4-洁净区微生物监测与控制方案

洁净区微生物监测与控制方案[e-mail]柴海毅Topic主题：1.MicrobialMonitoringSolution环境监测解决方案2.SelectionandQualitycontrolofthemedium培养基的选择及质量控制-50100200D-2550100C55510B1111AGlovePrint5fingers手套（5个手指）CFU/gloveContactPlates(ø55mm)55mm接触皿CFU/PlatesSettlePlates(ø90mm)90mm沉降皿CFU/4hAir-monitoring空气取样CFU/m3Class级别Recommendedlimitsformicrobialcontamination建议的微生物污染限度环境微生物监测法规标准监测过程中的风险与控制：针对不同洁净区选择合适的测试方法，避免假阴性。如果设备采样头需要消毒，应避免假阳、阴性风险。提供足够的空气交换，减少或消除人员干预。培养基选择及质量控制（TSA、SDA）。按SOP定期进行环境监测。监测方法怎样选择？C/D级浮游菌采样-撞击法优势劣势使用简单使用方便:采样时微生物撞击到培养基上，采样后可直接培养培养皿可能会失水无法100%截留,假阴性风险影响层流环境采样头消毒风险最终数据需要校正采样头开多少个孔才能100%截留？一次性采样头？A/B级浮游菌采样–凝胶膜过滤法采样时为滤膜特性,培养时滤膜融化到培养基中消失材质：水溶性凝胶原理：深层过滤截留率:细菌：99.9995%forBacillussubtilis病毒：99.94%forT3coliphagesA/B级浮游菌采样–凝胶膜过滤法优势使用凝胶膜可以有效保护微生物“绝对”截留不论微生物数量多或少，均可达到很好的捕获效果可连续采样，持续动态监测非常适合在A\B级洁净区、隔离器中使用，降低假阴性风险可配合使用各种不同的培养基“一天一片”JustconnecttheBACTairTMculturemediaplatetotheAirPortsampler1Startsampling23456C/D级环境监测应用案例：A/B级环境监测应用案例：Topic主题：1.MicrobialMonitoringSolution环境监测解决方案2.SelectionandQualitycontrolofthemedium培养基的选择及质量控制培养基1：Ageneralmicrobiologicalgrowthmediumsuchassoybean–caseindigestmedium(SCDM)issuitableforenvironmentalmonitoringinmostcasesbecauseitsupportsthegrowthofawiderangeofbacteria,yeast,andmolds.一般的微生物培养基如胰酪大豆胨琼脂培养基（SCDM）因为能使细菌、酵母菌和霉菌生长，适合大多数条件下的环境监测。培养基2：Thismediumcanbesupplementedwithadditivestoovercomeortominimizetheeffectsofsanitizingagentsorofantibiotics.可以在这些培养基中加入添加剂使之克服或减少消毒剂或抗生素的影响。培养基3：Manufacturersshouldconsiderthespecificdetectionofyeastsandmolds.Ifnecessary,generalmycologicalmediasuchasSabouraud’s,modifiedSabouraud’s,orinhibitorymoldagarcanbeused.生产者应该关注霉菌和酵母菌的检测，如有必要，可以使用沙氏、改良沙氏或含抑制性的霉菌琼脂等普通的真菌培养基。2015年版《中国药典》9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则……当监测结果有疑似真菌或考虑到季节因素影响时，可增加沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。培养基4：Ingeneral,monitoringforstrictanaerobesisnotperformed,becausetheseorganismsareunlikelytosurviveinambientair.通常，不需要监测专性厌氧菌，因为其在环境空气中不可能存活。培养条件的选择1：Typically,incubationtemperaturesintherangesofapproximately20°–35°havebeenusedwithanincubationtimeofnotlessthan72hours.forgeneralgrowthmediasuchasSCDM.Butbymeansabsolute.对通用培养基，如SCDM，通常的培养温度在20-35℃之间，时间不少于72小时。但并不绝对。培养条件的选择2：Intheabsenceofconfirmatoryevidence,microbiologistsmayincubateasingleplateatbothalowandahighertemperature.IncubatingatthelowertemperaturefirstmaycompromisetherecoveryofGram-positivecoccithatareimportantbecausetheyareoftenassociatedwithhumans.如果没有足够的保证，一个培养皿可以在较低或较高的温度下都进行培养。首先在低温下进行培养，确保比较重要的与人类密切相关的革兰氏阳性球菌的生长。培养条件的选择3：Longerincubationmayrecoverknowncontaminantsgrowingslow.较长的培养时间可能检出生长缓慢的污染微生物。培养基质量控制1：Becausedifferentmediatypesmayhavedifferentpreparationrequirements(e.g.,heating,additives,andpHadjustment),itisimportanttofollowtheseinstructionstoensurepreparationofacceptablemediaquality.由于不同的培养基类型可能有不同的配制要求（例如，加热、添加剂，和pH值调节），重要的一点是需要遵守其提供的配制指示以保证配制出的培养基质量。培养基质量控制2：Theabilityofanymediausedinenvironmentalmonitoring,includingthoseselectedtorecoverspecifictypesoforganisms,mustbeevaluatedfortheirabilitytosupportgrowth,asindicatedin71..每种用于环境监测的培养基，包括用于回收特定类型微生物的培养基必须进行促生长能力的评价（无菌检查71）培养基质量控制3：Ofparticularconcernistheuseofasepticallypreparedsamplingmedia..特别关注的是使用无菌制备的培养基。培养基质量控制4：Whereverpossible,samplingmediaandtheirwrappingsshouldbeterminallysterilizedbymoistheat,radiation,orothersuitablemeans.Ifasepticallypreparedmediamustbeused,analystsmustcarryoutpre-incubationandvisualinspectionofallsamplingmediabeforeintroductionintothecleanroom.只要有可能，应通过湿热，辐射或其他合适的方法对培养基及其包装材料进行最终灭菌。如果必须使用制备的培养基，分析员必须在带入洁净室之前对所有采样培养基进行预培养和目检。附录:9203“药品微生物实验室质量管理指导原则”……用于环境监测的培养基须特别防护，最好要双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%的预培养以防止外来的污染物带到环境中以避免出现假阳性的结果。《中国药典》2015年版四部USP1117[NOTE—Failedgrowth-promotiontestresultsmaynotbeusedtonegatepositivetestresults.]注：促生长试验失败可能会导致阳性检测为阴性。USP361117Beforeprolongedstorage,agarplatesshouldbeplacedintoasealedpackageorcontainertoretardmoistureloss.如果要延长存贮时间，培养基碟应放在密封的包装或容器中以减少水分损失。“中国药典”2015年版四部9203微生物实验室质量管理指导原则……如置冰箱保存，一般不超过1周，且应密闭包装，若延长保存期限，保存期需经验证确定。培养基的质量控制3：pH值ThepHofeachbatchofmediumshouldbeconfirmedafterithascooledtoroomtemperature(20–25)byasepticallywithdrawingasamplefortesting.RefrigeratedpurchasedmediashouldbeallowedtowarmuptoambientroomtemperatureifitistobecheckedforpHconfirmation.AflatpHprobeisrecommendedforagarsurfaces,每个批次培养基在冷却到室温后（20-25℃），应采用无菌方式取样检测pH值；冷冻的采购来的培养基应在升温至室温后检测pH值。建议对培养基平面采用扁平的pH探头，影响培养基的因素1：theperformanceofmediapreparedinalaboratoryorbyamanufacturerishighlydependentonpreparationandstorageconditions.实验室制备的或者生产商制备的培养基的性能很大程度度上取决于培养条件和存贮条件。影响培养基的因素2：Thelengthofshelflifeofabatchofmediawilldependonthestabilityoftheingredientsandformulationunderspecifiedconditions,aswellasthetypeofcontainerandclosure.一个批次培养基有效期取决于配料成份的稳定性、在特定条件下的配方，以及容器和密封的形式。影响培养基的因素3：Inaddition,regularcleaningandsanitizationofequipmentsuchasincubators,refrigerators,andwaterbathsshouldbeperformedtominimizethepotentialforcontaminationinthelaboratory.Doorsealsofincubatorsandrefrigeratorsshouldbecleanedandcheckedforstateofrepair.此外，对设备，如培养箱、冰箱和水浴锅，进行定期清洁和消毒是需要的，这样可以最大程度降低实验室中污染的风险。培养箱和冰