食品中合成着色剂的测定 ――色素提取

食品中合成着色剂的测定——色素提取2012.4.18课程目的：1.掌握食品中合成着色剂的测定原理；2.了解高效液相色谱的工作原理及操作方法。着色剂：通过使食品着色后改善其感官性状，增进食欲的一类物质。天然着色剂：辣椒红、甜菜红、红曲米、胭脂虫红、高粱红、叶绿素铜钠、姜黄、栀子黄、胡萝卜素、藻蓝素、可可色素、焦糖色素等等。合成色素：用人工合成的方法从煤焦油中制取，或以苯、甲苯、萘等芳香烃化合物为原料合成的有机色素。包括苋菜红、柠檬黄、亮蓝、日落黄、诱惑红、赤鲜红等等。合成着色剂的潜在危害——致泻性、致癌性国际：JECFA制定各种合成着色剂的ADI我国：食品安全国家标准、食品添加剂使用标准（GB2760-2011）现状：超量使用，使用工业色素、染料色素方便、快速、准确地检测食品中合成着色剂，是对其进行有效管理的必要手段。测定手段（GB/T5009.35-2003）：1.高效液相色谱法2.薄层色谱法3.示波极谱法4.其他：纸上层析、分光光度法苋菜红、亮蓝、柠檬黄、日落黄着色剂最大使用量（g/kg）柠檬黄0.1日落黄0.1苋菜红0.05亮蓝0.025合成着色剂在饮料中的最大使用量（GB2760-2011）一、实验原理1.聚酰胺吸附法提取合成着色剂聚酰胺（尼龙）通过氢键吸附着色剂，天然着色剂（影响测定）在酸性条件下被洗脱去除，合成着色剂在碱性条件下被洗脱收集，浓缩后上机测定。吸附——洗涤——解吸附——浓缩——上机理化测定一般步骤：除杂质、收集目标物、调整浓度、上机2.高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）：是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。检测器：二极管阵列检测器3.结果分析保留时间（定性）：根据样品中各物质被洗脱至检测器的时间差异来进行定性分析；峰面积（定量）：根据样品峰面积与标准品峰面积的比较来进行定量分析。试剂配方作用聚酰胺粉吸附柠檬酸溶液20g柠檬酸，100mL水溶解调PHPH4的水（70℃）水+柠檬酸溶液，调至PH=4，加热洗涤甲醇-甲酸溶液60mL甲醇+40mL甲酸洗涤无水乙醇-氨水-水70mL乙醇+20mL氨水+10mL水解吸附乙酸铵溶液1.54g乙酸铵，纯水定容至1000mL，乙酸调PH至4流动相合成着色剂标准溶液浓度0.05mg/mL定量分析50%乙醇定容样品其他乙酸、甲醇、氨水、蒸馏水水二、试剂与器材二、试剂与器材器材：烧杯、玻棒、吸管、移液管、G3漏斗、抽滤瓶*2、针筒、温度计、5mL玻璃离心管电子天平、水浴锅三、实验步骤1.取样、脱气称取饮料20g，倒入50mL烧杯，碳酸饮料用电炉加热除去二氧化碳。（已脱气）。2.色素吸附称取聚酰胺3g，用少许PH4的水（70℃）调成糊状，加入待测样品，搅拌5min。3.除杂质组装好G3漏斗，将样品倒入漏斗，抽滤；PH4的水（70℃）洗涤3次，每次20mL（洗涤沉淀物）；甲醇-甲酸洗涤3次，每次20mL（洗涤天然色素）；400mLPH4的水洗涤。4.解吸附更换抽滤瓶。用乙醇-氨水-水溶液洗涤三次（5mL、10mL、5mL），收集解吸液。5.样品浓缩解吸液倒入蒸发皿中，80℃水浴蒸发至约2mL，以乙酸（一小滴）调节PH至6。收集样品至玻璃离心管，加水定容至5mL。3g聚酰胺20g饮料70℃PH4水，糊状加热脱气混合搅拌5minG3漏斗抽滤70℃PH4水，20mL，洗3次甲醇-甲酸，20mL，洗3次70℃PH4水，400mL洗涤乙醇-氨水-水，洗三次，5ml、10mL、5mL更换抽滤瓶收集滤液，80℃水浴至2mL乙酸调PH至6，离心管定容至5mL，冰箱保存抽滤过程注意搅拌、倒废液清洗漏斗：自来水-盐酸-蒸馏水目标物6.上机测定3000rpm离心5min，取上层10μL进高效液相色谱。7.结果分析（1）保留时间（2）含量计算X——试样中着色剂含量（g/kg）A——样液中着色剂含量（μg）V2——进样体积（mL）V1——试样稀释总机体（mL）m——试样质量（g）结果保留两位有效数字