拮抗细菌控制烟草青枯、黑胫病害的应用技术研究

西南大学硕士学位论文拮抗细菌控制烟草青枯、黑胫病害的应用技术研究姓名：熊丽平申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：肖崇刚;陈国康20090501拮抗细菌控制烟草青枯、黑胫病害的应用技术研究作者：熊丽平学位授予单位：西南大学相似文献(10条)1.期刊论文商胜华.陆宁.陈庆园.王晓莉.SHANGSheng-hua.LUNing.CHENQing-yuan.WANGXiao-li大蒜提取液对烟草黑胫病和青枯病的防治效果初探-贵州农业科学2009,37(10)研究了大蒜提取液对烟草黑胫病菌(Phytophthoraparasiticavarnicotianae)和青枯病菌(Ralstoniasolanacearum)的抑制作用,并进一步测定了大蒜提取液防治烟草黑胫病的效果.结果表明,浓度大于1.5%的大蒜提取液对于烟草青枯病菌的抑菌半径与5000倍72%农用链霉素相当,浓度大于1.5%的大蒜提取液对烟草黑胫病菌的抑菌效果显著;而盆栽试验表明,只有稀释倍数小于10倍的大蒜提取液才对烟草黑胫病具有防治效果,而稀释倍数大于10倍的大蒜提取液对烟草黑胫病基本没有防治效果.2.学位论文王海波两株烟草黑胫病和青枯病拮抗菌的诱变选育2009烟草黑胫病(Phytophthoraparasitica)和烟草青枯病(Ralstoniasolanacearum)是烟草上除烟草病毒病和烟草赤星病以外发生最普遍、危害最严重的侵染性病害。在烟草病害的多种防治方法中，农药防治对烟叶的品质和安全性影响较大，而生物防治对烟叶生产的可持续发展具有较好的应用前景。芽孢杆菌(Bacillusspp．)具有显著的生防潜力，是病害生防微生物的重要组成部分。荧光假单胞杆菌(Pseudomonasfluorescent)广泛存在于土壤中，其多数株系具有防治植物病害和促进植物生长的双重功效。本研究通过对实验室保存的，对黑胫病和青枯病有良好拮抗作用的芽孢杆菌和荧光假单胞杆菌进行人工诱变、筛选出对青枯病和黑胫病拥有更好效果的拮抗菌。1．通过对实验室保存的黑胫病和青枯病拮抗菌进行筛选，初步得到两株对黑胫病和青枯病有较好温室防效的菌株：B-16-11和P-71-2，作为诱变实验的出发菌株。其中B-16-11对青枯病温室控病的相对防效为71.83％；P-71-2对黑胫病温室控病的相对防效为65.32％、对青枯病温室控病的相对防效为66.68％。2．通过对紫外线、微波诱变致死率及正变率之间的比较，选择：30W紫外灯距离20cm处紫外线诱变时间为3min为宜，且菌株的遗传稳定性较高；微波诱变时间两株拮抗菌为3min；通过LiCl致死率与浓度之间比较，选择LiCl浓度：芽孢杆菌为0.6％、荧光假单胞杆菌为0.4％。3．通过紫外线诱变，得到抑菌带宽度14mm以上或抑菌圈宽度28mm以上正向突变菌株8株，其中UV—P17的对黑胫病抑菌带宽度达到15.2mm、对青枯病抑菌圈直径达到28mm。通过温室控病测试，筛选出正向突变拮抗菌UV—P17，其对黑胫病的相对防效达到78.7％。4．通过微波诱变，得到拮抗性能显著增强的正向突变菌株12株，其中Mw—P3、Mw—P44、Mw—P97、Mw—P73的对黑胫病抑菌带宽度达到15.2mm、15.8mm、15.4mm、15.8mm；Mw—B54、Mw—P99对青枯病抑菌圈直径达到29mm。通过温室控病测试，筛选出烟草黑胫病菌拮抗菌2株，Mw—P44、Mw—P73的相对防效为76.9％和71.6％。5．通过紫外线+氯化锂诱变，得到拮抗性能显著增强的正向突变菌株13株，其中UVL—P9号菌株对青枯病菌的抑菌圈直径达到29mm，对黑胫病菌抑菌带宽度达到16mm。通过温室控病测试，未筛选出正向突变菌株。6．通过微波+氯化锂诱变，得到拮抗性能显著增强的正向突变菌株16株，其中MwL—B108和MwL—B73菌株对青枯病菌的抑制效果最好，抑菌圈直径达到30mm；MwL—P26对青枯病菌和黑胫病菌的平板拮抗效果都有提高，对青枯病菌的抑菌圈直径达到29mm，对黑胫病菌抑菌带宽度达到15.3mm。通过温室控病测试，筛选出正向突变菌株5株，其中MwL—P77对黑胫病相对防效为84％、MwL—B24对青枯病相对防效达到82.2％、MwL—P26和MwL—P53对烟草青枯病和黑胫病的相对防效都在68％以上。7．通过传代实验表明，通过微波和氯化锂复合诱变筛选出的拮抗菌在温室控病和遗传稳定性方面均有良好表现，MwL—P53在传代14次后温室平板拮抗对黑胫病菌抑菌带宽度为13.2mm、传代10次后青枯病菌的抑菌圈直径为28mm，拮抗性高于对照菌株。3.期刊论文龙丽琴.桑维钧.刁朝强.杨茂发.罗正友.饶应勇.陈森玉.LONGLi-qin.SANGWei-jun.DIAOChao-qiang.YANGMao-fa.LUOZhen-you.RAOYin-yong.CHENSen-yu赫章县烟草根茎病害发生情况调查初报-贵州农业科学2008,36(4)对赫章县烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病的发生情况进行了调查,结果表明:3种病害在赫章县轻度发生,大多数烟草品种发病不严重,但零星的发病也应引起重视,加强监测和防治,以免病害扩展造成严重危害.4.学位论文李清飞具有生物农药功能的有机肥生产工艺的研究2006烟草青枯病和黑胫病是我国烟草两种主要的土传病害之一。目前生产上主要采取综合防治措施，包括栽培抗病品种、化学防治和生物防治等，但由于都存在着各自的局限性而无法从根本上进行防治。生态防治将生态学原理应用于病害的防治，是一种病害防治的新思维、新途径。本研究采用从原位土壤的细菌、放线菌和真菌中筛选出对烟草青枯病、黑胫病等具有生物防治功能的高效拮抗菌株，并将其接种于农业固体废弃物中，在将其制作成有机肥过程中拮抗菌大量增生。合理施用有机肥或将有机肥与生物防治或抗性菌应用相结合，将可以起到改善和修复土壤生态环境，提高土壤和烟株自身抗御病害的能力，减少肥料和化学农药使用，改善烟叶品质和实现烟叶生产的可持续发展。本文对烟草青枯病和黑胫病的拮抗菌进行筛选，获得6株防治青枯病和2株防治黑胫病潜能较大的拮抗菌，并以拮抗菌中抑制青枯病效果较好的菌株T5为考察目标，研究了其发酵条件和具有抑制烟草青枯病功能的烟草专用肥生产工艺，包括适宜的接种时期、接种量和大量繁殖所需的时间等因素研究；拮抗黑胫病的机理。研究结果如下：1、从福建烟田的病株中分离出烟草青枯病病原菌，从其原位土壤中经过分离纯化得到40种土壤菌株，经过平板拮抗法筛选后得到对青枯病菌有明显抑制作用的5株土壤细菌和1株真菌，分别命名为T1、T2、T3、T4、T5和T6，其中菌株T5的拮抗带最大，菌落拮抗带达10．2～21．4mm。2、烟草青枯病拮抗细菌发酵条件的研究表明，抑制效果较好的拮抗菌T5在20～40℃范围内均能生长，最适宜的生长温度为35'(2；4～24h为对数生长期；pH值为5．0～9．0。进行该菌的液体培养与扩增时，在相同的接种量下，250ml三角瓶的最佳装瓶量为120mi。通过正交试验法获较佳的液体培养基为蔗糖15g/L、牛粪堆肥200g/L、蛋白胨4g/L、牛肉膏1．5g/L。3、以牛粪为原料生产抑制烟草青枯病的有机肥研究，选用了抑制烟草青枯病效果较好的T5菌株作为生产用接种体，通过控制堆肥的温度和接种时间来生产有机肥。在80'C的水浴中连续加热堆肥2d将堆肥中的土著细菌降低到5．310gloCFU／g(干基)，冷却后立即接种，40~0下培养3d，得到约1210gloCFU／gf干基)的高浓度堆肥产品。大阳试验表明：该有机肥有一定的防病作用，青枯病防治率在3．5％。4、从河南省罗山县和舞阳县烟区采集土壤样品中，经分离纯化获得6个真菌菌株，采用平板对峙法发现其中2株真菌对烟草黑胫病菌(Phytophthoranicotianae)有明显的抑制作用，分别将其命名Ty-1和Ty-3。Ty-1菌主要拮抗机理为营养竞争和寄生作用而Ty-3菌拮抗机理主要是拮抗作用、寄生作用和营养竞争作用。5.学位论文王丽珍烟草根围土壤拮抗细菌的筛选及控病研究2007烟草是叶用经济作物，对烟叶的品质和安全性要求较高。根据烟草病害发生的普遍性及所造成的经济损失来衡量，烟草赤星病(Alternariaalternata)、烟草黑胫病(Phytophthoraparasitica)和烟草青枯病(Ralstoniasolanacearum)是烟草上除烟草病毒病以外发生最普遍、危害最严重的侵染性病害。在烟草病害的多种防治方法中，生物防治对烟叶生产的可持续发展具有较好的应用前景。芽孢杆菌(Bacillusspp.)具有显著的生防潜力，是病害生防微生物的重要组成部分。荧光假单胞杆菌(Pseudomonasfluorescent)广泛存在于土壤中，其多数株系具有防治植物病害和促进植物生长的双重功效。本研究从重庆不同地县烟区的烟草根围土壤中分别筛选对上述三种病害有生防潜力的拮抗菌，并对其进行初步鉴定。1、从重庆石柱、黔江、奉节等地县烟区共采集到烟草根围土样85份。采用土壤悬浮液高温处理分离法获得了芽孢菌499株，采用在KMB培养基上土壤稀释分离法获得了荧光菌253株，两种分离方法共获得细菌752株。2、对烟草赤星病菌和烟草黑胫病菌采用对峙培养法、对烟草青枯病菌采用平板喷雾法初筛到有拮抗活性的菌株348个，占分离株总数的46.3％。复筛结果表明：对赤星菌抑菌带宽在8.0～12.0mm的拮抗菌株有29株，其中芽孢菌12株，荧光菌17株；对黑胫菌抑菌带宽在9.0～14.0mm的拮抗菌株有26株，其中芽孢菌2株，荧光菌24株；对青枯菌抑菌圈直径在30.0～42.0mm的拮抗菌株有31株，其中芽孢菌9株，荧光菌22株。3、温室控病结果表明：对烟草赤星病的防治效果为31.31％～87.51％，其中菌株P-72-10的防治效果最好，防效在80.00％以上的菌株有4个。对烟草黑胫病的防治效果为30.44％～73.91％，其中菌株P-71-2防治效果最好，防效在70.00％以上的菌株有2个；对烟草青枯病的防治效果为46.00％～86.00％，其中菌株P-76-2的防治效果最好，防效在80.00％以上的菌株有5个。4、在平板抑菌和温室控病的基础上，结合拮抗菌生长的情况及菌株间没有拮抗性的要求，筛选出芽孢菌B-43-6和荧光菌P-72-10组合，二者的发酵菌悬液按不同比例混合抑制烟草赤星病(菌)，平板拮抗和温室防效的最佳比例均是4∶1，平板抑菌带宽为7.6mm，温室防效为91.83％；芽孢菌B-57-4和荧光菌P-70-3组合，二者的发酵菌悬液按不同比例混合抑制烟草青枯病(菌)，平板拮抗和温室防效的最佳比例均是3∶1，平板抑菌带宽为5.1mm，温室防效为92.0％。5、对平板抑菌和温室控病筛选出的10株菌进行抗菌谱测定，结果表明：这10株菌具有较广的抗菌谱，特别是对玉米小斑病菌、小麦赤霉病菌和烟草根黑腐病菌等具有较强的抑制作用。6、对抗菌谱测定中的10株菌进行了分类地位的初步鉴定，通过形态观察和生理生化测定，初步认为：5株荧光菌P-3-1、P-69-6、P-70-3、P-71-2、P-72-10均为荧光假单胞杆菌；5株芽孢菌B-16-4、B-43-6、B-46-2、B-57-4、B-61-10中，B-16-4、B-61-10为枯草芽孢杆菌，B-43-6、B-46-2、B-57-4为巨大芽孢杆菌。6.期刊论文顾金刚.方敦煌.李天飞.刘杏忠两株荧光假单胞杆菌菌株对烟草黑胫病病原菌的抑制作用-中国生物防治2004,20(1)烟草黑胫病是一种典型的土传病害,在我国,除个别较寒冷的地区,各主要产烟省均有不同程度的发生.其中安徽、河南、山东为历史上的重病区;云南、贵州、福建、广东、湖南、四川等烟区发生也相当普遍,且多与烟草青枯病混合发生,危害更为严重.7.学位论文滕跃辉长沙市烟草病害的调查、鉴定与烟草主要病害药剂防治试验2007烟草是我国重要的经济作物，但每年因烟草病害都会造成不同程度的损失。我国为害烟草较严重病害有烟草花叶