微生物

临床微生物学和微生物学检验11绪论简答题1.简述临床微生物检验的思路与原则。2.简述临床微生物学的性质与任务。[参考答案]问答题1.答：（1）确保临床标本可靠；（2）全面了解机体正常菌群；（3）保证检验质量、快速准确提供信息；（4）微生物学定性、定量和定位分析，并结合病情（三定一结合）；（5）加强与临床联系。2.答：（1）研究感染性疾病的病原体特征；（2）提供快速、准确的病原学诊断；（3）指导临床合理使用抗生素；（4）对医院感染进行监控。第三章细菌感染的病原学诊断名词解释1.培养基2.吲哚试验3.菌落4.MR试验5.脲酶试验6.O/F试验7.氧化酶试验8.悉生动物9.无菌动物问答题1.简述革兰染色原理、方法及意义。2.简述培养基的概念及种类。3.简述L型细菌的概念、鉴定要点。4.简述临床感染性疾病实验诊断的要求包括哪些？5.简述临床感染性疾病诊断试验的选择原则？6.简述临床标本的采集的一般原则。[参考答案]名词解释1.培养基：是适合于细菌需要的各种营养物质配置而成的营养基质。2.吲哚试验：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚，当加入吲哚试剂后则生成红色的玫瑰吲哚，为阳性。3.菌落：是指单个细菌在固定点上生长繁殖所形成的细菌集团。24.MR试验：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，并进一步分解产生甲酸、乙酸、乳酸等小分子酸，使培养基的pH下降至4.5以下，当培养基中加入甲基红试剂时则成红色，为甲基红试验阳性，如大肠埃希菌。5.脲酶试验：是指某些细菌具有尿素分解酶，能够分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性，可用于变形杆菌的鉴定。6.O/F试验：细菌在分解糖过程中需要分子氧参加的为氧化型。发酵型细菌在有氧与无氧条件下均能分解葡萄糖。不分解糖的细菌为产碱型。利用此试验区分细菌的代谢类型。7.氧化酶试验：是细菌细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C氧化对苯二胺，生成有色的醌类化合物。8.无菌动物：是通过剖腹产取出后立即转入到无菌、恒温、恒湿条件下，用无菌饲料饲养的动物。9.悉生动物：给无菌动物引入已知5~17种正常肠道菌丛培育而成的动物。是研究传染病的重要动物模型，也是研究肠道微生态及其他生理功能的动物模型。问答题1.答：原理：（1）复合物学说：G+菌细胞壁比G-菌肽聚糖层数多；而G-菌细胞壁脂类比G+菌含量多；（2）等电点学说：G+菌pI（2~3）低于G-菌pI（4~5）。G+菌与结晶紫染料结合牢固；（3）化学通透性学说。方法：标本涂片、干燥、固定结晶紫初染1min碘液媒染1min95％乙醇脱色30s至1min稀释的石炭酸复红或沙黄复染1min。结果：G+菌呈紫色，G-菌呈红色。意义：（1）鉴别细菌；（2）指导临床用药；（3）了解细菌致病性。2.答：概念：培养基是人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养基质。可用于细菌的分离纯化培养、传代、菌种保存及细菌的生理、生化特性的研究。种类：（1）根据用途分为：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、特殊培养基。（2）根据物理性状分为：液体培养基、固体培养基、半固体培养基。3.答：L型细菌是细胞壁缺陷，而使其生物学特性发生改变的细菌、真菌等微生物的总称，是在不利环境下种系保存的一种形式。鉴定要点：（1）形态与染色特点：具有明显的多形性。细胞壁染色可见缺壁浓染的细菌。（2）生长情况：分离培养需用高渗低琼脂培养基（200g/L蔗糖溶液、10g/L琼脂，pH为7.6~7.8）；增菌培养可呈微浑浊或呈颗粒状沉淀和沿壁生长。分离培养的血平板无菌生长，L型培养基颗粒型、油煎蛋样菌落或丝状菌落。（3）返祖试验：牛肉汤琼脂或L型平板传代。临床微生物学和微生物学检验334.答：（1）诊断对象和诊断目的；（2）诊断试验选择；（3）常用诊断流程。5.答：（1）选择有鉴定价值的试验；（2）选择简易、快速、方便的试验；（3）综合考虑试验的敏感性和特异性。6.答：（1）早期采集；（2）无菌采集；（3）根据目的菌的特性用不同的方法采集；（4）采集适量标本；（5）安全采集。第六、七章球菌名词解释1.SPA2.MRS3.血浆凝固酶4.抗链“O”试验5.CRP6.CONS问答题1.试述血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。2.一份脓汁标本中疑有金黄色葡萄球菌应怎样进行微生物学检验？3.一份血液标本中疑有A群链球菌，应怎样进行微生物学检验？4.怎样进行淋病奈瑟菌的微生物学检查？5.如何快速诊断流脑和淋病?6.男女淋病患者在症状、诊断方面有何异同?[参考答案]名词解释1.SPA：即葡萄球菌A蛋白（StapHylococalProteinA），是葡萄球菌细胞壁的一种蛋白成分，可与人IgG（IgG1、IgG2、IgG4）的Fc段非特异性结合而不影响Fab段的结合活性，具有抗吞噬作用。可用作协同凝集试验试剂。2.MRS：耐甲氧西林葡萄球菌，它是携带mecA基因、编码低亲和力青霉素结合蛋白导致耐甲氧西林、所有头孢菌素、碳青酶烯类、青霉素类+青霉素酶抑制剂抗生素的葡萄球菌。3.血浆凝固酶：是金黄色葡萄球菌产生的一种侵袭性酶，其作用是使血浆凝固，分为结合型和游离型两种。4.抗链“O”试验：ASO试验是测定病人血清中抗链球菌溶血素“O”抗体的效价，作为风湿性关节炎、肾小球肾炎等疾病的辅助诊断。常用溶血抑制试验测此抗体。效价在1:500以上或逐步升高即有诊断参考价值。5.C反应蛋白（C-ReactiveProtein,CRP）：是人血清中所含的一种蛋白质，可与肺炎链球菌的菌体多糖抗原（C物质）发生沉淀反应，它不是抗体，在炎症活动期（如风湿热病人）CRP含量增多。46.CONS：为血浆凝固酶试验阴性的葡萄球菌。问答题1.答：原理：金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，其作用是使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而使血液凝固。血浆凝固酶分为结合型和游离型两种。（1）结合型血浆凝固酶结合在细胞壁上，直接作用于纤维蛋白原使之转化为纤维蛋白，环绕菌体形成凝块，可用玻片法检测；（2）游离型血浆凝固酶被分泌到菌体外，可激活血浆凝血酶原，使之转化为凝血酶，后者作用于纤维蛋白原使之转化为纤维蛋白，导致血浆凝固，可用试管法检测。方法：（1）玻片法:取未稀释的兔血浆和生理盐水各1滴分别滴于载玻片上，挑取菌落分别与它们混合，立即观察结果。细菌在血浆中凝集成块，生理盐水中均匀浑浊为试验阳性，两者均浑浊为试验阴性；（2）试管法:取3支试管各加入0.5ml1:4稀释的新鲜兔血浆，再分别加入0.5ml待检菌、阳性对照菌、阴性对照菌的肉汤培养物，35℃孵育，每30min观察1次，观察3h。检测菌试管内血浆凝固呈胶冻状为试验阳性，反之不凝固为阴性。2.答：标本采集：注意无菌采集、用药前采集。检验程序：参见教材检验方法：（1）取脓汁标本做直接涂片革兰染色；（2）同时接种血平板进行分离培养；（3）经35℃18~24h培养，观察菌落特点，挑取菌落做革兰染色、生化鉴定试验、血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验；（4）根据试验结果报告。注意：加做试验：葡萄球菌耐热核酸酶试验阳性；与链球菌区别可做触酶试验，葡萄球菌阳性，链球菌阴性。鉴定依据：（1）直接涂片革兰染色为G+葡萄状排列球菌；（2）血平板上形成透明溶血环；（3）血平板上产生脂溶性的金黄色色素；（4）血浆凝固酶试验阳性；（5）甘露醇发酵试验阳性。报告方式：“培养出金黄色葡萄球菌”。3.答：标本采集：注意无菌及用药前采集，如已用药需加入抗菌药物拮抗剂。进行微生物学检查的血液标本一般不加入抗凝剂，需尽快接种以防止血液凝固。通常血液标本中细菌含量少不做直接涂片染色。检验程序：参见教材。检查方法：（1）取血液标本接种酚红葡萄糖肉汤进行增菌培养；（2）经35℃培养每天观察一次连续7天。如发生变化,涂片、革兰染色，并接种血平板进行分离培养；（3）经35℃临床微生物学和微生物学检验5518～24h培养，观察菌落特点，挑取可疑菌落做革兰染色和生化鉴定试验。最后根据试验结果进行报告。主要鉴定试验：杆菌肽敏感试验、链激酶试验、血清学分类鉴定试验。试验结果：（1）酚红葡萄糖肉汤进行增菌肉汤变黄（分解葡萄糖产酸），上面澄清下面沉淀，有溶血；（2）涂片染色见G+链状排列球菌；（3）血平板上形成透明溶血环；（4）杆菌肽敏感试验阳性；链激酶试验阳性。报告方式：“经**天培养出A群链球菌”。4.答：标本采集：注意尽快接种，保温、保湿。检验程序：见教材检查方法：（1）直接涂片检查男性尿道分泌物如发现脓细胞内有G-双球菌结合临床即可作出早期诊断。女性则需进一步鉴定；（2）分离培养：常用巧克力色血平板或MTM、ML、NYC等培养基37℃5%～10%CO2环境下培养18～24h形成灰褐色、光滑、半透明、露滴状的、圆形、凸起菌落；（3）鉴定试验：氧化酶试验、触酶试验阳性；发酵葡萄糖产酸，不发酵其他糖类。5.答：（1）直接涂片检查发现白细胞内有G-双球菌有一定意义；（2）免疫学检查方法有直接凝集试验、免疫荧光法等；（3）分子生物学检查方法有核酸杂交和PCR法等。6.答：在症状方面：男性表现急性尿道炎，症状明显；女性表现急性宫颈炎，症状不明显，若出现急性尿道炎则症状明显。在诊断方面：男性患者尿道脓汁涂片镜检见中性粒细胞内有G-双球菌有诊断价值；而女性则需进一步鉴定。第八章肠杆菌科名词解释1.ETEC2.EIEC3.EHEC4.EAggEC5.EPEC6.LT7.ST8.Vi抗原9.V-W变异10.Widaltest11.Vero毒素12.鼠毒素13.Weil-Felixreaction14.迁徙生长现象15.SS琼脂16.KIA17.MIU问答题1.一患者腹泻、血便、腹痛，便中白细胞少见，如疑为大肠埃希菌O157H7感染，应该如何进行微生物学检查？62.疑为乙型副伤寒沙门菌引起的肠热症患者，应该如何对其进行微生物学检查？3.一疑为变形杆菌尿路感染的患者，应该如何对其进行微生物学检查？4.试比较大肠埃希菌、福氏志贺菌、丙型副伤寒沙门菌在KIA上35℃18h培养产生的现象并解释原因。5.有一疑为福氏2a志贺菌感染的腹泻患者，应如何对其进行微生物学检查？6.简述肠杆菌科共同特征。7.试述大肠埃希菌、痢疾志贺菌在麦康凯（MAC）培养基、中国蓝培养基、伊红美蓝培养基上的菌落特点，并说明原因。[参考答案]名词解释1.ETEC：肠产毒型大肠埃希菌，在发展中国家引起儿童和旅行者腹泻。该菌能产生由质粒编码的肠毒素即ST和LT。2.EIEC：肠侵袭型大肠埃希菌，引起的腹泻症状类似于志贺菌，主要侵入肠粘膜,在肠粘膜上皮细胞内繁殖，并破坏上皮细胞。3.EHEC：肠出血型大肠埃希菌，可产生由噬菌体编码的两种毒素(SLT1和SLT2)。如大肠埃希菌O157H7。4.EaggEC：肠凝集型大肠埃希菌，不产生ST、LT，没有侵袭力，不能用O:H血清分型，可粘附于Hep2和Hela细胞的大肠埃希菌菌株。5.EPEC：肠致病型大肠埃希菌，是世界各地婴儿腹泻的重要病原菌。6.LT：heatlabiletoxin,不耐热肠毒素，加热65℃30min被破坏。7.ST：heatstabletoxin,耐热肠毒素，100℃10～20min不被破坏。8.Vi抗原：即毒力抗原，是一种不耐热的酸性多糖聚合物，加热60℃30min或经石炭酸处理即被破坏,经人工培养易丧失。如伤寒沙门菌和丙型副伤寒沙门菌常带有此抗原。9.V-W变异：沙门菌失去Vi抗原的变异。10.Widaltest：是用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H抗原检测受检血清中有无相应抗体的半定量试管内凝集试验。用于辅助诊断伤寒、副伤寒引起的肠热症。11.Vero毒素：志贺毒素因对Vero细胞有毒性作用，因而得名。12.鼠毒素（murinetoxin）：鼠疫耶尔森菌产生的一种称为T抗原的可溶性蛋白，对小鼠和大鼠有剧烈毒性。主要作用于心血管系统（抑制心肌细胞线粒体的呼吸作用）引起不可逆性休克与死亡。临床微生物学和微生物学检验7713.外斐反应：变形杆菌属的某些菌株如OX19、O