01提取工艺川桐皮中总黄酮的提取工艺研究

金华职业技术学院JINHUACOLLEGEOFPROFESSIONANDTECHNOLOGY毕业教学环节成果(2012届)题目川桐皮中总黄酮的提取工艺研究学院制药与材料工程学院专业生物制药技术班级制药093学号200931100380346姓名罗超超指导教师郑柏勤2012年5月22日金华职业技术学院毕业教学环节成果目录摘要.............................................................................................................错误!未定义书签。1材料与设备.............................................................................................错误!未定义书签。1.1材料..............................................................................................错误!未定义书签。1.1.1实验药材....................................................................................错误!未定义书签。1.1.2化学试剂...................................................................................错误!未定义书签。1.2仪器与设备..................................................................................错误!未定义书签。2方法与结果.............................................................................................错误!未定义书签。2.1总黄酮含量的测定[10]..................................................................错误!未定义书签。2.1.1标准曲线的制备.......................................................................错误!未定义书签。2.1.2样品液制备与样品总黄酮含量的测定..................................错误!未定义书签。2.2提取工艺研究.............................................................................错误!未定义书签。2.2.1提取溶剂对提取率的影响.......................................................错误!未定义书签。2.2.2粉碎度对提取率的影响...........................................................错误!未定义书签。2.2.3乙醇浓度对提取率的影响.......................................................错误!未定义书签。2.2.4浸提时间对提取率的影响.......................................................错误!未定义书签。2.2.5浸提温度对提取率的影响.......................................................错误!未定义书签。2.2.6液料比对川桐皮黄酮类化合物提取的影响...........................错误!未定义书签。2.2.7正交试验...................................................................................................................83结果与讨论..............................................................................................错误!未定义书签。参考文献.....................................................................................................错误!未定义书签。谢辞.............................................................................................................错误!未定义书签。-1-川桐皮中总黄酮的提取工艺研究制药与材料工程学院生物制药技术专业罗超超摘要：为充分利用川桐皮资源，对川桐皮中总黄酮的提取工艺进行研究，对乙醇浓度、温度、时间、料液比分别进行了单因素试验和正交试验。结果表明，乙醇提取法的最佳工艺条件为：提取温度70℃，乙醇浓度70％，提取时间120min，料液比1:25(g/mL)，该工艺条件下提取总黄酮含量为54.12mg/g。关键词：川桐皮正交试验总黄酮提取StudyonExtractionTechnologyofTotalFlavonoidsfromCortexKalopanacisLUOChao-chao(MajorofBiopharmaceuticalTechnology,SchoolofPharmaceuticalScienceandMaterialsEngineering)Abstract：TomakefulluseofCortexKalopanacisresources,theextractiontechnologyoftotalflavonoidsfromCortexKalopanaciswasstudiedbysinglefactortestsandorthogonalexperimentdesignmethod.TheoptimizedextractiontechnologywasthattheCortexKalopanaciswereextractedby70%ethanolat70℃withamaterial-liquidratioof1:25(g/mL)for120min.Withthistechnologicalconditions,theconcentration54.12mg/gofthetotalflavonoidsextractionwasobtained.Keywords：CortexKalopanacisOrthogonalexperimentTotalflavonoidsExtraction川桐皮为五加科植物刺楸Kalopanaxsepteml-obus(Thunb.)Koidz..或毛刺楸K.septemlobusvar.margnificus(Zabel)Hand-Mazz.的干燥树皮。刺楸为落叶乔木，枝有粗刺。生于山地疏林中。产于安徽、湖北、湖南、广西。全年可采，以春季为好，晒干[1]。依照现行的《四川省中药材标准》（1987年版）收载了川桐皮的性状、鉴别、炮制、性味、功能与主治、用法用量和贮藏的内容。性状为质脆，断面纤维性，略呈层片状。性味为气微，味微辛，略有麻舌感。功能与主治为具有祛风湿，通络，止痛作用。用于类风湿性关节炎、腰膝疼痛、外用跌打损伤[2]。树皮含黄-2-酮、香豆素、树酯、精油及少量生物碱;根皮含刺楸毒甙（kalotoxin）、刺楸皂甙[3]。生物总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物。黄酮类化合物是指具有C6-C3-C6基本结构的天然产物，大部分是色原酮的衍生物，根据两端苯环与中间三碳的连接方式、位置、直连或环及其氧化水平，衍生而成的一大类化合物。黄酮类化合物具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、保肝、止咳祛痰、抗氧化和雌激素样的作用[4-8]。黄酮类化合物广泛存在于植物中，主要有黄酮和黄酮醇、二氢黄酮和二氢黄酮醇、异黄酮和二氢异黄酮、查耳酮和二氢查耳酮类、橙酮类、花色素和黄烷醇类、其他黄酮类七大类[9]。由于人工合成的总黄酮存在着副作用大及价格昂贵等多方面缺陷，人们逐渐把注意力转向从植物中提取总黄酮，从天然物质中提取的总黄酮具有较好的药理作用，且毒副作用小。总黄酮的主要提取方法是有机溶剂提取法、超声波辅助提取法、微波提取法、超临界CO2萃取法、酶浸渍萃取法、超高压辅助提取法等等。比较各提取方法的优缺点和考虑到当前的实验室条件，本研究采用有机溶剂提取法。目前对于川桐皮的有关研究国内报导的比较少。鉴于此，笔者探讨川桐皮中的总黄酮提取工艺参数，旨在寻找一种提高川桐皮中总黄酮提取量的方法，也为全面开发利用川桐皮资源提供科学依据。1材料与设备1.1材料1.1.1实验药材川桐皮采自四川省成都市山区，经成都中医药大学中药鉴定和药用植物教研室李敏教授鉴定，为五加科植物刺楸KaIopanaxseptemIobus(Thunb．)Koidz．或毛刺楸尼septem-lobusvat．margni，icus(Zabel)Hand-Mazz．的干燥树皮。1.1.2化学试剂乙醇甲醇石油醚（30℃~60℃）乙醚：广东汕头市西陇化工厂；乙酸乙酯：天津市北方化玻采购销售中心；丙酮：成都市联合化工试剂研究所；浓盐酸：德阳市孝泉师范化学试剂厂；氢氧化钠：重庆北碚精细化工厂；三氯化铝亚硝酸-3-钠：天津市科密化学试剂开发中心；硝酸铝：天津市福晨化学试剂厂；以上试剂均为分析纯。标准芦丁（98.5％）：成都超人植化有限责任公司。1.2仪器与设备DFT一200型手提式高速中药粉碎机：温岭市大德中药机械有限公司；RE-52AA旋转蒸发器：上海亚荣生华仪器有限公司；SHB-B95型循环水式多用真空泵：郑州市长城科工贸有限公司；HH-S4数显恒温水浴锅：金坛医疗器械厂；UV-8紫外可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；BPl21S电子天平：德国赛多利斯股份公司。2方法与结果2.1总黄酮含量的测定[10]2.1.1标准曲线的制备准确称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥（60℃，0.09MPa）至恒重的芦丁标准品0.077g，用60%乙醇溶解，定容至250mL，摇匀，得浓度为0.2926mg/mL的标准液，放置于低温暗箱内，及时检测分别吸取标准应用液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL于25mL容量瓶中，用60%乙醇添至10mL，加入5%亚硝酸钠溶液1.0mL，摇匀，放置6min，再加入10%硝酸铝溶液1.0mL，6min后加入4%NaOH10mL，混匀，再用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min后，在波长510nm处测定吸光度，绘制标准曲线，见图1。y=0.480x-0.018R2=0.99900.10.20.30.40.50.60.70.80.900.511.52芦丁浓度/(mg/mL)吸光度A图1芦丁与吸光度的线性关系-4-2.1.2样品液制备与样品总黄酮含量的测定准确称取1.0g川桐皮粉，放入索氏抽提器中，用40mL95%的乙醇，回流浸提至回流液呈无色,用乙醇洗涤接收瓶2次~3次。合并提取液与洗涤液，定容为适当浓度的样品液30mL。准确吸取1.0mL样品液置于25mL容量瓶中，用60%乙醇添至10mL，其它操作同2.1.1，测得吸光度A。样品的总黄酮浓度C=2.079×A+0.033样品的总黄酮含量=C×V×25/M式中：M为样品质量，g；V为定容容积，mL；C为样品