1阿莫西林胶囊的分析与检验

阿莫西林胶囊的分析与检验1阿莫西林的分析与检验1阿莫西林化学式化学名为（2S,5R,6R）-3,3-二甲基-6[(R)-（-）-2-氨基-2-(4-羟基苯基)乙酰胺基]-7-氧代-4硫杂-1-氮杂双环[3,2,0]庚烷-2-甲酸散水合物。又名羟苄西林，是氨苄西林的衍生物。2药理特性：本品为半合成广谱青霉素，对革兰氏阴性菌如淋球菌，流感杆菌，百日咳杆菌，大肠杆菌，布氏杆菌等作用强，对革兰氏阳性菌的作用与青霉素相同或稍低，其耐酸可口服但不耐酶，可产生抗药性。3性状：本品为白色或类白色粉末，味微苦，本品在水中微溶，在乙醇中几乎不溶，4采用胶囊剂型的优势4.1阿莫西林味微苦，将阿莫西林密封于胶囊内，可掩盖该药物的苦味，使其外形美观易于携带。4.2阿莫西林在一定条件的水溶液下不稳定4.2.1可发生降解，引起聚合反应4.2.2水中有磷酸盐，山梨醇，硫酸锌，二乙醇氨等存在时，则会发生分子内成环反应，生成2，5吡嗪二酮。4.2.3将阿莫西林包入胶囊中，可提高其对水分的稳定性，4.3本品阿莫西林结构中有酚羟基，易发生自动氧化，在光热及重金属催化下，氧化反应加速，将阿莫西林包入胶囊剂，可提高其对光线和空气的稳定性。5阿莫西林胶囊项下胶囊的检验，5.1外观：胶囊剂应整洁不应有粘连，变形和破损现象，并应无异臭。5.2装量差异：除另有规定外，应取供试品20粒，分别精密称重后，倾出内容物，（不得损害胶囊壳），用小刷或其它适宜用具拭净，再分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量，每粒的装量与平均的装量相比较，超出装量差异，限度的胶囊，不得多于2粒，并不得有一粒超出限度值的一倍。平均装量为0.3克以下的，装量差异限度为±10%，平均装量为，0.3g或0.3g以上的，装量差异限度为±7.5%。5.3崩解时限的检查崩解时限的检查，采用生降式崩解仪，其主要结构为一能升降的金属支架与下端镶有筛网的吊篮，并附有挡板。测定时使用胶囊剂在液体介质中，若胶囊剂漂浮在页面，可加挡板，阿莫西林胶囊剂应在30min内崩解，如有一粒不能完全崩解，则另取6粒重复试验，均应符合规定。5.4微生物限度检查阿莫西林为抗细菌口服抗生素制剂，应检查霉菌每1g中不得超过100个，因其对铜绿假单胞菌无效，还应检查铜绿假单胞菌5.4.1霉菌的检查5.4.1.1配制供试液：称取供试液10g。置0.9%无菌氯化钠溶液100ml中，用匀浆仪或其它方法进行阿莫西林胶囊的分析与检验2混匀，作为供试液。5.4.1.2预处理:可采用以下方法○1稀释法：将供试液注入较大的培养集中，使该供试液稀释至不具抑菌作用的浓度。○2离心沉淀集菌法：将规定量的供试液，离心(3000r/min)30min弃去上清液，留底部集菌液约2ml，再稀释成原规定量的的供试液，如有不溶性药渣，可离心（500r/min）5min，取全部上层液，再集菌处理。○3薄膜过滤法：取定量供试液至稀释剂100ml中，摇匀，以无菌操作加入装有直径约50mm，孔径不大于0.45um±0.02um微孔滤膜的过滤器内，减压抽干后，用稀释剂冲洗滤膜3次，每次50-100ml，取出滤膜备检。5.4.1.3利用平皿菌落计数法，将供试液涂布在玫瑰红钠培养基上，在适宜的温度下进行培养，观察肉眼可见的霉菌菌落数。5.4.2铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）的检查5.4.2.1检验程序：铜绿假单胞菌按增菌、分离、纯培养革兰氏染色镜检，及生化试验等步骤进行检查。5.4.2.2检查方法：取胆盐乳糖培养基3份，每份100ml，两份分别加入规定量的供试液，其中一份入对照菌液作为阳性对照，第3份加入与供试液等量的稀释液作为阴性对照。培养18-24h阴性对照应无菌生长，其余2份培养液划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上培养18-24h，当阳性对照的平板呈阳性菌落时，供试品的平板无菌落或无疑似菌落的生长，可判未检出铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌典型菌落呈扁平，无定形，周边扩散，表面湿润，灰白色，周围时有蓝绿色扩散。如生长菌落具有上述特征或疑似者，应挑选2-3个菌落，分别接种于营养琼脂培养斜面上，培养18-24小时。取培养物做革兰染色，并作氧化酶试验。如革兰阴性杆菌、氧气酶试验阳性，及绿脓菌素试验阳性，可判检出铜绿假单胞菌。绿脓菌素阴性的培养物，应继续做硝酸盐还原产气实验、42℃生长实验、明胶液化实验均为阳性时，应判检出铜绿假单胞菌。6阿莫西林的检验6.1比旋度：旋光度的测定由旋光仪测定，物质的旋光度与物质的分子结构有关外，还随测定时所用的浓度盛液管的长度、温度光的波长以及溶剂的性质等而改变。其与比旋光度tt][][有下列关系式=/CL式中，α为为由旋光仪测得的旋光度；λ为所用光源的波长；t为测定时的温度；c为溶液的浓度，以每毫升所含溶液的克数表示；L为成也管得长度，dm。当C和L都等于1时，则[]=。因此旋光度的定义是：在一定温度下，光的波长一定时，以1ml中含有1g溶质的溶液，放在1dm长的盛液管中测出的旋光度。本品需精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中含2mg溶液，放入旋光仪测定，依公式算出比旋度在+290°-+315°为合格。6.2鉴别试验6.2.1钠盐的焰色反应;将其在物色火焰中燃烧显黄色。6.2.2呈色反应：○1羟月亏酸铁反应：该药在稀酸中与高铁离子呈色○2茚三酮反应：该药与茚三酮显蓝紫色○3与费林试剂反应：本类药物具有类似肽键（-CONH-）结构，可产生双缩脲反应开环分解，使碱性酒石酸铜盐还原显紫色。○4变色酸硫酸呈色反应：阿莫西林加变色酸硫酸试剂混合后，于150℃加热2-3min，因分解出甲醛与变色酸缩合呈深褐色。6.2.3沉淀反应：在稀盐酸中生成白色沉淀。6.2.4本品红外光吸收图谱应与对照谱一致。6.2.5在含量测定下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应于对照片溶液主峰的保留时间一致。6.3检查6.3.1酸度：采用电位测定溶液的PH值，其中玻璃电极是作为测量溶液中氢离子活度的指示电极而饱和甘汞电及作为参比电极在实际测定中试样的PH是同已知PH的标准缓冲液相比求得的。在相同条件下，若标准缓冲溶液的PH为PH标，以该缓冲液组成原电池的电动式为E标，则有公式：PH试=PH标+（E-E标）F/2.303RT,阿莫西林胶囊的分析与检验3（R、T、F）均为常数，上式为按实际操作方式对水溶液PH的实用定义亦称为PH标度。因此用电位法以PH计测定时，先用标准缓冲溶液定位，然后可直接在PH计上读出PH试依上法取本品加水制成5mg/1ml的溶液，在50℃水浴中微温使溶解后，进行测定PH应为3.5-5.56.3.2溶液的澄清度○1方法：取本品五份，各1.0g分别加0.5mol/L盐酸溶液10mL及2mol/L氨溶液10mL溶解后，立即观察，溶液均应澄清，如显浑浊，与2号浊度标准液比较，均不得更浓。○22号浊度标准液配制:称取105℃干燥至恒重的1.00g硫酸肼，置100mL容量瓶中，加水适量使溶解，并用水稀释至刻度，摇匀，放置4-6h取此溶液与等量的10%乌洛托品溶液混合，摇匀，于25℃，避光放置24h即得。取配置标准液10.0ml水90ml，充分摇匀即得。6.3.3水分6.3.3.1取本品，照水分测定法中费休氏容量滴定法测定，含水分不得超过16%6.3.3.2容量滴定法：本法是根据碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中，能与水起定量反应的原理以测定水分。所用仪器应干燥，并能避免空气中水分的侵入，测定操作已在干燥处进行。费休氏试液的制备与标定○1制备：称取碘（置硫酸干燥器48小时以上）110g，置干燥的具塞锥形瓶中，加无水吡啶160mL，注意冷却，振摇至碘全部溶解后，加无水甲醇300mL，称定重量，将锥形瓶置水浴中冷却，在避免空气中水分侵入的条件下，通入干燥的二氧化碳至重量增加72g再加无水甲醇使成1000mL，密赛摇匀，在暗处放置24小时。本液应遮光密封，置阴凉干燥处保存。临用前应标定浓度。○2标定：用水分测定仪直接标定。获取干燥的具塞玻璃瓶，精密成入重蒸馏水约30mg除另有规定外，加无水甲醇2-5mL，在避免空气侵入的条件下，用本液滴定至溶液呈浅黄色变为棕黄色，或用永停滴定法指示终点；另作空白试验按下式计算：F=W/(A-B)式中：F为每1mL费休氏试液相当于水的重量mg；W为称取重蒸馏水的重量mg；A为滴定所消耗费休氏试液的容积ml；B为空白所消耗费休氏试液的容积ml。测定法：精密称取供试品适量（约消耗费休氏试液1-5ml）除另有规定外，溶剂为无水甲醇，可用水分测定仪直接测定，或将供试品置干燥的具塞锥形瓶中加溶剂2-5ml，在不断振摇（或搅拌）下，用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，或用永停滴定法指示终点，另作空白试验按下式计算：供试品中水分含量(%)=(A-B)F/W×100%式中：A为供试品所消耗费休氏试液的容积ml；B为空白所消耗费休氏试液的容积ml；F为每1ml费休氏试液相当于水的重量mg；W为供试品的重量mg。6.3.4溶出度：取本品至于溶出仪的吊篮中在37℃±0.5℃的恒温下，以水900毫升为溶出介质转速为每分钟100转操作，经45min时取溶液适量，滤过，精密称取续滤液适量，用溶出介质稀释成每1毫升中约含130ug的溶液，照紫外-可见分光光度法，在272nm的波长处测定吸光度；另取装量差异下的内容物，混合均匀，精密称取适量，（约相当于平均装量），按标示量加溶出介质溶解并稀释每1ml中约为130ug的溶液，滤过，取续滤液作为对照溶液，同法测定，计算每粒溶出量，限度为80%应符合规定。6.3.5有关物质：取本品的内容物适量精密称定，用流动相A溶解并制成每1ml中含2mg的溶液，滤过，取续滤液，作为公司品溶液，另取阿莫西林对照品适量，精密称定，用流动相A溶解并定量稀释至每1ml中含20ug的溶液作为对照液。照高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为0.05mol/L磷酸盐缓冲液，取0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，用2mol/L氢氧化钠溶液调节PH至（5.0）-乙腈（99：1）。流动相B为0.05mol/L磷酸盐缓冲液，（PH5.0）-乙腈(80:20)流速为1.0ml/min。检测波长为254nm，先以流动相A-流动相B（92：8）等梯度洗脱，待阿莫西林峰洗脱完毕后，立即按下表进行线性洗脱，理论板数按阿莫西林峰计算不低于2000，取对照溶液20ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%-25%，再精密称取供试品溶液和对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积1.0%，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的三倍（3。0%）供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计。时间（分钟）025404155流动相A%92009292流动相B%810010088阿莫西林胶囊的分析与检验46.4含量测定：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于阿莫西林0.125g）加流动相溶解并稀释成每1ml中约含0.5ug的溶液，滤过，取续滤液。色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶，为填充剂，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用2mol/LKOH溶液，调节PH至5.0）-乙腈（97.5：2.5）为流动相，流动相每分钟1ml，检测波长为254nm，理论塔板数按阿莫西林峰算不得少于2000测定法取本品25mg精密称定，至50mL量瓶中加流动相溶解并定量稀释至刻度，摇匀，精密称取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，另取阿莫西林对照片适量，同法测定，按外标法以峰面积计算出供试品中阿莫西林的含量。结论：抗生素是临床上一类重要药物，对其进行系统的检验，保证了临床用药的安全和有效。参考文献中华人民共和国药典2005年版二部北京：化学工业出版社2005年药物分析王炳强等北京：化学工业出版社2009年仪器分析朱明华北京：高等教育出版社2001年有机化学田厚伦北京：化学工业出版社2006年药物制剂张劲北京：化学工业出版社20