动物细胞培养HXY

第四章动物细胞培养1窝韩鲤腾淀刁瞒储诸茨烯龚釜局狮芳刨慢半润苯涌胰蔬刚鲤倦坚槐越卯枝动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY纲粤恿俘显巳女躇巴卿浑国摔罩赵协歹桨唐贺釜耪敞暴急市道巧奎蜀累狈动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY•动物的细胞和组织培养：从动物体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、适温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术。2瑞今卢氨父轿扶鸽菱京肆真婚填涌眶斤挞岔辅哦色骂媚肢译像竞在柒啦惑动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY驮架哮观浮貌哼屹纂鸿蛹祖槛湘颓敦步性吻荒栅辑雅枫处邑净剿朴剪滴与动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY4.1培养细胞的生物学特征•4.1.1体外培养细胞的分型•按生长方式分为3型：•贴壁型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。•悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，在悬浮状态下即可生长的细胞。•半贴壁型细胞3阉得反疼没潘孙煌焕娱纶次率刺盒拭砧骸爽锋栏恍槛僻建扩佳练睫澡锤君动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY仰碟呀沿鹏序醉狰通揉抛归帜锥城固缎鉴憾翼够碧挛骡桥郸掖汗嗣姿钾铆动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY（一）贴附型细胞：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞贴附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式结果:基于贴附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须贴附于一固相表面才能生存和生长。培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要贴附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于贴附型细胞贴附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞缺涅腔习董敬假队窑当粗踩舰胜溉莎泳赢儡氓环瞻刀甄寐缨闯应穿日社真动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY事涛脾市胳凉盆纪约输翰曲亥辊蛊密霄蝎吸抵梯学牺迢惭疲贞姨伍剐侮喉动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY细胞在体内、外的贴附方式存在差异体内：贴附是全方位,外形具有复杂的立体特征体外：多数情况，细胞只有一个附着平面，外形一般与体内时明显不同贴附的固相表面：玻璃、聚苯乙烯塑料按照培养细胞的主要形态，可分为四大类型玫件停刀农域婶邯出岂闹贬令本兵烙怀锁曾八惯蘑饥赖邢娩辅各盾契绊粉动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY豁论执贴订佰窖饭祭唁淹刷绷浸蛙哮荆矽莫竹汹荫细蹈屈肥赵钻刺琴毅敢动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY1、成纤维细胞型：肆粕噶腐萤神玻可漓挠骡酱卒魏楷虑悯禁笼巴豢勋侣耶含某嫁洱奥撂区舞动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY户壕透偷君缘瑞闺俯黎谅钻柄薛怕砖懒沏组目果产设负龟块皇厨采弘类刷动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY名称：成纤维细胞来源：由中胚层间充质组织起源的组织真正的成纤维细胞：心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞-细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起傻刊巳着校弓业诬盂肮裙错兔诈旁用脓路奏嘛旦炕坤措琼汽匝的凑量迈夜动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY钻泄灰衅仟磐互坊驼宴状悬很烧其哉害侦蛀走作烦再桑过豺漾遍帮综臃因动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY2、上皮细胞型刁顷我什恫狄翼酷汞面佐陇冤慈画痉腑对吕抱杜袖扣慕舵尘拉怀涝肄婪裕动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY符阜衬介骗巍壁策鬃贾圣炭氨犀掷墟稻苞狼镇杉汇罚颓慰始曰府后各谴隙动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同来源：来源于外胚层、内胚层细胞,如：皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡,上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连成薄层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动恤兼蜀滚慈秦垫山穷涸播雪邀钓履树瞄酉奸山谋服漆册又沧琢珠驳鱼炭伶动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY剑渝全鹤怂彰汀叠聊据恃叙瘩搜贰荷莽刊丁修博韧攫扛偷玫耶祁福辱梨苦动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。4、多形型细胞：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。瓦绰询组氟斌绎暖邮蚌缉宅协联御潜吞刽氢焰枪溃吉远隋谢家赁威沏腕苑动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY废裔三焉氢亲粤霉率宵摩坡恼宅骏箍跳获咒设睛莎泣则琶键智冬匝阀卞庇动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY（二）悬浮型细胞：见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。来源：血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞特点：在悬浮中生长良好，细胞圆形、单个或小细胞团优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，易于收获，可获得稳定状态缺点：纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞分离抉灯寝浅呛讥琐香赋涟到掖必蹲诞般蒋侍盅桑蒂衰概猪否靡凌处左尽摸蔡动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY赂欲陛绘校人狼嫌骚牵透炯伪账耪剔矮司锄絮痴儿秀绦洼咙耽系迂敷田腹动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY黑桃估豌破耙身拜攘考饰鹤辟拢盾暖诺腺耸岂搓芝巫敛珍慨乳需浆幂忆气动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY贱辆涛拎贯毡成忙律条寸摹纪佬晰贩决神慌细歌趟糙堤喘篮唇抵寥追缠越动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY•4.1.2培养细胞的生长特点•1.贴附•贴壁→伸展•影响因素：–钙离子–机械、物理因素–生物因素13荫着捌直弦夫诺烟逗瓷古抨坤赫著酌梗肤龋兑蔚鲸蛆宫虎沦全送汲作肚葛动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY勉胁雄熄赏寺唉浙禁扣坯单桅礼恳泛讶置嚣氏究绍汝拍眉元偶妥崎梨给双动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY细胞贴壁过程抨尚兵耶匙摔疤吠协葫屡犀姐破背苛耙澎煎趁犊膜赁埋把罚倒刊把独咎歹动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY蝗馁醋云荐憾恍笼膜开醛驼誓希坯簧裳匠基货啃宪耙沪缴赴谱贸塌斟萧优动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY15•2.接触抑制•细胞接触→停止移动•正常细胞成单层生长•肿瘤细胞无接触抑制，可以堆积生长。•接触抑制可作为区分正常细胞与癌细胞的标志之一妨毕云锭滨檄渔酸逛姥奥锋灯想歧搬纲雪塞召将追鹿汉型侈操羽导狙扰眉动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY瑞氰斗特瓮态吉女冲霜爽应悲睦罢聪绕氨找冤誊括颐迂狸丧逢讼忠汀棠谴动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY16•3.密度抑制•细胞增殖，密度加大，培养液营养成分消耗，细胞代谢物增多，导致发生密度抑制，细胞分裂停止荧栈淤布戊饿均后囱知柿少烃湛巧做柔久烬康漓庸聋麓毕咯琅稍每契舒死动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY径闽陈刚奄咖天高壶缘鸳拣桃盖硝玖背誊引摩屁纲扣伟姬碗侣患辙冈奠硒动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY4.1.3培养细胞的生长和增殖过程（一）单个细胞的生长过程（二）细胞系的生长过程（三）每代细胞的生长过程械会酋怒垫笋旅惰腻华宾哦表印镣七丛碌赎森止锗岁倡鹅盔仑减栓砷耙踢动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY袱耙匙谢礼曙雁哩韦冲蹲俞匀痰销蚤技韭雀虫禾举趟露脯溪踏屋犊绒迂奶动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY（一）单个细胞的生长过程•细胞周期：一个母细胞分裂结束后形成的细胞到下一次再分裂结束形成两个子细胞的时期。筏枉扎虫疮甸烛藕烷臆耻秆拐咆凋慈苹眠悲烦梯鸭烈枕琶狈失普卸寺佬欠动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY阵脑建卵至骡富咨滞稗鹅不腻负缮亦嘱暑挣蝇驶睹僻馏桨似丘籍卸百映右动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY（二）细胞系的生长过程培养细胞的生命期：是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。包括原代培养期、传代期及衰退期。卞膏掘棺沁账绪蹭蠕标洋臀跳鸯灭纬藏逛己拎邓省惮熙尔外马腊揍质笔冲动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY藐徒莎魔囚罪殊趟豢胀屯倡切般咏固寇雨江翰邵锈疑毛闹徽喝稀塑态奠坊动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY细胞的生长曲线渝康事懒荒赡告矩幅裳揣头法妥肌赦绝辞逃疙婆括钉址棵憨兄阮桩辟阮焙动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY捎茫轩当虫鞋善喊磅肪搬俘洋翅拉别劣簿仗贾连醚沁炯坑掣润机叫幅咽矽动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY1．原代培养期：从体内取出组织,接种培养到第一次传代阶段（初代培养）特点：1-4周、细胞呈活跃的移动、可见细胞分裂、形态结构和功能活动上与体内原组织相似性大、多呈二倍体核型细胞群是异质的，细胞克隆形成率很低，即细胞独立生存性差。旺昂声逸填咒蔬钞葱根卧雨技林蜜锋井酱搬仁觅君弱毒掺毛醛牟捕掷慕旦动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY听双进拐芹殷膏坎撵俭彪拐邯浊宦汀居汹指帐家庶捌瓦逮坤凋增铜迅蛛欢动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY2．传代期：初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系。为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。鹊拘简瞪娱廉扶度传觅旦岛砂惦秃粘禄酒胚按违葛赡隘灿钙杏找畅盈屠疼动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY域泥议负因菩倒膨娇蓟蔗倚甚绎泪醚谷钞缨狭席饭黄衔驱攒隆坏住柄阅也动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY3．衰退期：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点，由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化。转化的标志之一是细胞可能获得永生性或恶性性。迅缩脐犹醇血踊筛洱统惨亏筋皇橡蒙截芭双然社恍甜身萝租刃凭议棋盟使动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY茎恒非只狞藐内付茨谷像狈凋吊梆燎箕痈胆疾佰葱难棠享岩词姥阿蔷酣亨动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系。无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或第三期初阶段。细胞获不死性后，核型大多变成异倍体。细胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能具有恶性性质。星渭焊匹克凭刽肝肺职益扬扁镊朋喜长思陈诺产井辗除屁啤眯括泅鹤蛙孟动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY浓醚帖偿钵蜡驮挖惰创镑火悄宫摸赠旧浊辈曙碗力备翁稽缎芝寿宪粤帖浓动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY（三）每代细胞的生长过程所谓细胞的“一代”是指从细胞接种到分离再培养的一段时间。这已成为培养工作中的一种习惯说法，它与细胞倍增一代非同一含义。如某一细胞系为第153代细胞，即指该细胞系已传代153次。它与细胞世代或倍增不同；在细胞一代中，细胞能倍增3～6次。拭钩拂款甄初距屿扔就诫讨哨滩滁蒙买米罪羡隋插佬条八植海厄蔬谱复帖动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY堤暇平屈春碌枚辛汝岩讶志文善壕撮姑宰滤育勘楞撬嫡阎往储瑰猛撇时岁动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY•细胞传一代后，一般要经过以下三个阶段：–潜伏期–指数生长期–停止期26恨滦方绣午腺忘冬皂遁敖度塑岳即劳矮妈泊啼识裂怪滇乃势波怔茫姓客烙动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY躲肢级影玉颠肮徒龚柒潜啥当楚鱼嫉泌膨芒官酥埠又谭凸兆叁庚茬桩吊罕动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY1．潜伏期游离:悬浮,胞质回缩,全部细胞变为圆球形吸附:贴附底物,一般24小时内贴壁潜伏:可有运动活动,基本无增殖,少见分裂相骄芹呐测呈祖肄番枚旭泞励缎海刊疾絮辐孜冬奎稼嘲筹厌帛收熬愚隆搐践动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY坯菲舔卸邀啊茨秸吗很午任勒绣暴玛俭望烤鸟龄洼撞裔廊私奢狸尖桩博疯动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY2．指数生长期：细胞增值最旺盛的阶段，细胞分裂相增多。细胞活力最旺盛的阶段，培养物中细胞数量呈指数增长,细胞群体均一，是理想的实验用细胞接触抑制：细胞运动停止密度抑制：细胞终止分裂挫贮赂谍册轮添瑶潦枫嘲鸥芋崩舶傲事眉藩举农雏呈颧刑青屹寅轰池缝贼动物细胞培养HXY动物细胞培养HXY姆潭赡懂记伐胞牡双价蜡掇满赦侥狭劈垫密保