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上表为MS培养基配方1号母液NH4NO341.25g定容至500mL,为50倍母液,取20mL/L。KNO347.5gMgSO4•7H2O9.25g2号母液CaCl2•2H2O22g(或CaCl216.6g)定容至500ml,为100倍液,取10ml/L。3号母液KH2PO48.5g定容至500ml,为100倍液,取10ml/L。4号母液Na2-EDTA1.865g定容至500ml,为100倍液,取10ml/L,pH=5.5(8点1MNaOH)说明:将两种药品分别在约230ml重蒸水中加热搅拌,待其完全溶解后混合两种溶液,再加热30min左右,使Fe与EDTA稳定螯合,调pH值至5.5,加重蒸水定容至500ml,盛于棕色瓶中。FeSO4.7H2O1.39g5号母液KI41.5mg定容至500ml,为100倍液,取10ml/L。H3BO3310mgMnSO4.4H2O(MnSO4.H2O)1115mg(845mg)ZnSO4.7H2O430mgNa2MoO4.2H2O12.5mgCuSO4.5H2O1.25mgCoCl2.6H2O1.25mg6号母液烟酸25mg盐酸吡哆醇(B6)25mg盐酸硫脂素(VB1)5mg甘氨酸100mg7号母液肌醇5g注:配制每种母液时,都应按药品顺序依次溶化后再加入后一种药品。每种母液分别贴上标签,注明母液编号,倍数,配制日期,于4度冰箱中冷藏,4度下可保存2月,如有霉菌或沉淀时不能使用。加完母液,蔗糖30g/L,定容,调pH值至5.8。加琼脂糖7-8g/L。细菌培养基YEB培养基(A4,R1000,C58C1)牛肉浸膏(beefextract)5.0g/LMgSO4储备液:2×10-3MMgSO4.7H2O(4.9296g/50ml)固体培养基:Agar12-15g/LpH=7.2酵母粉(yeastextract)1.0g/L蛋白胨(peptone)5.0g/L蔗糖5.0g/LMgSO4溶液5ml/LLB培养基(E.coli)HB101酵母浸出液(yeastextract)5g/LAgar12-15g/LpH=7.0蛋白胨(tryptone)10g/LNaCl10g/LYEP培养基(A.t)LBA4404酵母浸出液10g/LAgar12-15g/LpH=7.0蛋白胨10g/LNaCl5g/L高压灭菌,不加抗生素,倒平板之前加相应抗生素。注:应在培养接种前1-2h从冰箱中取出平板(细菌),细菌在37℃温育时会“发汗”,导致细菌克隆在平板表面交互扩散而增加交叉污染的机会,为避免这一问题,可拭去平皿内部的冷凝水,并把平板倒置于37℃温育,2小时方可使用,也可快速甩一下平皿除去冷凝水。植物激素母液配制1.0.05%2.4-D50mg2.4-D加入2-5ml95%乙醇中微热溶解,冷后定容至100ml,棕色瓶中备用。0.05%NAA,GA,IAA配法同2.4-D0.05%6-BA50mg6-BA以少量HCl(0.5N)微热溶解,冷却室温定容至100ml。?0.05%6-FA(KT)0.05%KT0.05%ZT(玉米素)配法同6-BA。实验室常用抗生素配制氨苄青霉素(Amp)水溶超滤贮存浓度50mg.mL-1羰苄青霉素(Cab)水溶超滤贮存浓度50mg.mL-1四环素(Tet)溶入乙醇超滤贮存浓度5mg.mL-1卡那霉素(Kan)水溶超滤贮存浓度10mg.mL-1氯霉素(Cm)溶入乙醇超滤贮存浓度34mg.mL-1利福平(Rif)溶于甲醇超滤乙酰丁香酮(AS)溶于DMSO超滤-20℃避光保存链霉素(Str)水溶超滤头孢霉素(Cef)水溶超滤潮霉素(hygr)将原溶液超滤,不需配制100mg/ml卡那霉素(sigma):取100mg定容至1ml,用0.22um微孔滤膜过滤除菌。常以10-50ug/ml为工作浓度,100ug/ml用于培养细胞的杀菌。IPTG:1g溶于5ml引物稀释:干粉离心后根据管体所注明的量溶于灭菌去离子水中,制成浓度为100μmol/L的贮存液,再将引物贮存液稀释10倍后使用。PEG6000:如50%PEG6000,取50gPEG6000固体,加适量水用搅拌器搅拌,定容至100ml。DEPC水:剧毒,致癌,通风厨中操作,戴好口罩手套。1mlDEPC原液+999ml二蒸水,振荡过夜至溶解。可以重复使用。75%乙醇:用于DNA、RNA:需用DEPC水配制,DEPC水高压灭菌去DEPC25ml+75ml无水乙醇;普通:用天平称量,水比重为1,无水乙醇比重为0.785。杀菌:95%医用乙醇加水,用酒精计配制。0.1MCaCl2:0.22μm微孔滤膜过滤除菌组培用6-BA(索莱宝,园艺所用上海致化):取0.025g,加入适量水,滴入3-4滴NaOH(不要加太多)使固体粉末溶解,定容至25ml。组培用NAA:1mg/ml。组培用NaOH:10g定容至100ml。提质粒用SDS碱裂解溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA(pH8.0)(如配制50ml,则需葡萄糖0.4504g、1MTris-HCl(pH8.0)1.25ml、0.5MEDTA1ml)。高压蒸汽灭菌15min,4℃保存。提质粒用SDS碱裂解溶液Ⅱ:0.2NNaOH,1%(m/v)SDS。(如配制1ml,则需2NNaOH100,10%SDS100μl,定容至1ml)。现用现配,室温使用。提质粒用SDS碱裂解溶液Ⅲ:100ml中有5M乙酸甲60.0ml,冰乙酸11.5ml,H2O28.5ml。配制50ml时需5M乙酸甲30.0ml(14.721g定容至30ml),冰乙酸5.75ml,H2O14.25ml。保存于4℃,用时置于冰浴中提前预冷。
本文标题:溶液配制
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