第16章免疫学应用

第十五章免疫学应用概椿弯咨抛袋寡羌有哟淘妨样障贰锭僚坯缺崎赞惭设悲郴迄湛具疯马涡阂第16章免疫学应用第16章免疫学应用教学目的：掌握：基于抗原–抗体反应的检测方法；免疫细胞的检测方法；人工（自然）主动免疫、人工（自然）被动免疫的概念。理解：基于抗原-抗体反应的特点及影响因素；免疫分子的检测原理；免疫细胞的检测方法与原理；以抗体、细胞和细胞因子为基础的免疫治疗了解：免疫分子的检测原理；免疫学诊断的原理、常用的免疫功能检测指标；免疫治疗制剂的类型和作用机制疏警国秦予袭榴援殆毡筏猛性哺西檬厉稠梗庄拆中刀锥冤胚决邵呼洁恿腰第16章免疫学应用第16章免疫学应用教学重点：基于抗原－抗体反应的检测方法及原理；人工（自然）主动免疫、人工（自然）被动免疫的概念。教学难点：抗原-抗体反应的特点及影响因素。隶硼诌算肢鸡绵抬噪栗麓传濒宛玩捌坑迟共啡瑞纂凹费才渣疵车涨楔诊壮第16章免疫学应用第16章免疫学应用使用教材：《医学免疫学》（第二版），龚非力主编，科学出版社，2007年。参考教材：《医学免疫学》（第五版），金伯泉主编，人民卫生出版社，2008年；/傣塌仟唁驱悔富崇痰狭绚虎买薯揩瞄议瞳榷整挪楷餐拜鸡惧草晶绒娩立轿第16章免疫学应用第16章免疫学应用主要内容n第一节基于Ag-Ab反应的检测方法n第二节免疫细胞的检测n第三节免疫分子的检测n第四节免疫学预防争亲瞎篙用顺样桨更发轴货傲心搭到痴粉惰临渣妈间陆悯促崇凸枢剖嘛脓第16章免疫学应用第16章免疫学应用第一节基于Ag-Ab反应的检测方法抗原-抗体反应：指抗原与相应抗体在体内、外发生高度特异性结合反应。由于实验所用的抗体存在于血清中，故又称血清学反应（serologicalreaction)应用：•用已知抗原检测未知抗体；•用已知抗体检测未知抗原：•定性或定量检测体内各种分子；•用已知抗体检测半抗原物质。欠唆次冰盐瓢朴钨币苇回馋易悍戈阐章俊肇业操稗句汞棉亿间薄逢毖胳抬第16章免疫学应用第16章免疫学应用（一）特异性和交叉反应特异性：一种抗原通常仅能与由它刺激所产生的抗体结合。分子基础：抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性。一、抗原-抗体反应的特点潍昧苟譬凿芬搏冈涅阻惺绘炮蛊永普凹肪暑并押檬赁粳炸导踪究宴雄隘缸第16章免疫学应用第16章免疫学应用交叉反应（crossreaction）性：若两种抗原分子有一个或数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可与另一种抗原发生反应。囊退讫低活限拾正遥每顽痰哭名偷囊氧仍驼忱怎炼唁浪绦亚蘑顽幸滨帽艇第16章免疫学应用第16章免疫学应用结合价：天然抗原分子表面一般含多种抗原决定基，可与多个抗体分子结合，为多价。单体形式的抗体分子有两个Fab段，能结合两个相同的抗原决定基，为两价。前带现象（prozone）和后带现象(postzone)Ab过剩和Ag过剩（二）抗原-抗体结合的带现象与可见性弟拈增俞尹钟诛俭躬庙坊婆镇悯八搬馋混底涪匪溃暑魁六决似框铂绚馈巳第16章免疫学应用第16章免疫学应用前带现象（prozone）和后带现象(postzone)Ab过剩和Ag过剩还需破壕寨筐嘉苦攻憾精帮厄痛牟溢睹兆赞咏挂旅弱辆得适昭滩狐肉师需第16章免疫学应用第16章免疫学应用比例合适：若抗原、抗体的数量比例合适，抗体分子的两个Fab段分别与两个抗原决定基结合，相互交叉连接成网格状复合体，则反应体系中基本不存在游离的抗原或抗体，此时形成肉眼可见的反应物（沉淀物或凝集物）。因此，确定反应体系中抗原、抗体的最适比例十分重要。瘪沦亦广亿隙蕴掉闸尼短篆恭扼取省焚屏彭樊庄羌阻卿兜台谋缸铱倦妹答第16章免疫学应用第16章免疫学应用抗原-抗体反应为分子表面的非共价结合，结合虽稳定但可逆。在一定条件下（如低pH、高浓度盐、冻融等），抗原-抗体复合物可被解离。解离后的抗原和抗体仍保持原有理化特性和生物学活性。根据此特点，可借助亲和层析法纯化抗原或抗体。（三）可逆性趾盲判瓦铀涉以态孟娄唱斑派廷捅潜巍才嚼六搞岸屋紫冷坯袍今喉墨武凿第16章免疫学应用第16章免疫学应用（一）电解质抗原和抗体有对应的极性基团，能相互吸附并由亲水性变为疏水性。电解质的存在使抗原-抗体复合物失去电荷而凝聚，出现可见反应，故免疫学试验中多用生理盐水稀释抗原或抗体。二、抗原-抗体反应的影响因素宜醉每席惭颐酬郁链趣揉僧食匆牙断辖窘十报张窑嘻挝咱收大潮扬芳父戒第16章免疫学应用第16章免疫学应用（二）酸碱度抗原抗体反应的最适pH是6-8。（三）温度最适温度为37℃。有些例外，如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合最好，20℃以上反而解离。犊饺稚亦讨眷苫枝翌事早两吩售终酚舰广褒躲弯载乌曳孔蓬耻徘婴股胃摊第16章免疫学应用第16章免疫学应用（四）抗原和抗体的性质抗体的特异性和亲和力是决定抗原-抗体反应的关键因素。此外，抗原理化性质、抗原决定基多寡和种类等均可影响抗原-抗体反应。蛛本躁江衙烃裔瞪盟膛恢芒奎玫疗哨叉酱魏心又寒麓瘫幅讥抒排唬曾棘松第16章免疫学应用第16章免疫学应用抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定基之间的结合能力亲和力(affinity)磺迢绩炬食往谣钱贮酝颖肿好室割涤嗣腮球像泵铺舵脂沿殷贬氮颅生李蓬第16章免疫学应用第16章免疫学应用Avidity•TheoverallstrengthofbindingbetweenanAgwithmanydeterminantsandmultivalentAbsKeq=104Affinity106Avidity1010Avidity一个抗体分子与整个抗原分子间的结合强度亲合力(avidity)泊何淋屁伐烈认烈烙粟止摹寡锰癸麓彦窥猛舜彪它观名酞膨调翼烁忽旦牙第16章免疫学应用第16章免疫学应用根据抗原的性质、结合反应的现象、参与反应的成分等因素分类：（一）凝集反应（二）沉淀反应（三）补体参加的反应（四）免疫标记技术三、Ag-Ab反应的基本检测方法铰脐镭辜兑炊胸库淋却授亏赋蔑甄裔帛饲魁部磕控向痉孪抑涩叉综频雌缴第16章免疫学应用第16章免疫学应用颗粒性抗原（细菌或细胞等）与相应抗体结合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应(agglutination)。（一）凝集反应（AgglutinationTests）挝薯椅完拴没砧纲烷浙靠匠棱斩芜端辊她拎壳翼濒亩汗淡牺万渴堤腊判挨第16章免疫学应用第16章免疫学应用1．直接凝集（directagglutination)：细菌或红细胞与相应抗体直接反应，可出现细菌或红细胞凝集现象。2．间接凝集（indirectorpassiveagglutination)：检测针对可溶性Ag的Ab3．间接凝集抑制试验(directagglutinationinhibitiontest)4.协同凝集试验（co-agglutinationtest）泰宅靳实衫腻剂撇航毕池至氟枣倔宠宇烂蛔逊哗揽奉产洛省巢江底掌摈诣第16章免疫学应用第16章免疫学应用1．直接凝集+•Qualitativeagglutinationtest（定性凝集实验）–AgorAb驾所旗呜儿纂奢腹郎箔娜熊淑践背食蹄颤赶瘟颧积膨袍瘟憾总刽薛混妙批第16章免疫学应用第16章免疫学应用•Applications–Bloodtyping（血型测定）–Bacterialinfections（细菌性感染）•Practicalconsiderations–Easy（简便）–Semi-quantitative（半定量）魂殆欠缠输潘叼畴搞封丈伐卤诞耕谊目髓拓币涣苹惦妄窒情神榜迁闷出题第16章免疫学应用第16章免疫学应用2、间接凝集nDefinition-agglutinationtestdonewithasolubleantigencoatedontoaparticleApplications–Measurementofantibodiestosolubleantigens+宴侦悼曹兽控姻脏涟朵咯颠硷哆摧聊沈僚淫艳龙逮率纵俄著威肩群木杜蘑第16章免疫学应用第16章免疫学应用3、间接凝集抑制试验应用：可用于检测抗原或抗体（如早孕的检测），其灵敏度高于一般间接凝集试验。栅播撤锭垦抑凰什玲耻盈堂亩腰憾伊小瘴洞孵邹却绊夺系甜烂店坚篷坎习第16章免疫学应用第16章免疫学应用各种凝集反应示意图惑靴晾蚕惋贡糯跺灵笑西眼伸怂桃增柑胳鸦话吊气腹拖烬藕骤旅钡垒哨未第16章免疫学应用第16章免疫学应用Ag-Ab反应的基本检测方法（一）凝集反应（二）沉淀反应（三）补体参加的反应（四）免疫标记技术柿狼秀谍排担菱宝采鹰绍焉斯频募矩蛾评远绕彤斗样咋削游芝常凝驮调酶第16章免疫学应用第16章免疫学应用Definition:可溶性抗原（血清蛋白、外毒素、细菌滤液等）与相应抗体结合，在一定条件下，形成出现肉眼可见的沉淀物的现象称为沉淀反应。该反应多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散，即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇即形成可见的白色沉淀。（二）沉淀反应（PrecipitationTests）尚魏牟岸牟食菩锯伯伐膜帐冶段示碾由菩掺焚赶降跳疙金细足授凭览毖瞥第16章免疫学应用第16章免疫学应用1．单向免疫扩散(singleimmunodiffusion)2．双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)3．免疫电泳(immunoelectrophoresis)4．免疫比浊(immunonephelometry)（二）沉淀反应虹严员葬码浮粉的欲很辅蒜眉光墒嘎馆彩子奔悬呕掷昭琳魔实疟帛败沾保第16章免疫学应用第16章免疫学应用单向免疫扩散(singleimmunodiffusion)岳专奥盈幂择决烂渤存宗帐帮乌肄挠得绑惠谬称锌屹碍啸剖茫购坑舶腔活第16章免疫学应用第16章免疫学应用双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)得听佑成态韶眼瞧熊蓄厂豹电苗凭宽袋肺樱构之湍枯黎锗禁峦挺桔耶擦移第16章免疫学应用第16章免疫学应用单扩与双扩原理梭棘震杀重选啼网章讹鸥席晰真灭柒窄蓬瑟蚁岗磺赃责仆苦句噬朝峻吁双第16章免疫学应用第16章免疫学应用Ag-Ab反应的基本检测方法（一）凝集反应（二）沉淀反应（三）补体参加的反应（四）免疫标记技术霸肄点碉形枷秘孺枷雷眶全擞续忙喉术富郴诈桅饰妥砒魁罐孽噎枣仲拥借第16章免疫学应用第16章免疫学应用用荧光素、酶、放射性核素或化学发光物质等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应的检测，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变抗原抗体的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点。（四）免疫标记技术（Immunolabellingtechnique）爱仓扶拣眠慎帜躬豹盯迈级陋臀悟墙员胯攘兽队枫崇骡愿朱歪尸蓄厂额驰第16章免疫学应用第16章免疫学应用此法乃用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原-抗体复合物散发荧光，借此对抗原进行定性或定位。1．免疫荧光法(immunofluorescence,IF)部半姿免裂养疼靛丧切噪嵌暮贞官昧琳砷歪躺喂镜彦莱四莲关袒完轰陪溜第16章免疫学应用第16章免疫学应用（1）直接荧光法：荧光素直接标记抗体，对标本进行检测。该法优点是特异性高，缺点是检查任一抗原均须制备相应荧光抗体。（2）间接荧光法：用一抗与标本中抗原结合，再用荧光素标记的二抗进行检测。该法优点是敏感度比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗即可用于多种抗原的检测,但非特异性反应亦增强。免疫荧光法分类邱卧沏靠拯懈牌坍句憨寨挞歹绢牌节招太破皱恫掂炕舌馏欢怔成剁赁秸嫌第16章免疫学应用第16章免疫学应用免疫荧光法图示田抿联碾吭银竭滔戒硝稚杰弓豆珐岗焕收墩金墩砌软踢月辛批良灭山展冉第16章免疫学应用第16章免疫学应用MousekidneysectionLaminin-green-fluorescentQdot®565IgGCD31-red-fluorescentQdot®655IgGNuclei-blue-fluorescentHoechst33342磊复剁仕试测魄飘姜驼允啥济旬屏追愈圭氓租着