酸性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)

北京雷根生物技术有限公司酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(PNP比色法)简介：酸性磷酸酶(acidphosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。Leagene酸性磷酸酶检测试剂盒(AcidPhosphataseColorimetricAssayKit)检测原理是利用Para-nitrophenylphosphate(pNPP)在碱性条件下p-nitrophenol呈黄色，产物黄色越深，通过分光光度比色法测定400～415nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断或其他用途。组成：操作步骤(仅供参考)：1、配制检测工作液：①配制显色工作液：新配制的显色工作液应在6h内用完。②配制标准品工作液：。2、准备样品：①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于酸性磷酸酯酶的检测。②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但丌加底物的对照。③高活性样品：如果样品中含有较高活性的酸性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，也可以采用ACPAssaybuffer稀释。3、加样：按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加入，编号名称TE003360TTE0033120TStorage试剂(A):ACPAssaybuffer7.5ml15ml4℃试剂(B):pNPP1支2支-20℃避光试剂(C):p-nitrophenol0.05ml0.1ml-20℃避光试剂(D):StoppingSolution10ml20mlRT使用说明书1份北京雷根生物技术有限公司并注意避免产生气泡。标准品的用量分别为4、8、16、24、32、40μl，待测样品直接加40μl。如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。4、轻轻混匀，孵育。5、每孔加入160μlStoppingSolution终止反应。6、检测405nm处吸光值，如果无法检测405nm，亦可检测400～415nm范围内吸光值，一般应数小时内检测完毕。计算结果：酸性磷酸酶活性单位的定义：pH4.837℃条件下，每分钟水解para-nitrophenylphosphate显色底物产生1微摩尔p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的酸性磷酸酯酶活性。血浆中的酸性磷酸酶活性范围2～7.9U/L，血清中酸性磷酸酶的活性范围在2.5～11.7U/L，精液(semen)中含有高浓度的酸性磷酸酯酶，活力可以达到87～436KU/L。注意事项：1、待测样品中丌能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。2、建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。3、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色杯的最小检测体积，尽量采用小体积的比色杯。4、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用ACPAssaybuffer稀释样品后重新测定。5、一支显色工作液配制后需当日使用完毕，因此请注意适当多准备一些样品一起检测。6、p-nitrophenol溶液对人体有害，反应终止液有腐蚀性，请小心操作。7、如果希望进行酶活性的绝对定量，进行酶反应时应精确计时，此时推荐采用孵育30min或更长时间，以减小操作过程中的时间误差。8、待测样品中酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30min。9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。空白对照孔标准品孔待测样品孔ACPAssaybuffer40μl(80-x)μl(40-y)μl显色工作液40μl40μl40μl待测样品——yμl标准品工作液—xμl—