培养基的认识及选择

培养基的认识及选择培养基的成分•营养物质：水、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、无机盐、鸡蛋、动物血清、生长因子（Vit、aa、嘌呤、嘧啶等）。氮源氮源和碳源无糖碳源和能源氯化钠：维持酶的活性、调节菌体内外渗透压磷酸盐：缓冲作用培养基的成分•凝固物质：最常用的为琼脂(agar)，它是从石花菜中提出来的一种半乳糖胶，100℃溶解，40℃凝固，可利用琼脂来改变培养基的物理性状(固体或半固体)，它是理想的固体培养基的赋形剂，其本身不被细菌分解利用，也无营养作用。培养基的成分•抑菌剂和指示剂：不是细菌生长繁殖的必需物质，是制备细菌的选择、鉴别培养基和判断结果的需要。常用的指示剂有：酚红、中性红、甲基红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国兰等酸碱指示剂，美兰为常用的氧化还原指示剂。常用的抑菌剂有：胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚硒酸钠及一些染料和某些抗生素等。培养基的分类液体培养基：牛肉汤(牛肉浸液+1%蛋白胨+0.5%NaClpH7.4)半固体培养基：液体培养基+0.2~0.5%agar固体培养基：液体营养物+2%agar按物理性状培养基的分类基础培养基：是其他培养基的基础，如普通肉汤、普通琼脂平板、斜面、高层营养培养基：BAP、罗—琴培养基、吕氏血清斜面选择培养基：SS平板、BS平板、Mac平板等鉴别培养基：糖发酵管、MIU、KIA、TSI等特殊培养基：厌氧培养基、高渗培养基等按用途常用的培养基•血琼脂平板•巧克力平板•淋球菌平板•念珠菌显色平板•MAC平板•SS平板•EMB平板•TCBS平板•M-H平板•M-H血平板•转运培养基血琼脂平板•适用于各类细菌生长•观察细菌菌落形态•判断溶血情况α-溶血环：菌落周围呈绿色，红细胞不完全溶解β-溶血环：菌落周围的培养基内红细胞完全被破坏γ溶血：不溶血巧克力平板•主要用于嗜血杆菌的分离：含有Ⅴ、Ⅹ因子•添加万古霉素抑制革兰阳性菌，但有时α-溶血的链球菌会形成草绿色溶血环•大多数革兰阴性菌都会生长淋球菌平板•用于分离淋病奈瑟菌•加入万古霉素和多粘菌素B溶液•抑制革兰阳性菌和真菌生长念珠菌显色平板•分离酵母样真菌•鉴别培养基：不同的真菌显示出不同颜色的菌落MAC平板•选择性培养基：供肠道致病菌分离培养非发酵菌鉴别•抑制剂——胆盐：抑制革兰阳性菌•指示剂——中性红：区分分解乳糖和不分解乳糖的细菌•肠道致病菌不分解乳糖，非致病菌分解乳糖SS平板•强选择性培养基：用于志贺菌和沙门菌的分离•抑制剂——枸橼酸钠、胆盐、硫代硫酸钠协同作用与煌绿共同抑制肠道非病原菌及大部分大肠埃希菌。其中胆盐还能抑制革兰阳性菌。•指示剂——中性红•沙门菌菌落特点：无色半透明，产H2S与培养基内三价铁离子反应呈黑色中心。•志贺菌菌落特点：无色不透明或透明，边缘整齐EMB平板•弱选择性培养基•抑制革兰阳性菌•伊红和美蓝两种染料一酸一碱作为指示剂•细菌分解乳糖时产酸，使伊红美蓝结合成紫红色化合物，有时呈金属光泽•不分解乳糖的细菌菌落为无色或灰白色•有的细菌产碱过多而出现蓝色菌落TCBS平板硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基•霍乱弧菌和副溶血弧菌分离培养•碱性琼脂•胆酸钠、牛胆粉、硫代硫酸钠和柠檬酸钠及较高的pH可抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群•氯化钠可刺激弧菌的生长•以麝香草酚兰和溴麝香草酚兰为指示剂•霍乱弧菌分解蔗糖产酸，菌落呈黄色半透明，圆形扁平，带有黏性不易挑起•副溶血弧菌不分解蔗糖，菌落呈蓝绿色半透明，大而扁平，带有黏性M-H平板水解酪蛋白琼脂•用于细菌药敏试验琼脂扩散法（K-B法）•胸腺嘧啶核苷酸含量低，不干扰磺胺类药物测定•控制钙、镁离子浓度，不干扰氨基糖苷类药物测定M-H血平板•M-H琼脂中加入5%脱纤维羊血•用于链球菌药敏试验转运培养基•阿米斯转运培养基：支原体培养•拭子•Cary-Blair运送培养基：弯曲菌、沙门菌、志贺菌的标本采集和保存•缓冲甘油盐水保存液：粪便标本保存•改良Cary-Blair运送培养基：厌氧菌标本培养基的选择•大部分细菌培养标本：血平板、巧克力平板•大便培养标本：EMB、SS、MAC、TCBS•酵母样真菌培养标本：念珠菌显色平板•淋球菌培养标本：淋球菌平板•中段尿标本：血平板培养基接种划线•方法：平板分区划线沾取标本均匀涂布于平板培养基边缘一小部分（为一区）；然后将接种环火焰灭菌，待冷后只通过一区2～3次后连续划线（为二区）；依次可供划线3～5区，火焰灭菌接种环。•目的：分离出单个菌落培养基接种划线•方法：穿刺接种用经灭菌后的接种针挑取菌落或培养物，由培养基中央刺到距管底约0．3～0．5cm处，然后沿穿刺线退出接种针。•目的：用于微量生化管接种培养基接种划线•方法：液体接种用左手持培养基与菌种管，右手持接种环，其小指与无名指及无名指与中指之间各拔取并夹持一个棉塞，火焰灭菌试管口，以灭菌冷却后的接种环沾取菌种，倾斜液体培养基管，先在管壁与液面交界处研磨（研磨处以试管直立后液体能淹没接种物为主），然后再在液体中摆动2～3次接种环，塞好棉塞后轻轻混合即可。•目的：细菌增菌及保存培养基接种划线•方法：涂布接种用无菌棉签浸满菌液，在试管壁上挤去少量菌液后均匀涂布于平板上。•目的：用于纸片扩散法药敏试验、院感监测培养基接种划线•斜面接种•倾注平板•定量接种