临床检验操作规程(DOC)

临床检验操作规程第一节临床血液学检验血常规检查【标本】抗凝静脉血（有些仪器也可用末梢血）。【方法】血液细胞自动分析仪测定法。【试剂】血液细胞自动分析仪配套试剂。【操作】详见自己实验室血液细胞自动分析仪使用手册。【附注】1.血常规包括白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比积、血小板计数等项目。这些项目亦有相应的手工方法，详见有关资料。2.半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉血。其优点为：（1）静脉血能正确地反映病人实际情况，重复性好；（2）利于延长仪器的使用寿命；（3）解决了采血盘的交叉感染问题等。3.血细胞计数应用EDTA·K2：为抗凝剂（EDTA·K2·2H2O1.5～2.2mg可抗凝1ml血）。4.贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应不超过6h；如需制作血涂片应在2h内完成。5.测定前必须将EDTA·K2抗凝血充分混匀。6.血细胞分析仪测定最适温度为18～22℃，低于15℃或高于30℃，均可使细胞体积发生改变，影响各参数的结果。7.血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，当白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板的任何一项有明显升高或降低；白细胞分类出现异常结果（中间细胞群百分率≥8.0%）；红细胞、白细胞和血小板的任何一个直方图出现异常图形等情况，须用显微镜检查及分类。嗜酸性粒细胞直接计数【标本】末梢血或抗凝静脉血。【方法】直接计数法。【试剂】1.Hinkelmann液；2.乙醇-伊红稀释液；3.伊红-丙酮稀释液。【操作】1．小试管中加稀释液0.38ml。2．常法取末梢血20ul，加入管内混匀，待红细胞溶解后两侧充池。3．静置3～5min，用低倍镜（必要时用高倍镜）镜下计数10个大方格内嗜酸性粒细胞数。总数×20×106=嗜酸性粒细胞/L。【附注】1.血液稀释后应于1h内计数完毕。2.充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛。3.住院病人采集标本时间力求统一，以免受日间生理变化的影响。红细胞沉降率测定【标本】抗凝静脉血。【方法】魏氏法。【试剂】109mmol/L枸橼酸钠溶液。【操作】1.3mm×100mm试管1支，在2ml容量处刻上记号，加抗凝剂0.4ml。2.静脉采血后，取下针头，加血至刻度，旋转混合。3.用血沉管（300mm×2.5mm）吸取上述混匀血液至0刻度处，拭去管外附着的血液，将管垂直立在血沉架上。4.记时，室温中静置1h，观察血浆高度，以红细胞下沉的毫米数报告之。【附注】1.红细胞在单位时间内下沉的速度与血浆蛋白的量与质，血浆中脂类的量和质，红细胞的大小与数量，是否成串钱相聚以及血沉管的内径、清洁度、放置位置是否垂直，室温高低等因素都有关系。2.标本采集时应空腹。3.血液和抗凝剂的比例要准确。4.血沉管内径要标准（2.5mm），放置要垂直。5.做血沉的标本要在采集后3h内测定，并充分混匀。6.室温过低、过高和贫血时，对结果有影响。为此，血沉应尽量放在18～25℃室温下测定。室温过高时血沉加快，可以按温度系数校正。室温过低时血沉减慢，无法校正。网织红细胞计数【标本】末梢血或抗凝静脉血。【方法】百分计数法。【试剂】10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液或10g/L煌焦油蓝ACD溶液。【操作】1.于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。2.加入末梢血或静脉血2滴于上述试管中，混匀。3.静置15～20min后，取用1滴制成薄片。4.油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。【附注】1.活体染色时间不能过短，室温低时，放37℃温箱。2.网织红细胞也可用Miller窥盘计数法、荧光染色或流式细胞仪计数。嗜碱性点彩红细胞计数【标本】末梢血。【方法】百分计数法。【试剂】1.甲醇；2.碱性亚甲基蓝染液（保存2～3周）。【操作】1.按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。2.用碱性亚甲基蓝染液染色1～2min，水洗待干。3.用油镜计数1000个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数，以百分率报告。【附注】1.用碱性亚甲基蓝染液染色后，红细胞呈浅蓝绿色，嗜碱性点彩呈深蓝色。2.也可用瑞氏染色，嗜碱性点彩呈蓝黑色。3.由于点彩红细胞分布不匀，必要时扩大计数红细胞数。第二节体液及排泄物检查尿液检验尿常规检查【标本】新鲜尿液。【方法】化学试带法。【试剂】各型号尿液化学分析仪配套试带。【操作】详见自己实验室的尿液化学分析仪使用手册。【附注】1.尿常规检查使用尿液化学分析仪，目前能进行8～10项检测（PH、蛋白、葡萄糖、酮体、隐血、尿胆红素、尿胆素原、亚硝酸盐、比重、白细胞）。这些项目亦有相应的手工方法，详见有关资料。2.必须了解所用试带各膜块注意事项、药物干扰。3.要注意尿液化学分析仪测定结果与手工法的差异，必要时用手工法复查。4.尿液化学分析仪检测仅是一个过筛手段，当蛋白、隐血、白细胞等出现异常结果（如尿蛋白“＋”或以上）时，应进行镜检。5.尿液颜色、透明度等一般性状异常时也应报告。本－周氏（Bence-Jones）蛋白定性检查【标本】新鲜尿液。【方法】热沉淀反应法。【试剂】1.200g/L磺基水杨酸溶液；2.2mol/L醋酸盐缓冲溶液（pH4.9±0.1）。【操作】1.先将尿液用磺基水杨酸法作蛋白定性检查，如呈阴性反应，则可认为尿液标本中本－周氏蛋白阴性。2.取透明尿液4ml于试管中，再加入醋酸盐缓冲液1ml，混匀后，放置56℃水浴中15分钟。如有浑浊或出现沉淀，再将试管放入沸水中，煮沸3分钟，观察试管中浑浊或沉淀的变化，如浑浊变清、浑浊减弱或沉淀减少，均提示本-周氏蛋白阳性。若煮沸后，浑浊增加或沉淀增多，表明此尿液中还有其它蛋白质，此时应将试管从沸水中取出，立即过滤。如滤液开始透明，温度下降后浑浊，再煮沸时又透明，提示本-周氏蛋白为阳性。【附注】1.过多的本-周氏蛋白，在90℃以上不易完全溶解，故需与对照管比较，也可将尿液稀释后再测。2.煮沸过滤除去尿中白、球蛋白时，动作要迅速，并需保持高温，否则本-周氏蛋白也会滤去。尿乳糜定性检查【标本】新鲜尿液。【试剂】1.乙醚（AR）；2.苏丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩红染色液。【操作】1.取尿5～10ml，加乙醚2～3ml，混合振摇后，使脂肪溶于乙醚。静置数分钟后，2000r/min离心5min。2.吸取乙醚与尿液的界面层涂片，加苏丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩红染色液1滴。3.镜检观察是否有红色脂肪小滴。【附注】1.尿液中加少量饱和氢氧化钠，再加乙醚，有助于澄清。2.将分离的乙醚层隔水蒸干，若留有油状沉淀，也可加苏丹Ⅲ，镜检证实有无脂肪小滴。尿胆色素原定性试验【标本】新鲜尿液。【试剂】1.对二甲氨基苯甲醛试剂；2.饱和醋酸钠溶液；3.氯仿；4.正丁醇。【操作】1.在试管中，加入尿标本2ml及对二甲氨基苯甲醛试剂2ml，混合。2.立即加饱和醋酸钠溶液4ml，混合，加氯仿3ml，振摇混合后，上层水溶液呈红色者为阳性反应。3.阳性结果应用下法证实：如尿胆原含量多，用一次氯仿不能完全抽提尿胆原，应多次用氯仿抽提，直至氯仿层呈淡粉红色或无色为止，再观察上层水溶液色泽。如上层水溶液为红色时，再加正丁醇4ml抽提，如水溶液仍呈红色则证实尿中胆色素元为阳性。【附注】1.醋酸钠溶液必须为饱和液。2.当尿胆色素原浓度太高时，应将尿标本稀释25～100倍。3.尿液必须新鲜，不能久置。尿苯丙酮酸定性试验【标本】新鲜尿液。【方法】三氯化铁法。【试剂】1.100g/L三氯化铁液；2.磷酸盐沉淀剂。【操作】1.尿液4ml加磷酸盐沉淀剂1ml，混匀，静置3min，如出现沉淀，可用滤纸过滤或离心除去。2.滤液中加入浓盐酸2～3滴和100g/L三氯化铁溶液2～3滴，每加1滴立即观察颜色变化。以尿液显蓝绿色并持续2~4min，为阳性。【附注】1.尿中若含酚类药物（如水杨酸制剂）及氯丙嗪，也可与氯化铁结合显色，试验前应停用此类药物。胆红素也可造成假阳性。2.小儿出生后6周内不易查出。故于出生6周后检查为宜。3.大多数苯丙酮尿症患者的尿液可出现阳性。但约1/4～1/2病例可能会漏检4.亦可采用2，4-二硝基苯肼法。尿沉渣检查【标本】新鲜尿液（最好采集清晨中段尿）。【方法】显微镜检查法。【操作】1.取刻度离心管，倒入混合后的新鲜尿液10ml，1500r/min离心5min。2.弃去上层清液，留下0.2ml沉渣，轻摇离心管，使尿沉渣有形成分充分混匀。3.取尿沉渣0.02ml，滴在载玻片上，用18mm×18mm的盖玻片覆盖。4.镜检观察，用10×10镜头，观察其中有形成分的全貌及管型。用10×40镜头观察鉴定细胞成分及计算数量，应观察10个视野所见最低和最高值，记录结果。管型用高倍镜鉴定，但计数数量按低倍镜观察20个视野，算出一个视野的平均值，记录结果。尿结晶和盐类数量以每一高倍视野＋、2＋、3＋、4＋报告。【附注】1.清晨空腹第一次尿（一般情况应采集中段尿），应在1h内送检。2.见到各种上皮细胞也应报告，报告方式参照白细胞。3.亦可采用染色尿沉渣镜检。尿沉渣定量检查【标本】新鲜晨尿。【方法】一小时尿沉渣计数法。【操作】1.标本收集：患者先排尿弃去，准确收集3h尿液于干燥容器内送检（标本留取时间5:30～8:30）。2.准确测量3h尿量，充分混合。取混匀尿液10ml，置刻度离心管中，1500r/min离心5min，用吸管吸弃上层尿液9ml，留下1ml，充分混匀。吸取混匀尿液1滴，注于血细胞计数板内。细胞共数10个大方格，管型共数20个大方格。最终计算出红细胞/h、白细胞/h、管型/h。【附注】1.尿液应新鲜，PH应在6以下。2.尿液比重最好在1.026以上。3.如尿液中含多量磷酸盐时，应加少量稀醋酸液（切勿加多），使其溶解；含大量尿酸盐时，应加温使其溶解。4.亦可采用尿沉渣定量分析板或尿沉渣自动分析仪进行尿沉渣定量检查，详见有关资料。绒毛膜促性腺激素检测【标本】新鲜尿液。【方法】金标抗体检测法。【操作】见试剂盒说明书。【附注】若质控点和测定点均不呈现红色，表示试剂失效。粪便检验粪便的显微镜检查【标本】新鲜粪便。【方法】直接涂片镜检法。【操作】1.洁净玻片上加等渗盐水1～2滴，选择粪便的不正常部分，或挑取不同部位的粪便做直接涂片（最好取大玻片，制成涂片后，应覆以盖片。涂片的厚度以能透过印刷物字迹为准）检查。2.在涂片中如发现疑似包囊，则在该涂片上滴加1滴碘液，在高倍镜下仔细鉴别，如仍不能决定时，可取全量粪便浓缩法检查。隐血试验【标本】新鲜粪便。【方法】免疫学检测法。【操作】取一片洁净干燥的载玻片，滴加2～3滴蒸馏水，取粪便少许，调成均匀混悬液。取粪便隐血试纸条，按说明书操作，将试纸条的反应端浸湿。在5min内观察结果。以反应线及质控线均呈蓝色带为阳性。【附注】1.若两条线均不显色，说明试纸条失效。2.本法由于间断性出血或出血在粪便中分布不均等因素，可造成假阴性结果。3.本法由于药物等原因，对正常人检查有时会得到阳性结果。4.亦可采用化学试带法、邻甲联苯胺法、愈创木酯法等。收集标本前3日应禁食动物性食物及富含叶绿素食物、铁剂、中药。但本法不受动物血红蛋白的干扰，试验前不须禁食肉类。粪胆素检查【标本】新鲜粪便。【方法】氯化高汞煮沸法。【试剂】饱和氯化高汞溶液。【操作】1.于小试管内置粪便一小块，加饱和氯化高汞溶液数毫升。2.将粪块调匀，加热煮沸3min，立即观察颜色反应。【附注】1.结果不易判定时，应注意粪便颜色，必要时以盐水代替试剂做空白对照。2.当粪便颗粒经煮沸后如有红色又有绿色出现，说明标本内既含粪胆素又含胆红素，常见于肠炎、腹泻等。脑脊液检验潘氏（Pandy）球蛋白定性试验【标本】新鲜脑脊液。【试剂】5%苯酚溶液（棕色瓶内保存）。【操作】取试剂2～3ml，置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液1～2滴，衬以黑色背景，立即观察结果，报告阴性或阳性及阳性的程度。细胞计数【标本】新鲜脑脊液。【试剂】1.细胞计数板；2.红细胞稀释液；3.冰乙酸；4.1%冰乙酸。【操作】1.细胞总数：（1）澄清脑脊液：混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为