制药用水微生物检查方法的验证

微生物检查方法验证微生物检查方法验证介绍内容介绍内容一、微生物的基础知识微物的基础知识二、微生物检查方法验证微生物基础知识微生物基础知识微生物（microorganism,microbe）是一些肉眼看微生物（microorganism,microbe）是些肉眼看不见的微小生物的总称。微生物（microorganism）包括细菌、支原体、螺旋体、衣原体、立克次体、病毒及真菌霉菌、酵母菌和放线菌）等。微生物的特点微生物的特点种类多分布广种类多分布广迄今为止，我们知道的微生物约有10万种，只占地球上实际存在的微生物总数的20%。实际存在的微生物总数的微生物的特点各体小面积大各体小，面积大物体的表面积和体积之比称为表面积，大肠埃希菌的表面积是人的30万倍。的表面积是人的万倍微生物的特点微物的特点吸收多转化快如大肠埃希菌在合适条件下，每小时可以消耗相当于自身重量2000倍的数量，而人体则需要40年之久。微生物的特点微物的特点适应强易变异适应强易变异多数细菌能耐多数细菌能耐00～－～－196℃196℃的低温；的低温；硫细菌可在硫细菌可在250250～～300℃300℃的高温条件下正常生长；的高温条件下正常生长；一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活；一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活；产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下能保藏几十产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下能保藏几十年几百年年几百年年、几百年。年、几百年。微生物的类群和形态结构微生物的类群和形态结构微生物按其结构、化学组成及生活习性等分为三大类：微生物按其结构、化学组成及生活习性等分为三大类：原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体等氏体、螺旋体等真核细胞型：真菌真核细胞型：真菌非细胞型：病毒非细胞型：病毒噬菌体噬菌体细菌的繁殖细菌的繁殖细菌（bacterium）属于原核细胞型微生物，其特点是具有细胞壁、原始的核质，以二分裂方式繁殖。了解细菌的基本特性、细菌的鉴别，对新药的研发和防止药品污染保证药品质量具有重要的意义品污染，保证药品质量具有重要的意义。细菌的形态-细菌体积微小，是无色半透明的，用肉眼直接观察难以看到，其结构和形状须经过显微镜放大数百倍至上千倍才能观察观察。-一般以微米（µm）作为测量单位。-在细菌学中，按其形态可分为球菌、杆菌、弧菌和螺杆菌。在菌其球菌杆菌菌杆菌经革兰染色法（Gramstain）可将细菌分成两大类：革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）。细菌的形态细菌的形态真菌（fungus；eumycetes）是具有真核和细胞壁的生物。种类很多，已报道的种超过10万个。大多是由纤细管状菌丝构成的菌丝体。许多菌丝在一起统称菌丝体菌丝体在基质上生长的形态称为菌落起统称菌丝体。菌丝体在基质上生长的形态称为菌落。细菌的形态真菌的形态具有多样性，大小不一，大的用肉眼可以看到，小的用普通光学显微镜放大数倍乃至千倍方可观察到其小的用普通光学显微镜放大数倍乃至千倍方可观察到。其形态分单细胞、多细胞，单细胞呈圆形或卵圆形，如酵母菌（yeast）。多细胞由菌丝和孢子组成，并交织成团。药品污染常见的真菌毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属、木霉属-毛霉属（MucorMicheliexFries）毛霉属（MucorMicheliexFries）毛霉属在自然界分布很广，常用于发酵工业。并引起水分高的粮食及食品的霉烂变质。根霉属（RhizopusEhrenberg）根霉属（RhizopusEhrenberg）根霉属广泛应用于发酵工业，在潮湿的粮食及食品上能迅速蔓延生长引起粮食及食品的腐烂速蔓延生长，引起粮食及食品的腐烂。曲霉属（Aspergillus）曲霉属（Aspergillus）曲霉属的菌丝无色、淡色或表面凝聚有色物质，为有隔的多细胞。本属的常见产毒霉菌有8个种，具有强烈的致癌性。青霉属青霉属菌丝无色或有色，为有隔的多细胞。分生孢子梗从菌丝垂直生出，无足细胞，顶端不膨大，无顶囊，产生一轮至数轮分叉，在最后一级分枝的小梗上，长出成串的分生孢子形似扫帚状称为帚状枝出成串的分生孢子，形似扫帚状，称为帚状枝。微生物检查法微生物检查法微生物限度检查方法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。检查方法多用平皿法、薄膜过滤法、涂抹法和MPN法，检查方法多用平皿法、薄膜过滤法、涂抹法和MPN法，国家药典规定应用经验证合格的方法。检查方法的验证试验环境无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出染的措施不得影响供试品中微生物的检出。检验依据单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室区悬浮粒子浮游菌和沉降菌的测试方法的净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。-2010版药典隔离系统的应用应用隔离系统重要的目的保产免外性染包括操作操作境外-是保护产品免受外源性污染，包括操作人员、操作环境及外包装等的污染，保证无菌实验结果的可靠性，实现一次检出的要求。-是保护操作人员免受实验过程中的有害物质带来的污染。隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。方法验证的必要性-为保证检验结果的可靠性，真实性，选择正确的检验方法是至关重要的因此试验前必须对选择的方法进行验证是至关重要的。因此试验前必须对选择的方法进行验证。-证明所采用的方法是适宜的，确认所采用的方法适宜于被检供试品的微生物污染的检验。检供试品的微生物污染的检验。检验结果的影响因素供试品的组分抑菌剂、增溶剂、乳化剂及抗氧化剂，这些组分在一定浓度下对微生物起一定的抑制作用也可对污染菌造成损伤。造成损伤。环境影响不同类型的微生物及不同的存活状态对环境的抗性是不同的。方法验证试验全方面验证如试验环境，培养基，供试液的制备，灭菌方法等全部进行验证。验证方法验证方法菌液制备50～100cfu/ml。菌液制备/验证方法试验组、菌液组、供试品对照组、释剂对照组。结果判断供试品组、对照组、稀释剂对照组的菌回收率均不低70%。均不低70%。方法验证验证方法⒈按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的⒈按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。⒉对各试验菌的回收率应逐一进行验证。⒊验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。方法验证试验菌株大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、枯草杆菌。菌液制备同计数培养基的适用性检查。方法验证试验组-平皿法-薄膜过滤法方法验证菌液组-供试品对照组-稀释剂对照组