1 植物生理学实验操作

植物生理学实验操作指南植物生理实验室2011，3实验一淀粉酶的提取及作用原理：1.淀粉淀粉酶水解蓝色糊精红色糊精无色糊精麦芽糖葡萄糖2.葡萄糖+斐林试剂Cu2O↓(砖红色）植物材料与实验器具：植物材料：萌动的小麦实验器具：试管；玻棒；量筒；研钵；漏斗；电炉；水浴锅试剂：2%淀粉溶液；稀I-KI溶液（原液稀释5倍）；斐林试剂操作步骤：1.取10粒萌动的小麦种子放入研钵中，用量筒取10ml蒸馏水作为淀粉酶提取液总量（包括研钵清洗、种子研磨），分三次加入，将小麦研成浆状，用脱脂棉过滤于试管中,摇匀。滤液静置5-10min,上清液为淀粉酶的提取液。操作步骤：2.取2只刻度试管做标记A管、B管A管：2ml2%淀粉液+2ml蒸馏水38℃B管：2ml2%淀粉液+2ml淀粉酶提取液20min加I-KI2~3滴观察并比较两管颜色变化。3.B管+3ml斐林试剂沸水浴2~5min观察颜色变化作业：1.记录观察结果并作必要的分析。操作步骤：实验二植物组织水势的测定原理：根据渗透作用的原理，用小液滴法测得蔗糖溶液与植物组织中之间的等渗浓度，根据公式ΨW(细胞水势)=Ψs=—CRT求得溶液的水势，从而得知植物组织的水势。材料与实验器具：植物材料：女贞叶片实验器具：细滴管；试管及指形管；烧杯；镊子、剪刀；移液管；标签纸试剂：1mol/L蔗糖溶液；甲烯蓝溶液操作步骤：1.用短滴管吸取1M蔗糖溶液取0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml分别放入10ml刻度试管中，加蒸馏水至10ml，盖上塞子上下倒转混匀，配成0.05M、0.1M、0.2M、0.3M、0.4M的糖液。操作步骤：2.用移液管从浓度各试管中吸出1ml注入对应的指形管内，各管均加塞，并贴上标签。操作步骤：3.将女贞叶片在叠在一起，沿中脉两边用钻孔器打取10片小圆片，分别放入小指形管内，放置20min(期间摇动2~3次）后，加甲烯蓝2滴摇匀。操作步骤：4.用长滴管吸取着色溶液放入原相应的蔗糖溶液中，慢慢放出一滴蓝色溶液，在白色纸片上观察小液滴升降情况，并作记录。作业：1.记录小液流在试管内的移动方向溶液浓（mol/L）0.050.10.20.30.4小液流方向解释作业：2.按下列公式计算组织的水势：ΨW(细胞水势)=Ψs=—CRT式中：Ψs——溶液的渗透势，以MPa为单位。R——气体常数，为0.008314MPa·L/（mol·K）。T——绝对温度，即273+t℃,单位为K。C——溶液的摩尔浓度，以mol/L为单位。思考题：1.用小液流法测定植物组织水势时，为什么应强调所用试管、毛吸管应保持干燥2.打取小圆片并投入试管中时动作应迅速，加入甲烯蓝不能太多？实验三叶绿素含量的测定原理：根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。叶绿素在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量。材料与实验器具：植物材料：女贞、海桐叶片实验器具：分光光度计；电子天平；研钵；试管；小漏斗；滤纸；吸水纸；移液管；量筒；剪刀试剂：95％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉操作步骤：1.称取剪碎的新鲜样品0.1g左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3～5ml95％乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。静置3～5min。操作步骤：2.取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。操作步骤：3.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10ml，摇匀。操作步骤：4.把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。操作步骤：5.计算公式：叶绿素的含量（mg/g）=[(O.D652/34.5)×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。Ca=13.95A663－6.88A645；Cb=24.96A645－7.32A663作业：1.计算并比较两种植物叶绿素含量。思考题：为什么提取叶绿素时干材料一定要用80％的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？实验六过氧化氢酶活力测定原理：过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化H2O2分解为水和O2，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶的活力大小。用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。KMnO4与H2O2反应方程式如下：5H2O2+2KMnO4+3H2SO4→K2SO4+MnSO4+8H2O+5O2材料与实验器具：植物材料：海桐茎、叶片等实验器材：研钵；电炉；水浴锅；酸式滴定管；量筒；锥形瓶；漏斗；试管；移液管试剂：0.1mol/L高锰酸钾标准液；1%H2O2；10%H2SO4；CaCO3粉操作步骤：1.酶液提取：取叶片0.5g（或茎）加入少量蒸馏水，加CaCO3粉及石英砂少许，研磨成匀浆，再加蒸馏水至总量25ml，在室温下浸提10分钟，不时摇动，用脱脂棉过滤于50ml锥形瓶中,静置上清液即为过氧化氢酶的粗提液。操作步骤：2.吸取5ml酶提取液放入一试管中，置沸水中加热5分钟，使酶失活。3.取50ml三角瓶2个（1个测定,另1个为对照）失活酶液(对照)CAT酶液+20ml蒸馏水+1%1mlH2O2摇匀40度水浴反应（10min）+2ml10%H2SO4终止反应0.1mol/LKMnO4滴定操作步骤：4.滴定终点以瓶中溶液保持浅红色20秒不消失为准,记录所用的高锰酸钾的量。5.酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示：过氧化氢酶活性（H2O2mg/g.min）＝（A－B）×VT/(W×VS×1.7×t)操作步骤：式中：A对照KMnO4滴定ml数；B酶反应后KMnO4滴定ml数；VT提取酶液总量（ml）；VS反应时所用酶液量（ml）；W样品鲜重（g）；t反应时间（min）；1.7为1ml0.1mol/LKMnO4相当于1.7mgH2O2。作业：计算CAT活性的大小。查找资料测定CAT其它的方法。思考题：实验中加碳酸钙的作用是什么？实验四叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定实验目的：掌握植物中叶绿体色素的成分分离和定性、定量分析的原理和方法。一、提取、分离原理：1、溶解性。叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取？？？？2、吸附性。滤纸对Chlb、Chla、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同(？)，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。植物材料冬青叶片1.0g