2010年深圳市感染性腹泻病原谱哨点监测工作方案

12010年深圳市感染性腹泻病原谱哨点监测工作方案感染性腹泻是我市多发丙类传染病，近年来，发病率快速增长，病例数占丙类传染病的50％以上，造成沉重疾病负担，已成为突出的公共卫生问题。为进一步完善重点肠道传染病监测预警系统，及时有效处置感染性腹泻暴发疫情，遏制肠道传染病高发态势，结合深圳实际，特制定本方案。一、目的（一）建立以实验室为基础的感染性腹泻病原谱监测网络，了解深圳市感染性腹泻的病原谱构成，追踪病原谱变迁趋势，探明病原毒力因子。（二）构建病原菌分子分型数据库，并结合病例流行病学资料和病原学资料为暴发疫情的早期预警预测提供基础数据，探索一种更灵敏的疾病监测模式。（三）协助早期识别特定感染性腹泻的暴发疫情，分析流行因素，引导对重点地区和人群的主动监测。（四）对菌株进行抗菌药物敏感性监测，指导临床合理的治疗和预防用药。（五）促进临床实验室和公共卫生实验室数据的交流。（六）为食品安全微生物风险评估提供疾病监测的本底数据。二、工作内容（一）监测病例定义1、监测病例的纳入标准（1）细菌性监测：每日排便3次或以上，且大便性状有改变呈稀2便、水样便、粘液便或脓血便。（2）病毒性监测：细菌培养结果为阴性,满足以下任一项者均为病毒性腹泻疑似病例。①每日排便3次或以上，且大便性状有改变（呈稀便、水样便等，但非粘液便或脓血便），大便常规镜检WBC15，未见RBC的腹泻病例。②每日排便未达到3次，有大便性状改变和呕吐症状者。③每日排便未达到3次，以呕吐为主要症状者。2、监测病例的排除标准：符合下列标准中的其中一条即可排除。（1）已经使用抗生素的患者（针对细菌性腹泻）。（2）不恰当服用化学物质、食用毒蕈等所导致的腹泻。（3）可以明确诊断为阿米巴痢疾等寄生虫性腹泻的病例。（4）慢性腹泻超过2周的病例。（二）监测内容1、标本数量和采样要求每个哨点医院每月采集至少60份门诊腹泻病例急性期（发病3日内）的大便样本、肛拭子或呕吐物标本进行10种致病菌的分离培养。收集其中至少20份致病菌检测阴性且符合病毒性监测病例定义的粪便标本做4种病毒的检测。2、检测项目（1）10种致病菌：沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、空肠弯曲菌、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）、肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）、肠出血性大肠埃希菌（EHEC）和肠粘附性大肠埃希菌（EaggEC）。3（2）4种病毒：轮状病毒、诺如病毒、星状病毒和肠道腺病毒。（三）监测哨点市人民医院、北京大学深圳医院、市儿童医院、南山区人民医院、宝安区妇幼保健院、宝安区龙华人民医院、宝安区西乡人民医院、宝安区沙井人民医院、龙岗中心医院、龙岗区人民医院和光明新区公明人民医院共11家。三、分工与职责（一）哨点医院1、预防保健科协调本院有关门诊和检验科的工作，在腹泻门诊（感染科综合门诊）、儿科门诊和急诊常年开展腹泻病例监测工作。发现腹泻样病例异常增多时，立即向疾控机构报告。（1）数据上报和汇总负责收集每月门诊就诊总人数，腹泻病人就诊总人数（包括儿科、急诊、腹泻门诊/肠道门诊/感染科门诊），腹泻病人住院总人数等数据，并于下月5日前将数据录入《深圳市疾病控制信息管理系统》。每季度对本哨点采样数据和初筛结果数据进行汇总并导出数据库长期保存。（2）标本数量和采样要求每个哨点医院每月采集不少于60份病例急性期（发病3日内）粪便标本进行致病菌检测，标本种类为粪便、肛拭子或呕吐物，采样应注意时间、患者性别、年龄等因素均衡分布。保留其中致病菌检测阴性且符合病毒性监测病例定义的患者粪便标本至少20份用于病毒检测，每份粪便量10g或5ml以上。用无菌消毒棉签挑取约10g（或45ml）的粪便标本，置于灭菌干燥、有盖的5ml螺口塑料管中，放-20℃冰箱冷冻保存。（3）菌株与病毒性腹泻标本的上送每1-2周将初筛阳性菌株（附菌株上送表）和收集的病毒检测标本（附标本信息表）上送至辖区疾病预防控制中心。2、检验科负责按《细菌检测标准程序》（见附件2）进行致病菌的分离和初步鉴定，保存分离阳性菌株；负责保存病毒性腹泻标本。负责在《深圳市疾病控制信息管理系统》对每天收集的腹泻病人的采样资料（见附件1）进行网络直报，并将腹泻标本病原体初筛结果填报到网络上，病毒检测上送标本选择病毒送检一栏。（二）区疾病预防控制中心1、协助市疾病预防控制中心对哨点医院监测工作进行督导。2、负责辖区肠道传染病爆发疫情和细菌性食物中毒爆发疫情的调查、处理和检验，包括对疑似病毒感染性腹泻暴发疫情进行采样，进行轮状病毒和诺如病毒的检测。3、负责将辖区发生的细菌性食物中毒阳性标本信息和初筛结果录入《深圳市疾病控制信息管理系统》。4、对监测点上送的菌株进行复核鉴定和血清学分型，及时将结果录入《深圳市疾病控制信息管理系统》。5、负责将爆发疫情检测中分离的阳性菌株和采集的阳性标本及监测点分离的阳性菌株和收集的病毒检测标本（附标本信息表）及时上送到市疾病预防控制中心。（三）市疾病预防控制中心5负责监测方案的制订和修订及检验流程的质量控制；负责哨点医院经费测算与划拨；负责总体数据的分析与反馈；负责对整个项目的督导和技术培训。1、微生物检验科组织对哨点医院监测工作的督导；负责实验室技术指导，提供检测试剂，对上送病毒性腹泻标本进行病毒检测，并及时将检测和复核确认结果反馈到感染性腹泻监测网络上。对菌株进行分子生物学特征分析，包括菌株分子分型和毒力因子检测；选择部分菌株进行药物敏感性试验；定期反馈分子分型和药敏结果。总结并反馈相关资料。2、传染病防制科负责对哨点医院监测工作的督导；对监测数据进行分析、汇总和反馈；并根据《国家疾病监测信息报告管理系统》监测数据汇总深圳市感染性腹泻监测数据。负责全市肠道传染病爆发疫情的调查，并指导区疾控中心开展辖区肠道传染病爆发疫情的调查。总结并反馈相关资料。3、营养与食品卫生科负责全市细菌性食物中毒的现场调查，包括爆发疫情调查和分析、针对性的风险评估和采取干预措施等，指导区疾控中心开展辖区细菌性食物中毒的调查。总结并反馈相关资料。四、绩效考核为了进一步提高监测系统质量，各哨点医院应当严格按方案要求完成标本采集、检测、保存和上送，并及时在网络系统中录入相关信息。市卫生人口计生委将组织人员不定期对各哨点医院监测工作质量进行督导，并将根据各单位完成工作的数量和质量情况，适当调配下6拨的经费。市疾控中心对各区疾控中心承担的工作将纳入年度全市疾控工作绩效考核评估中。附件：1、深圳市腹泻病人病原体检测采样表（免费）2、深圳市感染性腹泻病原谱哨点监测细菌检测标准程序3、深圳市感染性腹泻病原谱哨点监测工作网络成员通讯录7附件1深圳市腹泻病人病原体检测采样表（免费）基本信息：由病人或医务人员填写姓名：性别：1.男2.女年龄*：电话：户籍类别：1.常住2.暂住3.流动住址：发病日期：年月日就诊日期：年月日可疑食物：1.粮食类2.肉及肉制品3.蛋及蛋制品4.水产品5.糕点6.凉菜7.其它由医护人员填写项目门诊号：采样号*：采样日期：年月日临床症状：□腹泻次／日□发热℃□呕吐□腹痛□其它是否使用抗生素□是□否大便性状：□水样便□蛋花样便□粘液便□脓血便□稀便标本类型：□粪便□肛拭子□呕吐物采样人：*采样号：第1位医院编码，北京大学深圳医院1；宝安区龙华人民医院2；宝安区西乡人民医院3；龙岗中心医院4；深圳市儿童医院5；宝安妇幼保健院6；光明新区公明医院7；龙岗区人民医院8；深圳市人民医院9；南山区人民医院N；宝安区沙井人民医院S第2位至第5位为年月（YYMM），如0708表示2007年8月，第6至7位为本哨点流水编号。*年龄：1周岁以下填月份，一月以下填出生天数8附件2深圳市感染性腹泻病原谱哨点监测细菌检测标准程序一、沙门菌检测操作程序（一）检验程序图（二）分离、鉴定标准操作程序1、SC增菌样品在SC增菌培养基中36℃±1℃增菌18h-24h。2、可疑菌落分离（1）取增菌培养液一环接种HE平板或者科玛嘉显示培养基，36℃±1℃过夜培养；（2）观察并挑取HE上3-5个透明菌落/中心黑色透明菌落，或科玛嘉显示培养基上紫色/酒红色菌落接种KIA、MIU培养基及血平板，36℃±1℃培养过夜；36℃±1℃18h～24h粪便标本SC增菌液36℃±1℃增菌18h-24h接种HE平板或科玛嘉显色培养基挑取HE上透明菌落/中心黑色透明菌落或科玛嘉上紫色/酒红色菌落3-5个接种于KIA、MIU及血平板符合K/A，产气+，H2S+／-，动力+，靛基质-，尿素-36℃±1℃18h～24h菌株保存血清及生化鉴定9（3）挑取血平板上对应生化为K/A，产气+，H2S+/-，动力+，靛基质-，尿素-的培养物进行血清学凝集试验。3、血清玻片凝集试验挑取血平板上纯培养物进行O多价、O因子血清凝集，定O抗原型；有条件的分到O单价和H因子。4、生化鉴定使用各医院现有生化鉴定仪或者API20E鉴定卡等。5、菌株保存和定期上送4℃或室温保存的半固体培养基保菌菌种（穿刺接种后于36℃培养过夜即可），或30%甘油肉汤冻存管-70℃保存菌株。按照方案要求定期上送。MIU上的反应：1）尿素酶：培养基中加入了尿素（碳酸二酰胺），在细菌尿素酶的作用下，最终生成碳酸铵，呈碱性，培养基变为粉红色。2）吲哚（靛基质）：蛋白胨中的色氨酸，在细菌细胞内酶（色氨酸酶）催化下，生成吲哚和甲基吲哚。培养过夜,或48小时的MIU，加入Kovac’s试剂3-5滴，红色为阳性。10二、志贺菌检测操作程序（一）检验程序图（二）分离步骤和方法粪便标本直接接种HE平板，36℃±1℃培养18h~24h。在HE平板上挑取透明/绿色菌落3-5个分别接种克氏双糖（KIA）和MIU。注意粗糙型宋内为边缘不圆整，不透明的扁平菌落。1、初步生化鉴别：（1）下述培养物可以弃去：①在双糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；②在18h～48h发酵乳糖的培养物（注意宋内氏菌3～5天迟缓分解乳糖）；③产生H2S的培养物；④产气的培养物（注意福氏志贺菌6型产少量的气）；⑤有动力的培养物；⑥尿素酶阳性的培养物；（2）选取K／A、H2S－、M－、U－菌株，进行血清凝集试验。2、志贺氏痢疾杆菌血清学鉴定：先用志贺痢疾四种多价诊断血清作玻片凝集试验（四种多价包含：志贺痢疾1、2型，福氏1～6型和宋内I和II）。粪便标本接种HE培养基挑取透明/绿色菌落3-5个接种KIA、MIU符合K/A，产气-，H2S-，动力-，靛基质±,尿素-者进行血清玻片凝集鉴定生化鉴定、血清分型保存菌种36℃±1℃18h～24h36℃±1℃18h～24h11表1.用克氏双糖（KIA）和动力-吲哚-尿素（MIU）生化反应初步鉴别痢疾志贺菌与其他肠道菌菌种名称斜面底层H2S产气动力吲哚尿素氧化酶痢疾志贺菌(A群)SgigelladysenteriaeKA－－－D－－福氏痢疾菌（B群）SgigellaflexneriKA－－★－D－－鲍氏痢疾菌（C群）SgigellaboydiiKA－－★★－D－－宋内痢疾菌（D群）SgigellasonneiKA－－－－－－大肠菌碱性-殊异株E.coli-Alk.disparKA－－－+－－伤寒沙门菌SalmonellatyphiKA+W－+－－－甲型副伤寒沙门菌SalmonellaparatyphiAKA－／+++－－－乙型副伤寒沙门菌SalmonellaparatyphiBKA+++－－－丙型副伤寒沙门菌SalmonellaparatyphiCKA+++－－－亚利桑那菌属SalmonellaarizonaeDA+++－－－枸橼酸菌属CitrobacterDAD++－Dw－爱德华菌属EdwardsiellaeKA++++－－普通变形杆菌ProteusvulgarisKAD++／－++－奇异变形杆菌ProteusmirabilisKA+++－+－摩根变形杆菌ProteusmorganiiKA－DD－+－雷极变形杆菌ProteusrettgeriKA－D+++－小肠结肠炎耶尔森菌YersiniaenterocoliticaKA－－VD+－哈夫尼亚菌属HafniaK／(A)A