实验四(新城疫病鸡剖检及病毒学检查)(精)

新城疫病鸡剖检及病毒学检查蒲娟E-mail:[e-mail]:62732982一、兽医传染病学实验室注意事项二、兽医传染病的一般诊断程序三、病鸡剖检及细菌学检查一、兽医传染病学实验室注意事项注意个人预防、避免病原传播穿着工作服，实验结束后需立即消毒清洗。实验操作期间，勿以手指或其他器物等接触口唇、眼、鼻及面部。实验完毕，应洗手消毒后离去。一、兽医传染病学实验室注意事项危险材料及其污染的器物处理动物尸体、内脏、血液等废弃病料，以及废弃的病原培养物、生物制品等须深埋或经过严格消毒处理（焚烧、煮沸、高压灭菌等）后丢弃到公共垃圾处理场，严禁将未经消毒的危险性材料直接丢弃。用过的棉球、纱布、吸水纸等污物须置于固定容器内统一消毒处理，不得任意抛弃。桌面、地板或地面被污染时，应用适当消毒液清洗。二、兽医传染病的一般诊断程序实验室诊断病理组织学、病原学（涂片镜检、病原分离、PCR、动物回归）、血清学（HI、AGID、ELISA）等临床诊断流行病学、临床症状、病理解剖等发生疫情确诊三、病鸡剖检及病毒学检查实验目的1.掌握动物病毒病实验室诊断的一般程序。2.掌握病鸡剖检的一般方法。3．了解鸡新城疫的病理变化和临诊要点。4．掌握新城疫病毒的分离鉴定。三、病鸡剖检及病毒学检查疑似新城疫病流行病学调查尸体剖检（取样、病变的观察）病原的分离病原的鉴定做出诊断（发病时间、发病率、死亡率、发病鸡群的用药和免疫情况等）取样：病变组织（脾脏—病毒分离）、血液病变的观察：口腔、嗉囊、气管及肺、腺胃与肌胃、肠道粘膜。病毒分离：鸡胚血凝（HA）与血凝抑制（HI）试验尸体剖检尸体剖检病鸡剖检基本原则1、外内2、观察取样剖检3、肝脾胃肠法氏囊肾脏肺心喉头、气管脑尸体剖检1.全身黏膜和浆膜出血，淋巴系统肿胀、出血和坏死，以消化道和呼吸道为明显。2.口腔有黏液，嗉囊内积酸臭味液体和气体；3.腺胃黏膜水肿，其乳头或乳头间有鲜明的出血点，或有溃疡或坏死。肌胃角质层下也可见出血点。病毒分离将脾脏剪碎，按照1:5的比例加入含三抗的PBS，用研磨器研磨成组织匀浆将匀浆置于1.5ml离心管中，5000rpm离心10min。离心后，取上清0.1ml接种鸡胚37度孵化鸡胚72h（每隔12h照胚，挑出死胚和弱胚），弃掉24h之内的死亡胚收获鸡胚尿囊液之前，将鸡胚置于4度6h以上，促进血管收缩收获尿囊液，测定尿囊液的HA效价，并用新城疫的阳性血清进行HI实验，做出鉴定鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的病原的一种培养方法，此方法可用以进行多种病原的分离、培养，毒力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。鸡新城疫病毒适宜接种在尿囊腔和羊膜腔内，生长后，鸡胚全身皮肤出现出血点，以脑后最显著。常见接种方法：1.尿囊腔接种2.绒毛尿囊膜接种3.卵黄囊接种4.羊膜腔接种尿囊腔接种步骤标本处理：病料研磨（5倍至10倍稀释），除菌处理照胚：活胚检查：胚动、血管、绒毛尿囊膜发育确定接种部位：画气室、画接种部位（避开大血管及头部）消毒：酒精—碘酒—酒精接种：0.1-0.2ml，气室下孵育：气室向上放置，孵育的最适温度为37℃，相对湿度为40—70％，孵育72—96h9—11日龄鸡胚鸡胚孵育气室向上放置，孵育的最适温度为37℃，相对湿度为40—70％，孵育72—96h接种后检查接种后24h内死亡的鸡胚，系由于接种时鸡胚受损或其他原因而死亡，应该弃去；24h后，每天照蛋2次，如发现鸡胚死亡立即放入冰箱，于一定时间内（72h）不能致死的鸡胚亦放入冰箱冻死，以便收缩血管。死亡的鸡胚置冰箱中1～2h即可取出收取材料并检查鸡胚病变。鸡胚收获原则上接种什么部位，收获什么部位。尿囊腔内接种者用无菌手术去气室顶壳，打开整个气室区；以无菌镊子撕去一部分蛋膜，撕破绒尿膜而不撕破羊膜；用镊子轻轻按住胚胎，以无菌吸管或消毒注射器吸取绒毛尿囊液置于无菌试管中，多时可收获5～8mL；将收获的材料低温保存。