食品中副溶血性弧菌的检验(2008.11)

食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验全国食品卫生标准委员会微生物标准协作组2008.11一种重要的食源性致病菌主要与海产品消费有关我国沿海地区细菌性食源性疾病暴发最主要的致病因子国外海产品副溶菌限量美国FDA规定软体贝类总体副溶菌密度104MPN/g；日本规定生食贝类与鱼片总体副溶菌密度100CFU/g副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyticus）国外检验方法美国FDA方法－BAM网络版第9章弧菌2004第8版1995/1998加拿大MFHPB-15海产品和贝类副溶血性弧菌的检验,1997MFLP-57海产品和贝类副溶血性弧菌的计数,1996日本食品卫生检查指针微生物编,2004ISO标准8914:1990（E）微生物学：副溶血性弧菌检验的总体指南NMKL食品中致病菌的检测和计数,1997CCFRA副溶血性弧菌检验17.1:1995以科学技术和实践经验为依据，经科学研究制定与国际方法接轨修订法同时体现定性、定量分析流程标准的修订原则实验室内研究MPN计数与涂布平板计数的对比食品类别加标菌株稀释倍数MPN法（MPN/g）涂布平板计数（CFU/g）猪肉馅05VP33710-62.41.405VP33710-70.43—冻虾仁05VP33710-60.930.605VP33710-70.04—海鱼ATCC1780210-60.04—ATCC1780210-70.03—培养基上可疑菌落的准确性食品类别国标法可疑菌落数阳性数准确率（%）修订法可疑菌落数阳性数准确率（%）猪肉馅选择性平板3030100科玛嘉4040100蔗糖平板3030100TCBS4040100冻虾仁选择性平板634278科玛嘉2525100蔗糖平板573561TCBS7474100海鱼选择性平板302893科玛嘉7474100蔗糖平板302583TCBS5151100牡蛎选择性平板27622科玛嘉282693蔗糖平板18528TCBS1919100染菌试验的实验室内研究食品类别加样浓度等级MPN/g试样数阳性数国标法修订法猪肉馅高2.4101010低0.43101010对照0.031000冻虾仁高0.93101010低0.04959对照0.031000海鱼低0.0410910极低0.041014对照0.031000牡蛎对照0.231136染菌试验的合作研究食品类别加样浓度等级MPN/g试样数阳性数国标法修订法牛肉馅天然污染0.032476低0.032413阴性对照0.032400冻鳕鱼第一批2.124521第二批0.032405第三批0.032401牡蛎肉第一批2.9242023第二批0.24211218第三批0.032426合作比对研究样品制备增菌（定性/定量）分离纯培养初步鉴定确定鉴定报告检验方法文本要点8~18hFDA:16~18h增菌时间TCBS平板科玛嘉弧菌显色平板圆的、半透明的、表面光滑的粉紫色菌落，直径2mm～3mm圆的、半透明的、表面光滑的绿色菌落，有粘性，直径2mm～3mmTSA3个或以上纯培养使用MPN表示例10g1g0.1g0.01g0.001gA31000310××首先，如果最高稀释度及其相邻较低稀释度的全部管均为阴性，剔除最高稀释度。只要这种情形存在，并且余下4个稀释度，继续剔除这些稀释度。其次，如果只余下3个稀释度，采用这3个稀释度，如A所示。使用MPN表示例10g1g0.1g0.01g0.001gB33100×310×C23231××231如果还剩下3个以上的稀释度，那么找到全部管均为阳性的最高稀释度。此处存在3种情形。第1种情形，全部管均为阳性的稀释度在余下的3个最高稀释度中，采用这3个稀释度。示例B中，首先剔除最高稀释度，由于全部管均为阳性的稀释度在余下的3个最高稀释度中，因此使用这3个稀释度。示例C中，全部管均为阳性的稀释度在余下的3个最高稀释度中。使用MPN表示例10g1g0.1g0.01g0.001gD23221××221第2种情形，全部管均为阳性的稀释度不在余下的3个最高稀释度中。那么，选择靠近全部管均为阳性的稀释度的2个更高的稀释度，并将更高稀释度的阳性管数加到第3个更高稀释度中，示例D中。全部管均为阳性的稀释度为1g，选择0.1g和0.01g，形成第3个稀释度0.001g的有阳性管的更高稀释度只要一个。使用MPN表示例10g1g0.1g0.01g0.001gE21011212××第3种情形，没有全部管均为阳性的稀释度。那么，选择最低的2个稀释度，将余下更高稀释度的阳性管数加到第3低的稀释度中。示例E中，没有全部管均为阳性的稀释度，最低的2个稀释度为10g和1g，将0.1g、0.01g和0.001g的阳性管数相加，形成第3个稀释度0.1g。使用MPN表示例10g1g0.1g0.01g0.001gF22221××221如果选择的3个稀释度不在表中，如有可能，重做试验。如果仍然需要这个MPN值，使用3个最高稀释度。示例F中，使用了3个最高稀释度。使用MPN表示例10g1g0.1g0.01g0.001gG22122如果这些稀释度仍不在表中，那么使用有阳性管的最高稀释度，MPN/g=(1/m)*2.303*log10(全部管样品克数之和/阴性管样品克数之和)其中，m表示具有阳性管的稀释度中每管的样品量。FDA方法、日本、加拿大方法PCR、基因探针tlh基因、R72H片段的检测毒力基因的检测分子生物学检测方法