拌匀。也可以用接种环直接从斜面上将孢子接入砂土管。干燥后置于40C冰箱中，可保藏数年。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司这是目前最有效的保藏微生物的方法。此法的优点是具备低温、真空和干燥3个保藏菌种的条件。广泛适用各种细菌、酵母菌、霉菌、放线菌和病毒的保存。其保存时间可达1到20年，并且存活率高，变异率低。但过程较复杂，需一定的设备条件。其大体过程是：将需保存的菌种或其孢子悬液装在安瓿瓶里，在低温下快速冷冻，又在低温下立即抽真空，使其中水分升华脱去，形成完全干燥的固体菌块，再在真空条件下融封。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司什么品种可以做成冻干粉制剂保存？复合乳酸菌、红假单胞菌什么品种只能做成干燥的粉剂保存？复合芽孢杆菌、粪链球菌什么品种可以做成液态制剂保存？复合乳酸菌、红假单胞菌武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司4.寄主保藏法：此法适用于专性活细胞寄生微生物（病毒、立克次氏体等）。它们只能寄生在活着的动植物或其他微生物体内，故可针对寄主细胞的特性进行保存。如植物病毒可用植物幼叶的汁液与病毒混合，冷冻或干燥保存。噬菌体可经细菌培养扩大后，与培养基混合直接保存。动物病毒可直接用病毒感染适宜的脏器或体液，然后分装于试管中密封，低温保藏。武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司成品种类保存条件储存时间冻干乳酸菌密封、常温、避光、阴凉24－36月冻干红假单胞菌密封、常温、避光、阴凉24－36月液态乳酸菌密封、常温、避光、阴凉6－12月液态红假单胞菌密封、常温、避光、阴凉12月复合芽孢杆菌粉密封、常温、避光、阴凉24－36月粪肠球菌密封、常温、避光、阴凉24－36月武汉鑫华生环保科技有限公司武汉金海通生物科技有限公司