3-5-二硝基水杨酸法测定还原糖

3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖一、实验目的掌握还原糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法二、实验原理3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖（各种单糖和麦芽糖）溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和棕红色物质的颜色深浅的程度成一定比例关系。在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度，查标准曲线，便可求出样品中还原糖的含量。三、材料、仪器设备和试剂材料：食用面粉仪器设备：刻度试管，漏斗，烧杯，容量瓶试剂：1mg/mL葡萄糖标准液3,5-二硝基水杨酸试剂：6.3g3,5－二硝基水杨酸溶于262ml2mol/L的氢氧化钠溶液中。将此溶液与500ml含有182g酒石酸钾钠的热水混合。向该溶液中再加入5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，充分搅拌使之溶解，待溶液冷却后，用水稀释到1000ml。储存于棕色瓶中。四、实验步骤1.制作葡萄糖标准曲线取7支具有25ml刻度试管，编号，按下表所示的量精确加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液和3,5-二硝基水杨酸试剂。项目管号0123456葡萄糖标准液mL00.20.40.60.81.01.2蒸馏水/mL2.01.81.61.41.21.00.83,5-二硝基水杨酸试剂/mL1.51.51.51.51.51.51.5相当于葡萄糖量/mg00.20.40.60.81.01.2将各管摇匀，在沸水浴中加热5min,取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，在以蒸馏水定容至25ml刻度处，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号管调零，分别读取1-6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。2.样品还原糖的测定2.1样品中还原糖的提取准确3g食用面粉，放在100ml的烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，摇匀，置于50°C恒温水浴中保温20min,使还原糖浸出。离心，用20ml蒸馏水洗残渣，再离心，将两次离心的上清液全部收集在100ml的容量瓶中个，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。2.2显色和比色取三支25ml刻度试管，编号，分别加入还原糖待测液2ml,3,5-二硝基水杨酸试剂1.5ml,其余操作均与制作标准曲线相同，测定各管的吸光度。五、结果计算分别在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数，按下式计算还原糖的百分含量：还原糖=%1001000样品显色时取用体积提取液的体积糖的量由回归方程求得的还原